中藥薄層色譜鑒別的實習(xí)帶教探討

黃月純

中藥薄層色譜鑒別的實習(xí)帶教探討

黃月純

（廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，廣州510405）

畢業(yè)實習(xí)是中藥學(xué)或藥學(xué)專業(yè)教學(xué)計劃中的重要組成部分，是學(xué)生從學(xué)校走入工作實踐的重要橋梁，醫(yī)院藥學(xué)部（藥劑科）的藥檢室是臨床實習(xí)帶教的主要部門之一，對藥檢室中藥檢驗的薄層色譜鑒別的實習(xí)帶教進行了探討。

藥檢室；中藥；薄層色譜法；實習(xí)帶教

畢業(yè)實習(xí)是學(xué)生從學(xué)校走入工作實踐的重要橋梁，通過實習(xí)可鞏固所學(xué)的基礎(chǔ)知識，培養(yǎng)學(xué)生的操作技能，有利于提高分析和解決實際問題的能力。我院藥劑科每年均承擔(dān)較重的中藥或藥學(xué)專業(yè)畢業(yè)實習(xí)帶教任務(wù)，藥檢室是藥劑科實習(xí)班組之一，一般安排學(xué)生實習(xí)時間多為2～4周，時間較短，但涉及的專業(yè)知識面較廣。近年國家有關(guān)部門對醫(yī)院制劑的質(zhì)量控制要求不斷提高，要求制劑用的中藥盡可能檢驗合格后投料，因此，制劑用中藥的檢驗工作已成了藥檢室的重要工作之一。本文根據(jù)學(xué)生實習(xí)時間及以往帶教中遇到的問題對藥檢室中藥檢驗的薄層色譜鑒別實習(xí)帶教模式進行探討。

1 崗前安全培訓(xùn)、準確度和精密度的學(xué)習(xí)

中藥薄層色譜鑒別涉及有毒或易燃易爆等危險化學(xué)試劑，在實驗前應(yīng)介紹藥檢室的試劑室管理制度及化學(xué)試劑使用管理制度，鞏固學(xué)生的安全意識。藥品檢驗的取樣量問題，是一個簡單而容易忽視的問題。因此，在實驗前應(yīng)讓學(xué)生掌握取樣量的準確度和試驗的精密度[1]，能正確“稱重”或“量取”，減少在實驗中可能出現(xiàn)的差錯。

2 薄層色譜技術(shù)的介紹

中藥的真?zhèn)蝺?yōu)劣直接關(guān)系到制劑質(zhì)量的安全和有效。目前中藥真?zhèn)舞b別方面通常采用性狀鑒別、顯微鑒別和薄層色譜鑒別等。薄層色譜因具有良好的專屬性，自《中國藥典》1990年版起，被廣泛應(yīng)用于中藥鑒別中。前些年我國中藥薄層色譜鑒別基本是以手工點樣、實驗室自制薄層板進行試驗，色譜質(zhì)量往往不高，分離度、重現(xiàn)性均難以達到滿意效果。近年政府對藥檢部門的設(shè)備投入明顯加大，為進一步提高中藥薄層色譜鑒別技術(shù)提供了良好的條件。自《中國藥典》2005年版開始，逐漸使用商品預(yù)制薄層板，進一步細化操作條件。對供試品溶液的制備、薄層板的活化、點樣、展開、顯色、色譜圖像的拍攝和制作等均有新的要求，色譜質(zhì)量有了明顯提高。

根據(jù)對近年到藥檢室的中藥或藥學(xué)專業(yè)實習(xí)生的了解，他們在學(xué)校的實驗課中較少涉及薄層色譜鑒別的規(guī)范化操作，或大多只是曾經(jīng)在實驗室進行自制薄層板手工點樣的簡單操作，色譜質(zhì)量往往很不理想。因此，在實驗前就薄層色譜實驗操作技術(shù)方面的一些共性問題對學(xué)生進行介紹非常有必要。

