VEGF、HIF-1α在不同前列腺病變組織中的表達及臨床意義

李 偉，張華東，李自強，俞志鋼，牛曉東，李志強

近年來，我國前列腺癌發(fā)病率呈明顯上升趨勢。上海市統(tǒng)計數(shù)據(jù)顯示，前列腺癌的發(fā)病率從1991年的2．9/10 萬上升到2001 年的12．14/10 萬［1］，主要死亡原因是癌細胞浸潤轉(zhuǎn)移。因此，研究前列腺癌的發(fā)生、發(fā)展機制和分子生物學基礎(chǔ)具有重要的理論指導意義和臨床應用價值。本文主要探討血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、缺氧誘導因子-1α(HIF-1α)在前列腺癌中的表達及臨床意義，為研究前列腺癌的發(fā)生、發(fā)展機制及判斷預后提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇251醫(yī)院2008年2月～2010年3月經(jīng)病理診斷為前列腺增生的組織標本30例、前列腺上皮內(nèi)瘤變標本30例和前列腺癌標本70例，平均年齡65歲(55～76歲);術(shù)前均未接受放化及激素治療。Gleason分級［2］:2～4分為高分化，5～6分為中分化，7～10分為低分化;其中前列腺癌標本中高－中分化34例，低分化36例。pTNM分期［2］:Ⅰ-Ⅱ期31例，Ⅲ-Ⅳ期39例。骨轉(zhuǎn)移38例，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移49例。

1.2 試劑 VEGF為即用型鼠抗人單克隆抗體(H-42，SC15393)購自 SantaCruz公司，HIF-1α為濃縮型鼠抗人單克隆抗體(ZM-0342)、免疫組化試劑盒及DAB底物顯色劑均購自福州邁新生物技術(shù)有限公司。HIF-1α鼠抗人單克隆抗體濃度為1∶150。

1.3 方法 組織標本經(jīng)甲醛溶液常規(guī)固定，石蠟包埋，連續(xù)切片4μm，裱于經(jīng)烷基酚聚乙烯醚(APES)處理的載玻片上，65℃烤箱烤片過夜，防止脫片，備用。采用EnVision兩步法，步驟參照檢測試劑盒說明書進行。

1.4 結(jié)果判斷 VEGF表達于胞漿中，少數(shù)細胞核中也有表達，以細胞呈清晰的棕色或棕褐色為陽性。HIF-1α以胞漿或胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性。綜合染色強度和陽性細胞占總細胞數(shù)的百分比進行半定量處理:染色弱但明顯強于陰性對照者為1分，染色清晰者為2分，染色強者為3分;陽性細胞數(shù)10% ～50%為2分，51% ～80%為3分，≥81%為4分。上述兩項評分相加，不論染色強度，陽性細胞數(shù) ＜10%為(－)，3分為(+)，4～5分為(++)，6～7 分為(+++)［3］。

1.5 統(tǒng)計學方法 應用SPSS 17．0統(tǒng)計軟件處理，計數(shù)資料以率(%)表示，采用χ2檢驗，相關(guān)性采用Spearman相關(guān)性分析，α=0．05為檢驗水準。

2 結(jié)果

2.1 VEGF、HIF-1α在不同前列腺病變組織中的表達情況 VEGF與HIF-1α在前列腺上皮內(nèi)瘤變組織和前列腺癌組織中呈陽性表達，且二者的陽性表達率前列腺癌組織明顯高于前列腺增生和前列腺上皮內(nèi)瘤變組織，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0．01)，在同種病變中陽性表達率比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0．05)。見圖1、2，表1。

圖1 血管內(nèi)皮生長因子在不同前列腺病變組織的免疫組化結(jié)果(EnVision×100)

圖2 缺氧誘導因子-1α在不同前列腺病變組織的免疫組化結(jié)果(EnVision×100)

表1 血管內(nèi)皮生長因子和缺氧誘導因子-1α在不同前列腺病變組織中的表達

2.2 VEGF、HIF-1α表達與前列腺癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系 VEGF及HIF-1α表達與前列腺癌Gleason分級、TNM臨床分期、骨及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P＜0．01，P ＜0．05)，與年齡無關(guān)(P ＞0．05)。見表2。

