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    苜蓿黃酮的研究進(jìn)展及其在雞生產(chǎn)中的應(yīng)用

    2012-01-25 18:46:18湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院陳佩佩占今舜閆景彩
    中國飼料 2012年20期
    關(guān)鍵詞:黃酮類苜蓿黃酮

    湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院 陳佩佩 占今舜 閆景彩*

    黃酮類化合物是苜蓿中主要的生物活性成分之一,具有抗氧化清除自由基的作用,可以作為天然抗氧化劑。苜蓿黃酮還具有抗腫瘤、提高機(jī)體免疫力、延緩衰老、增強(qiáng)心血管功能,以及微量雌激素樣作用。本文就苜蓿黃酮的分類、含量影響因素、提取方法和生物學(xué)功能及其在禽生產(chǎn)中的應(yīng)用作一綜述。

    1 苜蓿黃酮的分類

    苜蓿黃酮是苜蓿生長中形成的一類次生代謝產(chǎn)物,主要存在于苜蓿的莖葉中。苜蓿屬中的黃酮類成分約有80余種,來源于紫花苜蓿的有30余種,據(jù)報道苜蓿屬植物的黃酮類成分主要有以下幾種結(jié)構(gòu)類型:黃酮及其苷類、黃酮醇及其苷類、異黃酮類、異黃烷、查耳酮、二氫黃酮、二氫異黃酮和紫檀烷類等(何春年等,2006)。苜蓿屬中黃酮類成分的母核主要為芹菜素、木犀草素、苜蓿素、金圣草黃素、美迪紫檀素山奈酚、槲皮素、楊梅黃素、蘆丁、燃料木黃酮、刺芒柄花黃素和大豆素等。其中芹菜素、木犀草素、苜蓿素、金圣草黃素、刺芒柄花黃素、槲皮素、燃料木黃酮和美的紫檀素等母核的結(jié)構(gòu)均存在于紫花苜蓿中,并以芹菜素、木犀草素、苜蓿素最為常見。

    2 影響苜蓿黃酮含量的因素

    2.1 品種間的差異 由于自身的遺傳特性及對環(huán)境的適應(yīng)性的不同,不同苜蓿品種間在總黃酮含量上也表現(xiàn)出比較顯著的差異。薄亞光等(2008)對6個紫花苜蓿品種莖、葉中總黃酮進(jìn)行提取和測定,結(jié)果表明,各品種、株系總黃酮含量有差異,其中品種牧歌三葉型總黃酮含量最高,為7.08 mg/g,品種全能三葉型含量最低,為6.32 mg/g。徐文燕(2007)考察不同品種和采收季節(jié)紫花苜蓿中黃酮含量,結(jié)果表明,品種和采收季節(jié)對紫花苜蓿中的總黃酮含量均有明顯影響,并且不同品種中的總黃酮含量對季節(jié)變化的敏感性不同。

    2.2 環(huán)境因素對苜蓿黃酮含量的影響 植物的次生代謝產(chǎn)物是其在長期的自然存在中選擇、變異和適應(yīng)的結(jié)果,因此次生代謝產(chǎn)物的合成會受到環(huán)境因素的調(diào)控。目前研究表明,影響苜蓿黃酮合成的環(huán)境因子主要包括光照、溫度、CO2濃度、礦物質(zhì)營養(yǎng)和土壤水分等幾個因素。

    光照和溫度是兩大影響因素,可以直接影響到黃酮合成途徑中關(guān)鍵酶的活性,對植株中黃酮含量有明顯的調(diào)節(jié)作用。高光照、較低的平均溫度可以使黃酮類成分合成途徑中相關(guān)酶的活性大幅度提高,從而有利于黃酮類物質(zhì)的積累,故夏季植株中黃酮含量高于春季,在夏季收割提取為宜。CO2濃度是間接影響因素,主要通過影響黃酮類物質(zhì)前體的數(shù)量來影響其合成。礦物質(zhì)元素是作物生長所必需的,適量限制氮、磷肥的施用有利于黃酮類成分的積累。Strisse等(2005)研究報道,高氮降低蘋果葉片中總黃酮含量的機(jī)制在于使L-苯丙氨酸解氨酶(PAL)的活性下調(diào),從而影響下游黃酮的合成。Stewart等(2001)對不同施肥狀態(tài)下的番茄進(jìn)行了檢測,結(jié)果顯示,限制氮肥后,黃酮醇含量在番茄葉片中顯著增加;限制磷肥后黃酮醇含量在果實發(fā)育初期顯著增加。

