RP-HPLC法測(cè)定痹痛寧膠囊中士的寧和馬錢(qián)子堿的含量

王蕾

江蘇省鹽城市藥品檢驗(yàn)所，鹽城 224002

痹痛寧膠囊由馬錢(qián)子粉、全蝎、僵蠶（麩炒）、麻黃、蒼術(shù)（麩炒）、乳香（制）、沒(méi)藥（制）、川牛膝、刺五加浸膏、甘草、續(xù)斷等藥材組成,具有袪風(fēng)除濕、消腫定痛之功效。適用于寒濕陰絡(luò)所致的痹病，癥見(jiàn)：筋骨關(guān)節(jié)疼痛、腫脹、麻木、屈伸不利、遇寒加重者，風(fēng)濕、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨質(zhì)增生、頸椎病、肩周炎、腰椎間盤(pán)突出、坐骨神經(jīng)痛、股骨頭壞死、骨質(zhì)增生等及上述癥狀引起的關(guān)節(jié)酸沉、疼痛、腫大、變形、麻木等。痹痛寧膠囊原標(biāo)準(zhǔn)[1]采用薄層掃描法測(cè)定士的寧的含量。原方法操作麻煩，筆者參考有關(guān)文獻(xiàn)[2]建立了反相高效液相色譜法測(cè)定痹痛寧膠囊中士的寧和馬錢(qián)子堿的含量，經(jīng)方法學(xué)考察，表明方法可行。

1 儀器與試藥

Agilent1200高效液相色譜儀（Agilent科技有限公司）；BP211D電子天平（德國(guó)賽多利斯公司）。

馬錢(qián)子堿對(duì)照品（110706-200404）、士的寧對(duì)照品（110705-200306）為中國(guó)藥品生物制品檢定所提供；痹痛寧膠囊 （規(guī)格：0.2 g/粒，批號(hào)：110106、110123、110301，貴州恒霸藥業(yè)有限責(zé)任公司）；甲醇、乙腈為色譜純；其余為分析純；水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液制備

2.1.1 對(duì)照品混合溶液 精密稱取士的寧對(duì)照品20.97 mg、馬錢(qián)子堿對(duì)照品9.52 mg，置100 mL量瓶中，以甲醇溶解并稀釋制成濃度分別為0.2097和0.0952 mg·mL-1的混合溶液。

2.1.2 供試品溶液 取痹痛寧10粒，精密稱定，混勻，稱取0.5 g，加濃氨水1 mL濕潤(rùn)，加氯仿30 mL，搖勻，靜置24 h，超聲處理30 min提取，過(guò)濾，濾渣用氯仿5 mL×3洗滌，合并濾液和洗液，蒸干，殘?jiān)蛹状既芙?，轉(zhuǎn)移至100 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液即為供試品溶液。

2.1.3 陰性對(duì)照溶液 按照痹痛寧膠囊的制備工藝制備不含馬錢(qián)子粉的樣品，并按“2.1.2”項(xiàng)下方法制成陰性對(duì)照溶液。

2.2 色譜條件

色譜柱：CAPCELL C18（4.6 mm×150 mm，5 μm）；流動(dòng)相：水-乙腈（80∶20）（含三乙胺0.01 mol· L-1，用磷酸調(diào)pH至2.6±0.1）；檢測(cè)波長(zhǎng)為260 nm；柱溫為25℃；進(jìn)樣量為20 μL。

2.3 系統(tǒng)適用性與專屬性試驗(yàn)

在上述色譜條件下，分別取對(duì)照品混合溶液、供試品溶液及陰性對(duì)照溶液，各20μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。理論板數(shù)按士的寧峰計(jì)算，不低于2000，而輔料無(wú)干擾。見(jiàn)圖1。

2.4 線性關(guān)系考察

精密吸取對(duì)照品混合溶液1、2、4、8、10、15 μL注入液相色譜儀。以濃度（μg）為橫坐標(biāo)，峰面積（X）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得士的寧和馬錢(qián)子堿的回歸方程，分別為 Y=3.765×104X+9.198×103，r= 0.9996和Y=4.289×104X+1.062×104，r=0.9994。結(jié)果表明，士的寧和馬錢(qián)子堿濃度分別在0.2097～3.1455 μg·mL-1和0.0952～1.4280 μg·mL-1范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn)

圖1 對(duì)照品（A)、樣品（B)、陰性對(duì)照（C)色譜圖

精密吸取“2.1.1”項(xiàng)下的對(duì)照品混合溶液20μL，在上述色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積，峰面積的RSD分別為士的寧0.8%、馬錢(qián)子堿1.0%。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一供試品溶液，分別于0、1、2、4、8、12 h，在上述色譜條件下進(jìn)行分析，士的寧和馬錢(qián)子堿色譜峰面積的RSD（n=6）分別為1.3%和1.0%。結(jié)果表明士的寧和馬錢(qián)子堿供試液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱取同一批號(hào)的痹痛寧膠囊粉末6份各0.5 g，按“2.1.2”項(xiàng)下方法操作，在上述色譜條件下進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果士的寧和馬錢(qián)子堿的含量平均值（n=6）分別為0.81 mg/粒和0.40 mg/粒，RSD分別為1.1%、1.0%。

2.8 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱取己知含量的痹痛寧膠囊3份,每份0.25g，分別加入按“2.1.1”項(xiàng)下方法制備的對(duì)照品混合溶液1.0、5.0、10.0 mL，再按上述方法提取，制備供試品溶液，每個(gè)濃度測(cè)定3份，計(jì)算平均回收率。結(jié)果樣品中士的寧和馬錢(qián)子堿的平均回收率分別為99.2%、99.3%；RSD分別為0.6%、0.9%。

2.9 樣品含量測(cè)定

取3批樣品，按“2.1.2”項(xiàng)下方法操作，制備供試品溶液各3份，按上述色譜條件測(cè)定，外標(biāo)法計(jì)算士的寧和馬錢(qián)子堿的含量。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 含量測(cè)定結(jié)果（n=3）

3 討 論

3.1 馬錢(qián)子以粉末入藥，故將樣品用氨水濕潤(rùn)后，用氯仿靜置過(guò)夜，再進(jìn)行超聲處理，將所含生物堿提取出來(lái)，再用硫酸溶液使其以鹽的形式溶于水中，除去大量脂溶性的雜質(zhì)，將酸性液堿化后，用氯仿提取，所得供試品色譜圖中所含雜質(zhì)較少。

3.2 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇

對(duì)士的寧、馬錢(qián)子堿以流動(dòng)相制備的對(duì)照品溶液在λ200～300 nm范圍內(nèi)做紫外掃描，士的寧和馬錢(qián)子堿的最大吸收分別為λ254 nm和λ265 nm，故選擇λ260 nm為合適的檢測(cè)波長(zhǎng)。

[1] 國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)（試行）[S].YBZ11142005.

[2] 張凌云.RP-HPLC法測(cè)定伸筋丹膠囊中士的寧和馬錢(qián)子堿的含量[J].江蘇藥學(xué)與臨床研究，2004，12（3）：32.