2.3 VEGF與HIF-1α表達的相關(guān)性 在前列腺癌組織中，VEGF與HIF-1α表達均陽性38例，VEGF陽性而HIF-1α陰性5例，VEGF與HIF-1α均陰性20例，VEGF陰性而 HIF-1α陽性 7例，VEGF與HIF-1α 的表達呈正相關(guān)(r=0．63，P ＜0．01)。

表2 血管內(nèi)皮生長因子和缺氧誘導因子-1α的表達與前列腺癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系

3 討論

3.1 VEGF在不同前列腺病變組織中的表達及與前列腺癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系 VEGF主要由癌細胞產(chǎn)生，是一個高度特異的血管內(nèi)皮細胞有絲分裂原，能特異性刺激內(nèi)皮細胞增殖，還具有增加血管通透性作用［4］。VEGF的產(chǎn)生導致血管生成加快，出現(xiàn)大量結(jié)構(gòu)和功能異常的腫瘤血管，加速腫瘤形成。有資料表明，VEGF在抑制血管內(nèi)皮細胞凋亡的同時還可抑制乳腺癌細胞的凋亡，導致腫瘤對內(nèi)分泌治療及化療的抵抗［5］。本研究發(fā)現(xiàn)，前列腺癌組織中VEGF陽性表達率明顯高于前列腺增生和前列腺上皮內(nèi)瘤變組織。提示在前列腺增生、前列腺上皮內(nèi)瘤變、最后到前列腺癌的演變過程中，VEGF表達陽性率逐漸增高，提示VEGF的高表達可能對前列腺癌的發(fā)生、發(fā)展有一定的作用。通過分析VEGF與前列腺癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系可知，VEGF的表達與前列腺癌的Gleason分級、TNM臨床分期、骨及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，與年齡無關(guān)，提示VEGF高表達預示預后不良。促進腫瘤發(fā)生、發(fā)展的機制可能是VEGF高表達使腫瘤血管生成增多，使腫瘤細胞得到更多的營養(yǎng)而迅速增殖，從而促進癌細胞的浸潤和轉(zhuǎn)移［6］。因此，檢測VEGF表達可為臨床判斷前列腺癌浸潤、轉(zhuǎn)移等生物學行為提供理論參考。

3.2 HIF-1α在不同前列腺病變組織中的表達及與前列腺癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系 HIF-1α作為HIF-1中唯一的氧調(diào)節(jié)亞單位，在胞漿內(nèi)處于失活狀態(tài)，需與配體結(jié)合并被轉(zhuǎn)運到胞核內(nèi)，與HIF-1β形成具有功能的二聚體才能激活轉(zhuǎn)錄，發(fā)揮生物學功能。已有研究發(fā)現(xiàn)，在結(jié)腸癌、乳腺癌、胰腺癌等惡性腫瘤中均有 HIF-1α 高表達［7-9］。Zhong等［10］采用免疫組化技術(shù)分析了179例包括19種類型腫瘤標本，發(fā)現(xiàn)其中13種HIF-1α呈不同程度的表達，而相應正常組織及良性病變中無表達，提示在良惡性腫瘤中HIF-lα的表達有顯著差異。本研究顯示，前列腺癌組織中HIF-1α陽性表達率明顯高于前列腺增生和前列腺上皮內(nèi)瘤變組織，且其表達與前列腺癌的Gleason分級、TNM臨床分期、骨及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，而與年齡無關(guān)。提示HIF-1α的高表達參與了前列腺增生癌變的過程，且預示預后不良。

3.3 VEGF與HIF-1α在前列腺癌組織中表達的相關(guān)性 本研究顯示，VEGF與HIF-1α表達呈正相關(guān)關(guān)系。提示VEGF、HIF-1α之間可能存在協(xié)同作用，其機制是缺氧時HIF-1α與缺氧反應元件結(jié)合介導VEGF表達的轉(zhuǎn)錄激活，HIF-1α的高表達可增加VEGF mRNA的穩(wěn)定性，并對VEGF表達的上調(diào)有促進作用［11］。

綜上所述，VEGF、HIF-1α參與了前列腺癌的演變過程，兩者均與前列腺癌的Gleason分級、TNM臨床分期、骨轉(zhuǎn)移及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，所以檢測它們的表達能在一定程度預測患者預后，同時也為前列腺癌的臨床治療開辟新思路。

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