    3 苜蓿黃酮的提取、測定及分離方法

    3.1 提取方法 目前苜蓿黃酮的提取方法,主要有索式提取法、有機(jī)溶劑浸提法、熱水浸提法、堿提酸沉法等幾種方法。

    有機(jī)溶劑提取法是提取苜蓿黃酮的理想方法,常用的有機(jī)溶劑有甲醇、乙醇、丙酮等,高體積分?jǐn)?shù)的醇(90%~95%)適于提取苷元,體積分?jǐn)?shù)60%左右的醇適合提取苷類(張研等,2008)。邢軍等(2008)利用乙醇提取苜蓿黃酮,通過單因素和正交試驗,確定乙醇提取苜??傸S酮的最佳條件為:浸提劑選用70%乙醇,料液比為1∶50,浸提溫度為80℃,浸提時間為4 h,浸提次數(shù)為2次。

    但傳統(tǒng)的有機(jī)溶劑提取法耗時相對較長,近年來,超聲波輔助提取法和微波輔助提取法廣泛應(yīng)用于植物天然有效成分的提取,是很有發(fā)展前景的方法。鄧斌等(2009)研究發(fā)現(xiàn),在乙醇浸提的基礎(chǔ)上,采用超聲波輔助技術(shù)提取苜蓿黃酮,萃取時間短、溶劑用量少、提取效率高、重現(xiàn)性好。馮濤等(2008)對苜蓿黃酮采用了加熱回流、索氏提取、超聲提取3種提取方法,結(jié)果發(fā)現(xiàn),超聲提取法提取黃酮可顯著提高黃酮得率,最佳提取工藝為:60%乙醇,30∶1 的液固比,提取 3 次,1 h/次。 張詠梅等(2008)采用微波輔助提取法提取苜蓿黃酮,結(jié)果表明,最佳提取工藝為:體積分?jǐn)?shù)為40%乙醇,固液比為1∶30,微波500 W功率下作用60 s。3.2 測定方法 黃酮含量的測定方法有紫外分光光度法、高效液相色譜法(HPLC)、氣相色譜法、紙色譜PC和薄層色譜TLC法、熒光測定法、原子吸收光譜法、近紅外漫反射光譜法、共振散射光譜法、薄層掃描法和單掃示波極譜法等,其中最常用的就是紫外分光光度法和高效液相色譜法 (董彩軍和李鋒,2010)。

    紫外分光光度法是以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)樣品,在其紫外最大吸收峰510 nm處測定試樣的吸光值與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較并定量計算苜蓿黃酮含量。叢媛媛等(2006)采用紫外分光光度法測定了苜蓿黃酮的含量,結(jié)果表明,該方法重現(xiàn)性好,操作簡單,平均加樣回收率為96.2%,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.32%。紫外分光光度法可以定量的計算苜蓿中總黃酮的含量,但是此方法前處理復(fù)雜,需要對樣品進(jìn)行純化。

    高效液相色譜法具有分離效果好、準(zhǔn)確性高、分析速度快,以及儀器自動化程度高等特點(diǎn),尤其適合對揮發(fā)性低、熱穩(wěn)定性差、分子量大,以及離子型化合物的分析,已廣泛用于植物天然活性成分的分析。徐文燕等(2007)利用高效液相色譜法同時測定出苜蓿中幾種主要黃酮成分:芹菜素、苜蓿素和7,4’一二羥基黃酮。李存滿等(2006)采用高效液相色譜法測定苜蓿中苜蓿素的含量,較好的色譜條件為:色譜柱為Agilent Zorbox C18,流動相為甲醇-水(65∶35),流速為 0.8 mL/min,檢測波長為349 nm,進(jìn)樣量為5 μL,溫度為室溫。

