非小細(xì)胞肺癌微管蛋白-Ⅲ表達(dá)與紫杉醇療效的關(guān)系探討

張繼朋，胡曉璐，李高峰，陳瑞彬

(昆明醫(yī)學(xué)院第三附屬醫(yī)院，云南省腫瘤醫(yī)院胸外科，昆明650118)

肺癌的發(fā)病率和致死率已躍居各項(xiàng)腫瘤之首，嚴(yán)重危害人類的健康。化療在局部晚期非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)患者的治療中起至關(guān)重要的作用，但受藥物的耐藥性限制［1］。β微管蛋白-Ⅲ是近年來發(fā)現(xiàn)的耐藥蛋白，相關(guān)研究表明，其表達(dá)高低與紫杉醇的療效有一定關(guān)系［2］。該項(xiàng)研究采用免疫組化法檢測(cè)63例NSCLC患者的β微管蛋白-Ⅲ表達(dá)水平，探討其與紫杉醇療效關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取云南省腫瘤醫(yī)院胸外科2010年6月至2011年6月收治的63例不能手術(shù)，接受以紫杉醇為主化療的Ⅲa期以上的NSCLC患者。男37例，女26例，男女比例1.4∶1，平均年齡61歲。鱗癌29例，腺癌34例。分化程度:高分化19例，中-低分化44例。KPS評(píng)分≥80分。標(biāo)本足夠進(jìn)行免疫組化檢測(cè)(標(biāo)本來源纖維支氣管鏡、淋巴結(jié)活檢、CT引導(dǎo)下穿刺活檢)。以肺大泡，肺隔離癥等11例患者作為對(duì)照組。入院時(shí)完成腦MRI、胸部CT、腹部CT、骨單光子發(fā)射型計(jì)算機(jī)斷層顯像(SPECT)，常規(guī)檢查心、肺、肝、腎等功能，以明確臨床分期?；煵捎肨P方案:紫杉醇175 mg/m2第1天，順鉑50 mg/m2第1～3天。每4周為1個(gè)療程，共治療4個(gè)療程。

1.2 試劑和免疫組化染色方法 一抗兔抗人β微管蛋白-Ⅲ購(gòu)自美國(guó)Cell Signal公司，SP免疫組織化學(xué)試劑盒購(gòu)于福州邁新有限公司。采用免疫組化SP法檢測(cè)β微管蛋白-Ⅲ在組織中的表達(dá)，嚴(yán)格按照試劑盒操作規(guī)程進(jìn)行。

1.3 染色結(jié)果判定 以病理科兩位副主任以上醫(yī)師進(jìn)行雙盲法閱片，β微管蛋白-Ⅲ蛋白的表達(dá)位于細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)(包括核周)，出現(xiàn)清晰黃色顆粒著色為陽(yáng)性細(xì)胞。根據(jù)陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞所占比例分級(jí):陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＜5%為0分，5%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，＞75%為4分;再按染色強(qiáng)度打分:無色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分;兩項(xiàng)得分相乘，并取其平均值。按照分?jǐn)?shù)分為4個(gè)等級(jí)0～1分為(－)，2～4分為(+)，5～8分為(++)，9分以上為(+++)，(+)以上為陽(yáng)性表達(dá)［3］。

1.4 療效評(píng)價(jià)方法 按照WHO實(shí)體瘤標(biāo)準(zhǔn)評(píng)定療效分為完全緩解、部分緩解、疾病穩(wěn)定、疾病進(jìn)展。以完全緩解+部分緩解為有效。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件包對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 β微管蛋白-Ⅲ在正常肺組織和肺癌組織中的表達(dá) 在63例NSCLC患者中 β微管蛋白-Ⅲ在NSCLC中陽(yáng)性表達(dá)率65.08%(41/63)，高于對(duì)照組的陽(yáng)性表達(dá)率27.27%(3/11)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=5.553，P＜0.05)。

2.2 β微管蛋白-Ⅲ的表達(dá)與化療療效之間的關(guān)系63例患者均順利完成治療，完全緩解為12例，部分緩解為31例，有效率為68.25%(43/63)。β微管蛋白-Ⅲ中、低表達(dá)組完全緩解10例，部分緩解28例，有效率為86.38%(38/44)，高表達(dá)組完全緩解2例，部分緩解3例，效率為26.31%(5/19)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=18.909，P＜0.05)。

