乳香及含乳香中成藥中乳香酸類薄層層析鑒別

夏 磊， 宋志前， 張琳琳， 魏 征， 曹玉娜， 劉振麗*

(1.天津中醫(yī)藥大學中藥學院，天津300193;2.中國中醫(yī)科學院中醫(yī)基礎理論研究所，北京100700)

乳香為橄欖科植物乳香樹Boswellia carterii Birdw．及同屬植物Boswellia bhaw-dajiana Birdw．樹皮滲出的樹脂，具有活血定痛，消腫生肌的功效［1］207。2010年版《中國藥典》(一部)采用氣相色譜法對乳香中揮發(fā)油成分進行鑒別，文獻中也多是對其揮發(fā)油成分進行薄層鑒別研究［2-5］。乳香酸類成分為乳香中主要功效成分，多種乳香酸類單體化合物具有抗炎活性［4］和抗腫瘤的作用［6-9］，而此類成分的薄層層析鑒別方法尚未見報道。

本實驗根據(jù)乳香酸類成分的性質，采用適當方法制備供試品溶液，以市售的各10批乳香生品和制乳香、3種含乳香的中成藥為研究的對象，建立了乳香中乳香酸類成分的TLC鑒別方法。

1 儀器、材料與試劑

薄層掃描成像系統(tǒng) (GEL2020D)。所收集到市售乳香樣品包括生品與制乳香，見表1，經(jīng)北京中醫(yī)藥大學劉春生教授鑒定均為橄欖科植物乳香樹Boswellia carterii Birdw．或同屬植物Boswellia bhaw-dajiana Birdw．樹皮滲出的樹脂。3種含乳香的中成藥分別為七厘散、賽金化毒散、復方小活絡丸 (北京同仁堂股份有限公司同仁堂制藥廠，批號分別為9100018、0100016、9013426)。3-乙酰-β-乳香酸 (3-acetyl-β-boswellic acid，批號:00002565-T9E)。對照品購于Chromadex(Irvine，CA，USA)，純度≥99.8%。硅膠G薄層板 (青島海洋化工廠分廠)、無水乙醇、正己烷、丙酮、冰醋酸、濃硫酸均為分析純 (北京化學試劑公司)。

2 方法與結果

2.1 對照品溶液的制備 取3-乙酰-β-乳香酸對照品，精密稱定，加甲醇溶解并制成每1 mL含1 mg的對照品溶液。低溫、避光保存。

表1 乳香及制乳香的來源

2.2 供試品溶液的制備 分別取相當于乳香0.5 g的供試品粉末，加乙醇25 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加2%KOH 10 mL使溶解，用乙酸乙酯振搖提取2次，每次20 mL，棄去乙酸乙酯層，堿液層加2%的HCl調至pH為6，再用乙酸乙酯振搖提取2次，每次20 mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘渣加甲醇1 mL使溶解，作為供試品溶液。

2.3 薄層層析條件 依2010年版《中國藥典》 (一部)薄層色譜法 (附錄ⅥB)試驗，分別吸取供試品溶液和對照品溶液各2 μL，分別點于同一硅膠G-薄層板上，以正己烷-丙酮-冰醋酸 (7∶3∶0.1)為展開劑，展開，取出，晾干。噴以10%濃硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰，日光下檢視。各供試品色譜相應的位置上，顯相同的紫紅色斑點。結果見圖1～圖3。

3 討論

圖1 10批乳香薄層鑒別

圖2 10批制乳香薄層鑒別

圖3 含乳香的中成藥薄層鑒別

3.1 圖1結果顯示，10個批次乳香主斑點基本一致，共有的斑點數(shù)為6個，有些樣品多1～2個斑點，如樣品R1-R3，R9-10多1個斑點，樣品R6和R8多2個斑點;不同批次樣品相應斑點的顏色和大小不同，表明市售不同批次乳香中乳香酸成分種類和含有量可能存在一定差異。

3.2 圖2結果表明，10批制乳香主斑點位置和數(shù)量與乳香一致，不同批次樣品間斑點數(shù)量、相應斑點大小和顏色也存在差異。

3.3 七厘散［1］430、賽金化毒散和復方小活絡丸處方中都含有制乳香，TLC結果顯示 (圖3)，各供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同的紫紅色斑點，在與制乳香色譜相應的位置上，顯5～6個相同的紫紅色斑點。供試品溶液制備中，各成藥的取樣是以與飲片相同量的乳香折算的，由于復方經(jīng)過制劑工藝提取，乳香酸類成分有一定的轉移率，而且所用制乳香的批次也不同，因此，與制乳香比較，相應斑點的數(shù)量、斑點大小和顏色有一定差異。由于以上3批乳香中成藥沒有制乳香陰性對照，需要進一步研究，此處條件可以作為參考。

3.4 預實驗中曾采用乙醇提取、濃縮后直接點樣，供試品色譜有背景干擾，乳香酸斑點不很清晰。根據(jù)乳香酸類結構具有羧基，供試品制備中先采用乙醇提取，然后用2%的KOH將提取液中的乳香酸成分溶解，再用2%的HCl將其置換出來，可以使供試品中乳香酸成分得到富集和純化，斑點清晰去掉其它成分干擾。

［1］國家藥典委員會．中華人民共和國藥典:2010年版一部［S］．北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:207，430．

［2］劉敏敏，賴志輝，黃 亮．舒筋活血定痛丸質量標準研究［J］．中國藥師，2007，10(8):755-758．

［3］吳 芳，李 濤，喬蓉霞，等．乳香及其炮制品檢測方法的改進［J］．中藥材，2008，31(12):1794-1795．

［4］宋小妹，馮改利，崔九成，等．乳香配方顆粒研究［J］．陜西中醫(yī)，2007，28(2):214-216．

［5］劉 杰，張國鋒，孔 靜，等．傷科八厘膠囊質量標準研究［J］．齊魯藥事，2008，27(8):473-475．

［6］張 勇，齊振華．α-乳香酸對HL-60細胞株VEGF分泌及其Flt-1受體表達的影響［J］．醫(yī)學臨床研究，2009，26(2):202-205．

［7］Pang Xiufeng，Yi Zhengfang，Zhang Xiaoli，et al．Acetyl-11-keto-β-boswellic acid inhibits prostate tumor growth by suppressing vascular endothelial growth factor receptor-mediated angiogenesis［J］．Cancer Res，2009，69(14):5893-5900．

［8］袁小瑜，李躍輝，李艷東，等.11-羰基-β-乙酰乳香酸誘導HL-60細胞凋亡［J］．暨南大學學報，2010，31(2):158-162．

［9］Takahashi M，Shen Y，Link A，et al．Acetyl-11-keto-β-boswellic acid inhibits cell growth，invasion，and migration in colon cancer cells by modulating the expression of MicroRNA Let-7 and the Mir-200 Family［J］．Gastroenterology，2011，140(5):402-403．