    3.3 分離方法 關(guān)于黃酮類化合物的分離純化方法有很多,主要有薄層層析法、柱層析法、紙層析法、超臨界CO2萃取法和大孔樹脂吸附法等(宋秋華等,2007)。

    大孔樹脂是近年來發(fā)展起來的一類有機(jī)高分子聚合物吸附劑,是依靠其和被吸附的分子(吸附質(zhì))之間的范德華引力,通過其巨大的比表面進(jìn)行物理吸附而工作的。其具有物化穩(wěn)定性高、吸附選擇性好、不受無機(jī)物存在的影響、再生簡單、解析條件溫和、使用周期長、易于構(gòu)成閉路循環(huán)及節(jié)省費(fèi)用等優(yōu)點(diǎn),廣泛用于物質(zhì)的分離純化。朱宇旌等(2008)采用大孔吸附樹脂HPH480對苜蓿異黃酮進(jìn)行純化,動態(tài)吸附試驗結(jié)果表明,較好的動態(tài)吸附條件為:上樣液濃度0.6~1.2 mg/mL,上樣液pH 為 5,徑高比為 1∶20,預(yù)吸附 4 h,流速 2 mL/min,上樣液溫度40℃,采用體積分?jǐn)?shù)80%的乙醇60℃洗脫,流速為1.0 mL/min,洗脫劑用量為4 BV(床容積),在此條件下得到的苜蓿異黃酮純度可在10%以上,較粗提物提高3倍以上。

    4 苜蓿黃酮的生物學(xué)功能

    4.1 抗氧化 朱宇旌等(2006)在豬油中加入不同比例紫花苜蓿黃酮粗提物,結(jié)果表明,添加苜蓿黃酮粗提物對豬油具有良好的抗氧化作用,但不如維生素C效果好;另外,維生素C和維生素E對苜蓿黃酮粗提物具有明顯的協(xié)同抗氧化作用,效果優(yōu)于單獨(dú)添加黃酮粗提物和維生素C。李寶蘭等(2009)研究報道,灌胃苜??傸S酮的小鼠全血中的甘油三脂和低密度脂蛋白的含量明顯降低(P<0.05),而高密度脂蛋白膽固醇含量升高;小鼠的肝臟和腎臟組織勻漿中過氧化物歧化酶的活性顯著升高(P<0.05),丙二醛含量降低。這說明苜??傸S酮具有降血脂、降低低密度脂蛋白膽固醇、預(yù)防和減緩動脈硬化的作用,同時還具有抑制氧自由基損傷防止脂質(zhì)過氧化的作用。黃酮類化合物抗氧化及消除自由基的機(jī)理主要包括兩個方面:一是絡(luò)合那些具有氧化作用的金屬離子,形成螯合物,從而降低金屬的氧化作用;二是能和自由基進(jìn)行反應(yīng),從而消除某些自由基的氧化作用(鄭裕國等,2003)。

    4.2 提高免疫力 吳健全等(2005)研究報道,苜蓿中的染料木黃酮可以提高輻射小鼠的免疫功能,在Csy射線照射試驗中,供給0.08%染料木黃酮的小鼠與正常小鼠比較,淋巴細(xì)胞增殖指數(shù)提高86.8%,血清溶血素含量提高90.9%,同時脾臟功能也有很大提高。這可能與染料木黃酮強(qiáng)烈抑制促癌劑TPA誘導(dǎo)的多形核細(xì)胞及HL-60細(xì)胞中H2O2的形成,并中等強(qiáng)度地抑制HL-60細(xì)胞中超氧陰離子自由基的產(chǎn)生有關(guān)。

