【作 者】徐運(yùn)強(qiáng),劉蓓,趙召霞,王桂花,朱向輝,潘世揚(yáng),陳丹
1 石家莊市第二醫(yī)院檢驗(yàn)科,石家莊市,050051
2 石家莊市第五醫(yī)院檢驗(yàn)科,石家莊市,050021
3 江蘇省人民醫(yī)院檢驗(yàn)科,南京市,210029
心肌梗死是臨床常見(jiàn)的急性多發(fā)病,是嚴(yán)重威脅人類(lèi)健康的疾病之一,其發(fā)病率和死亡率均有逐年增加的趨勢(shì),因而倍受關(guān)注。心肌梗死屬于冠心病的嚴(yán)重類(lèi)型,是心肌缺血性壞死。循環(huán)DNA(circulating DNA)是存在于血液(血漿或血清)、滑膜液和腦脊液等體液中的細(xì)胞外DNA,其量和性質(zhì)的改變?cè)趧?chuàng)傷、腫瘤、產(chǎn)前疾病等的診斷和預(yù)后判斷方面具有重要意義。當(dāng)發(fā)生組織器官損傷時(shí),循環(huán)DHA水平顯著升高。目前,國(guó)內(nèi)尚未見(jiàn)到有關(guān)心肌梗死患者血漿循環(huán)DNA水平變化規(guī)律的報(bào)道。本研究選擇40例急性心肌梗死患者作為研究對(duì)象,觀察循環(huán)DNA水平在急性心肌梗死中的變化規(guī)律,探討其在急性心肌梗死中的應(yīng)用價(jià)值。
40例急性心肌梗死患者均為2010年10月至2011年5月期間在石家莊市第二醫(yī)院住院的患者,其中男性28例,女性12例,年齡45~66歲。診斷符合2001年12月中華醫(yī)學(xué)會(huì)心血管病分會(huì)修訂的“急性心肌梗死診斷和治療指南”中診斷標(biāo)準(zhǔn)[1],排除合并急慢性感染、腫瘤、手術(shù)、創(chuàng)傷和免疫性疾病,且無(wú)其他嚴(yán)重心腦血管和肝腎功能病變。同期選擇40例在石家莊市第二醫(yī)院體檢的健康人作為對(duì)照組,其中男性22例,女性18例,年齡40~60歲。兩組性別、年齡均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P>0.05。
采集健康體檢者和急性心肌梗死患者發(fā)病后48小時(shí)內(nèi)和治療后(約8周)恢復(fù)期靜脈血各2 ml,EDTA抗凝,3000 rpm/min離心10 min,吸取上清液1.5 ml離心管中,16 000 rpm/min離心10 min;吸取上層無(wú)細(xì)胞血漿200 ml,置于含有5.0×104拷貝重組質(zhì)粒0.2 ml離心管(江蘇省人民醫(yī)院潘世揚(yáng)教授饋贈(zèng))中,充分混勻后-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>
采用磁珠法同步提取血漿DNA和重組質(zhì)粒。試劑盒由上海浩源生物技術(shù)有限公司提供。
采用雙重?zé)晒舛縋CR技術(shù)檢測(cè)提取的血漿DNA和重組質(zhì)粒,檢測(cè)方法參見(jiàn)文獻(xiàn)[1]。試劑盒由江蘇省人民醫(yī)院潘世揚(yáng)教授饋贈(zèng)。
采用雅培C8000全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)心肌酶譜,包括天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、乳酸脫氫酶(LDH)、α-羥丁酸脫氫酶(α-HBDH)、肌酸激酶(CK)及肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)和肌鈣蛋白T(cTnT)。
應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,組間比較采用成組設(shè)計(jì)t檢驗(yàn),相關(guān)性采用直線相關(guān)分析, P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
健康對(duì)照組、心肌梗死患者治療前循環(huán)DNA水平分別為(21.5±10.7)ng/ml和(253.6±45.7)ng/ml,后者顯著高于前者(P=0.000)。心肌梗死患者血清AST、LDH、α-HBDH、CK、CK-MB和cTnT水平均顯著高于對(duì)照組,見(jiàn)表1。
表1 健康對(duì)照組和心肌梗死患者治療前后血漿循環(huán)DNA及心肌酶水平的變化Tab.1 Changes of plasma circulating DNA and myocardial enzyme spectrum in patients with acute myocardialinfarction and control group before and after treatment.