3 薄層色譜實驗操作技術(shù)的掌握

3.1 樣品的制備 中藥供試品溶液的制備一般用溶劑提取法（加熱回流、超聲提取等）。如樣品含有較多的雜質(zhì)，如鞣質(zhì)、葉綠素、糖、粘液質(zhì)等，多采取適當(dāng)?shù)念A(yù)處理，減少雜質(zhì)的干擾，以便獲得比較清晰的薄層色譜。中藥飲片樣品的預(yù)處理相對簡單，容易操作。但應(yīng)提醒學(xué)生注意供試品溶液及對照藥材溶液制備相對量化操作，目的是使樣品的色譜與對照藥材的色譜更有可比性。

3.2 薄層板的準備 學(xué)生開始實驗時，最好先用手工自制板進行試驗，但必須注意保證自制板的質(zhì)量。有條件的情況下最好采用預(yù)制薄層板。有學(xué)生認為預(yù)制薄層板可以直接使用，實際上預(yù)制板貯藏時間過長，表面涂布的硅膠吸附劑容易被污染，需要在使用前用甲醇、甲醇－二氯甲烷混合溶劑或異丙醇在不密閉的展開缸中上行展開至最前沿，取出晾干，重新活化[2]。有學(xué)生認為預(yù)制薄層板一定比手工自制板效果好，其實未必，對某些成分（如黃酮類）采用手工自制板效果往往也較理想。

3.3 點樣 樣品的點樣是影響色譜效果的主要因素之一，為了保證色譜的圖譜質(zhì)量，藥檢部門多采用半自動或自動的條帶式噴霧點樣，少數(shù)品種是點狀點樣。實際應(yīng)用中如無相應(yīng)的儀器，也可手工接觸式點狀點樣或條帶點樣，但操作需要細致小心，原點盡量減少溶劑擴散現(xiàn)象，特別是點樣量較大時更要注意。學(xué)生開始點樣操作時技術(shù)不好，往往損傷薄層板板面，斑點過大；同時，當(dāng)活化后的硅膠薄層板從干燥器中取出，從準備點樣到展開前，薄層板是暴露在實驗室的大氣中，薄層板的活性就取決于實驗環(huán)境的相對濕度，暴露時間過長，容易影響薄層板的活性。因此，可讓學(xué)生先在自制薄層板訓(xùn)練，掌握點樣技巧后方能在預(yù)制薄層板操作。此外，應(yīng)指導(dǎo)學(xué)生控制供試品溶液、對照藥材溶液、對照品溶液盡可能定量制備，定量點樣，則樣品色譜不僅可以鑒別“真?zhèn)巍?，還可以粗略地進行量化評價，在一定程度上提供“優(yōu)劣”的信息[2]。

3.4 展開 樣品的展開也是影響色譜效果的主要因素之一，也是學(xué)生容易疏忽的部分，在帶教時應(yīng)提醒學(xué)生注意一些容易疏忽的問題。薄層展開用薄層色譜專用展開箱最多的是直立式展開箱，雙槽展開箱具有節(jié)省溶劑、便于預(yù)平衡、可控制展開箱內(nèi)相對濕度等優(yōu)點，應(yīng)用最多。但學(xué)生在操作時常對飽和狀態(tài)控制不好，如展開箱在通風(fēng)柜中飽和后，在加薄層板過程時間過長，使飽和狀態(tài)的溶劑蒸氣揮發(fā)，達不到飽和狀態(tài)，因此，應(yīng)迅速加入薄層板，同時展開注意展開箱的密閉。大多數(shù)中藥樣品適宜用直立式不飽合或部分飽和。展開劑用的溶劑需使用分析純級別，臨用前配制，不可多次反復(fù)使用，這點也需提醒學(xué)生注意。展開劑如需分層，則放置分層后按要求分取上層或下層，備用。此外，由不同極性有機溶媒組成的展開劑常有少量不易察覺的分層現(xiàn)象，會嚴重影響展開效果，因此，展開劑配好后可先放置片刻，再將上清液倒入展開箱中。多數(shù)品種展距為70～90mm，取出，晾干。