    4.3 抗腫瘤 Boue等 (2003)在乳腺癌細(xì)胞MCF-7增殖化驗中發(fā)現(xiàn)紫花苜蓿甲醇提取物表現(xiàn)出了超過雌二醇的雌激素活性,可以誘導(dǎo)具有抑制細(xì)胞增殖作用的基因的表達(dá)。余小平等(2005)用 5 μmol/L的染料木黃酮處理乳腺癌細(xì)胞后,癌細(xì)胞中血管內(nèi)皮生長因子的mRNA和蛋白表達(dá)水平逐漸下降,表明染料木黃酮能在轉(zhuǎn)錄和翻譯水平上降低乳腺癌的發(fā)病率。Wang等(1999)體外試驗研究表明,芹菜素對白血病細(xì)胞株HL-60具有抑制生長和誘導(dǎo)凋亡的作用。Fotsis等(1997)研究發(fā)現(xiàn),芹菜素可通過抑制腫瘤細(xì)胞分泌的促進(jìn)血管生長的bFGF(堿性成纖維生長因子)活性降低其對血管內(nèi)皮細(xì)胞的刺激作用。Cai等(2005、2004)研究報道,在突變型 Apcmin鼠4~18周齡期間的飼糧中添加0.2%的苜蓿素,與對照組相比,患腸癌的機(jī)率降低了33%,進(jìn)一步的試驗還發(fā)現(xiàn)苜蓿素可以抑制惡性胸腺癌細(xì)胞MDA-MB-468的生長。

    4.4 類雌激素作用 研究證實苜蓿的雌激素作用活性,主要與其所含的異黃酮化合物有關(guān)。異黃酮化合物可以結(jié)合到雌二醇激素受體上,發(fā)揮雌激素樣作用,可以作為輔助治療用于低雌激素狀況,預(yù)防和治療骨質(zhì)疏松。苜蓿含有3種主要的植物雌激素:香豆雌酚、燃料木黃酮和forrnonetin,兩種次要的為大豆黃酮和biochaninA。香豆雌酚活性相當(dāng)于雌二醇的5%,燃料木黃酮和forrnonetin分別為 1%和 0.01%(Noteboom,1963)。大豆黃酮、染料木黃酮等異黃酮可緩解去卵巢小鼠骨質(zhì)疏松和脂肪代謝失調(diào)(Uesugi等,2001)。

    5 在雞生產(chǎn)中應(yīng)用

    熊小文等(2012)研究飼糧中添加苜蓿黃酮提取物對崇仁麻雞母雛生長性能和養(yǎng)分利用率的影響,結(jié)果表明,苜蓿黃酮提取物在一定程度上提高了崇仁麻雞母雛平均日采食量、雞只的體重和日增重,并在第15~21 d達(dá)到顯著水平;降低了料重比,提高養(yǎng)分利用率;降低粗脂肪的利用率,提高鈣的利用率。說明日糧中添加適量的苜蓿黃酮提取物,能夠促進(jìn)雞的生長,降低脂肪的沉積,改善胴體品質(zhì),提高生產(chǎn)效益。周萍芳(2011)研究結(jié)果表明,在雞的日糧中添加含有黃酮300 mg/kg的苜蓿黃酮提取物,能夠降低麻雞血清中總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白膽固醇、尿素氮和尿酸含量,提高高密度脂蛋白膽固醇含量;降低腹脂率、皮下脂肪厚度、肌間脂肪寬度和胸肌和腿肌中脂肪含量,提高胸肌和腿肌中蛋白質(zhì)含量;提高脾臟指數(shù)和法氏囊指數(shù)。說明日糧中添加適量的黃酮提取物可以提高麻雞的生產(chǎn)性能,提高營養(yǎng)物質(zhì)的代謝率,降低血脂,提高胴體品質(zhì),降低腹脂率,改善免疫功能。另外,有研究表明,在肉仔雞的日糧中添加600 mg/kg的苜蓿素可以提高肉仔雞的生長性能,提高飼料轉(zhuǎn)化率(佟建明等,2004)。

    6 小結(jié)

    苜蓿屬植物資源豐富,分布范圍廣。但目前對苜蓿資源的利用主要以干草或草粉的形式作為畜禽飼料,少部分經(jīng)加工后作為飼料添加劑應(yīng)用,對苜蓿中的活性物質(zhì)如黃酮的研究、開發(fā)和利用較少,僅局限于實驗室,不能用于大規(guī)模生產(chǎn)。隨著研究的不斷深入,生產(chǎn)技術(shù)的不斷成熟,相信苜蓿黃酮將會作為飼料添加劑廣泛應(yīng)用于動物生產(chǎn)中。

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