2.3 β微管蛋白-Ⅲ的表達(dá)與臨床特征之間的關(guān)系β微管蛋白-Ⅲ表達(dá)與患者性別、是否吸煙及病理類型無明顯相關(guān)性(P＞0.05)。β微管蛋白-Ⅲ表達(dá)陽(yáng)性率中-低分化者高于高分化者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)(表1)。

表1 β微管蛋白-Ⅲ的表達(dá)與臨床特征之間的關(guān)系 ［例(%)］

3 討論

β微管蛋白是構(gòu)成細(xì)胞骨架的主要成分之一，可在正常組織表達(dá)，如睪丸組織，也可在肺癌、前列腺癌等組織中表達(dá)，在有絲分裂、細(xì)胞器組成與運(yùn)輸及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等方面發(fā)揮重要作用［4-5］。β微管蛋白-Ⅲ是其中一個(gè)亞型，Kavallaris等［6］研究NSCLC的A549-T12、A549-T24、A549等3種細(xì)胞對(duì)紫杉醇的耐藥性，得出前兩者的耐藥性相當(dāng)于第三者的十余倍，經(jīng)反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)分析得出β微管蛋白-Ⅲ在前兩者中的表達(dá)遠(yuǎn)高于在第三者中的表達(dá)，由此推測(cè)，β微管蛋白-Ⅲ是紫杉醇耐藥的主要因素。Verdier Pinard等［7］采用電點(diǎn)聚焦和質(zhì)譜儀等方法聯(lián)合檢測(cè)耐紫杉醇細(xì)胞株的β微管蛋白，發(fā)現(xiàn)在6種型β微管蛋白只有β微管蛋白-Ⅲ表達(dá)增高，推測(cè)它才是微管作用藥物耐藥的唯一標(biāo)志物表明，β微管蛋白-Ⅲ在NSCLC患者中的表達(dá)與紫杉醇的療效有很大關(guān)系。

紫杉醇是新型抗微管藥物，被廣泛應(yīng)用于肺癌、乳腺癌、卵巢癌的治療中。作用途徑是紫杉醇與微管蛋白N端第31位氨基酸和第217～231位氨基酸結(jié)合，使微管蛋白呈聚合狀態(tài)，維管束與微管組織中心喪失相互連接，于G2/M期阻斷細(xì)胞周期，有絲分裂異?；蛲Ｖ梗拱┘?xì)胞無法分裂而死亡［8-9］。

該項(xiàng)試驗(yàn)研究表明，β微管蛋白-Ⅲ水平與腫瘤細(xì)胞對(duì)紫杉類化療藥物的敏感性呈負(fù)相關(guān)，β微管蛋白-Ⅲ陽(yáng)性表達(dá)與分化程度有關(guān)，分化程度越低，陽(yáng)性表達(dá)率越高，其表達(dá)高低與性別、吸煙與否及病理分型無明顯相關(guān)性，結(jié)果與國(guó)內(nèi)外相關(guān)報(bào)道類似。Seve等［3］應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)了91例NSCLC組織β微管蛋白-Ⅲ表達(dá)水平，其中47例采用紫杉醇相關(guān)化療方案，發(fā)現(xiàn)β微管蛋白-Ⅲ高表達(dá)組紫杉醇化療有效率遠(yuǎn)低于低表達(dá)組(12.5%vs 61.9%)，無進(jìn)展生存期分別為105 d和335 d，總生存期分別為206 d和525 d。楊俊全等［10］采用免疫組化法檢測(cè)75例Ⅳ期NSCLC患者，均采用含有紫杉醇藥物的化療方案，β微管蛋白-Ⅲ陽(yáng)性表達(dá)率為58.7%，患者性別、年齡及組織類型與其表達(dá)高低無關(guān)。β微管蛋白-Ⅲ高表達(dá)患者紫杉類化療有效率低于低表達(dá)組(25.0%vs 48.9%)，證實(shí)高表達(dá)NSCLC患者對(duì)紫杉類藥物耐藥且預(yù)后不良。上述研究說明β微管蛋白-Ⅲ表達(dá)高低與紫杉醇耐藥有一定的關(guān)系。

綜上所述，β微管蛋白-Ⅲ表達(dá)的高低與紫杉醇的療效有一定的關(guān)系，為臨床醫(yī)師的選藥提供了一定的依據(jù)，也有益于化療療效的判斷。

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