3.5 顯色 色譜斑點本身有顏色者可直接在日光下觀察，斑點在紫外光激發(fā)下可發(fā)射熒光者，可直接在紫外光燈下觀察熒光色譜。中藥大多需要用顯色劑使斑點顯色，常用噴霧法，但需將試劑均勻噴灑于薄層板面，直接觀察或加熱顯色后觀察。加熱顯色須注意加熱時間和溫度，如用含羧甲基纖維素鈉的手工自制薄層板代替預(yù)制板，注意加熱溫度過高或加熱時間過長，容易引起板面的焦化，如用硫酸等顯色劑，更易造成板面的炭化而影響顯色效果，需要特別留意。但有些方法只是說加熱至斑點顯色清晰，未注明加熱溫度，學(xué)生往往把握不好，無法達到色譜要求，如白芍中芍藥苷的鑒別[3]，方法為噴以5%香草醛硫酸溶液，加熱至斑點顯色清晰，如溫度控制在60℃左右，斑點為清晰的藍紫色，如溫度超過100℃，則對照品斑點都有可能消失。有的品種需熏以試劑或試液的蒸氣顯色，如延胡索熏以碘蒸氣后檢視[3]，但應(yīng)揮盡板上吸附的碘后，置紫外光燈（365nm）下檢視，否則斑點顏色明顯較暗。

4 選擇有代表性的中藥 讓學(xué)生參與檢驗全過程

大黃是常用中藥，《中國藥典》大黃項下薄層色譜鑒別方法[3]涉及薄層色譜的多個方面，具有代表性，可作為學(xué)生帶教的典型實例。供試品溶液的制備是先采用甲醇加熱回流提取，濾液蒸干后加水溶解，加鹽酸水解，然后用乙醚提取游離蒽醌，制備方法涉及回流提取、水解、液液萃取方法等。采用大黃對照藥材及大黃酸對照品進行對照，大黃對照藥材可采用掌葉大黃、唐古特大黃或藥用大黃，因為這三種大黃均具有大黃的五個游離蒽醌斑點。采用以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠H薄層板，可為手工鋪板，但應(yīng)注意手工板質(zhì)量。展開劑采用石油醚（30～60℃）-甲酸乙酯-甲酸（15:5:1）的上層溶液，因為石油醚（30～60℃）沸點較低，在室溫較高條件下展開，石油醚容易揮發(fā)，造成展開劑系統(tǒng)極性增大，斑點展距偏低，分離度不佳，因此，應(yīng)指導(dǎo)學(xué)生在適宜的實驗溫度下操作。展開晾干后先置紫外光燈（365nm）下檢視游離蒽醌的橙黃色熒光斑點，然后置氨蒸氣中熏后，游離蒽醌斑點變?yōu)榧t色。通過大黃等典型實例的帶教，讓學(xué)生參與檢驗全過程，能加強學(xué)生對薄層色譜技術(shù)的掌握。

根據(jù)學(xué)生的實習(xí)時間及學(xué)習(xí)要求，本文對藥檢室中藥檢驗的薄層色譜鑒別實習(xí)帶教模式進行了探討，以期有效地提高學(xué)生的實驗操作技能，提高實習(xí)質(zhì)量。

[1] 黃月純.藥檢室制劑檢驗的實習(xí)帶教模式探討[J].現(xiàn)代醫(yī)院,2011,11(5): 126-127.

[2] 國家藥典委員會.中國藥典中藥材薄層色譜彩色圖集(第一冊)[S].北京:人民衛(wèi)生出版社,2009:6.

[3] 國家藥典委員會.中國藥典(一部)[S].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010,96 (130):22.

10.3969/j.issn.1672-2779.2012.18.047

1672-2779（2012）-18-0065-02

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