心肌梗死患者治療后血漿循環(huán)DNA顯著下降(P=0.000);治療后AST、LDH、α-HBDH、CK、CK-MB和cTnT水平均顯著降低,P值均小于0.05,見(jiàn)表1。
通過(guò)Pearson相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)循環(huán)DNA與CKMB、cTnT呈正相關(guān),r值分別為0.613和0.654,P值分別為0.032和0.021。
心肌梗死是指急性、持續(xù)性缺血、缺氧(冠狀動(dòng)脈功能不全)所引起的心肌壞死,臨床上多有劇烈而持久的胸骨后疼痛,休息及硝酸酯類(lèi)藥物不能完全緩解,伴白細(xì)胞增高、發(fā)熱、血沉加快,血清心肌酶活性增高及進(jìn)行性心電圖變化,可并發(fā)心律失常、休克或心力衰竭等合并癥,常可危及生命。急性心肌梗死的臨床診斷常常依賴(lài)心電圖和病史,但單一心電圖檢查存在不足,心電圖診斷急性心肌梗死的陽(yáng)性率至多81%,其余的20%必須依靠實(shí)驗(yàn)室的標(biāo)志物檢測(cè)進(jìn)行確診。目前應(yīng)用最多的血清標(biāo)志物為傳統(tǒng)的心肌酶譜和肌鈣蛋白檢測(cè)。研究結(jié)果顯示急性心肌梗死患者心肌酶譜(包括AST、LDH、α-HBDH、CK和CKMB)和cTnT水平均顯著高于健康對(duì)照組,且治療后水平顯著降低,與治療前相比差異具有顯著意義。cTn(cTnT和cTnI)是目前診斷心肌損傷尤其是心肌梗死靈敏度和特異性最好的生物化學(xué)標(biāo)志物,其靈敏度(6~12)h可達(dá)100%,特異性可達(dá)74%~98%。雖然心肌酶對(duì)心肌梗死的診斷敏感性和特異性均不如心肌蛋白,但cTnT和cTnI與肌酸激酶及其同工酶(CK、CK-MB)組合對(duì)于心肌梗死診斷是很靈敏和很有特異的指標(biāo)。
循環(huán)DNA是一種無(wú)細(xì)胞狀態(tài)的細(xì)胞外DNA,存在于血液、滑膜液等體液中,主要由單鏈或雙鏈DNA以及單鏈與雙鏈DNA混合物組成[2]。大量研究證實(shí),健康人和許多疾病患者血清和血漿中都含有一定量的循環(huán)DNA,主要來(lái)源于組織細(xì)胞死亡后釋放的DNA片段,還有部分來(lái)源于腫瘤細(xì)胞分泌的DNA片段[3-4]。游離循環(huán)DNA的檢測(cè)除了用于研究腫瘤學(xué)和胚胎醫(yī)學(xué)外,也被有效地應(yīng)用在對(duì)其他疾病的研究中,這些疾病包括外傷、中風(fēng)、糖尿病和自身免疫性疾病等[5]。本研究結(jié)果顯示,患者發(fā)生急性心肌梗死時(shí)循環(huán)DNA水平顯著升高,與健康對(duì)照組相比差異具有顯著意義(P=0.000),而且治療后其水平顯著下降,治療前后相比差異也具有顯著意義(P=0.000),說(shuō)明外周循環(huán)DNA水平與心肌的損傷和修復(fù)密切相關(guān)。
急性心肌梗死患者循環(huán)DNA水平與CK-MB、cTnT呈正相關(guān),r值分別為0.513和0.654,P值分別為0.032和0.021。這一結(jié)果也與Chang[6]等人研究結(jié)果一致,進(jìn)一步證實(shí)外周循環(huán)DNA水平與心肌的損傷和修復(fù)的相關(guān)性。由于循環(huán)DNA升高的幅度均顯著高于CK-MB和cTnT,因此循環(huán)DNA水平可以作為一種無(wú)創(chuàng)、快速、敏感反映心肌細(xì)胞損傷的檢測(cè)指標(biāo),檢測(cè)急性心肌梗死患者外周循環(huán)DNA對(duì)于心肌損傷早期診斷,監(jiān)測(cè)治療效果以及判斷預(yù)后等方面都具有重要的臨床意義。今后,有必要進(jìn)一步研究外周循環(huán)DNA在診斷急性心肌梗死的臨床價(jià)值,以確定急性心肌梗死的診斷臨界值以及與梗死面積大小的關(guān)系等。
[1] 中華醫(yī)學(xué)會(huì)心血管病分會(huì). 急性心肌梗死診斷和治療指南[J]. 中華心血管病雜志, 2001, 29(12): 705—720.
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[5] 胡影, 倪虹. 人體游離循環(huán)DNA 的研究進(jìn)展[J]. 遺傳, 2008,30(7): 815―820.
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