虎杖的提取分離和純化技術(shù)研究新進展

王昌瑞， 徐 溢， 張子春， 盛 靜， 季金茍， 周小華

(重慶大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院，重慶 400030）

1 引言

虎杖Polygonum cuspidatum Sieb.et Zucc.為多年生灌木狀草本植物，分布于山東、河南、重慶等地。虎杖可以作為觀賞植物［1］，其干燥根莖和根經(jīng)過加工后入藥。其主要成分有蒽醌類、二苯乙烯類、黃酮類等。其中以白藜蘆醇為代表的二苯乙烯類化合物具有抗菌和改善心血管疾病的作用，近年來發(fā)現(xiàn)其還具有抗腫瘤抗自由基等活性，被廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥衛(wèi)生、保健、化妝品等行業(yè)，具有巨大的商業(yè)價值。白藜蘆醇在花生、大豆、葡萄、葡萄酒等食品中均有發(fā)現(xiàn)，其中前三者中的白藜蘆醇多以葡萄糖苷的形式存在，葡萄酒是反式和順勢白藜蘆醇的重要來源，但不是所有人都適合飲酒，虎杖作為游離白藜蘆醇的另一個重要來源可以很好的替代葡萄酒發(fā)揮作用［2］。同時虎杖中還有大量的大黃素等蒽醌類物質(zhì)。工業(yè)上對虎杖中的白藜蘆醇和大黃素的開發(fā)力度較大，可以生產(chǎn)20%～98%的白藜蘆醇和大黃素產(chǎn)品，但現(xiàn)行的工藝和方法存在著提取率低、生產(chǎn)成本相對較高等問題。因此，虎杖白藜蘆醇等成分提取效率的提高是當今醫(yī)藥工業(yè)亟待解決的問題之一。另外綜合提取是研發(fā)虎杖有效組分的基礎(chǔ)，充分研究和發(fā)現(xiàn)虎杖中的未知有效組分是推動虎杖資源合理利用的一個必要途徑，從這個角度講人們對虎杖資源的開發(fā)和挖掘尚顯不夠。本文將針對虎杖的提取分離和純化技術(shù)現(xiàn)狀，相關(guān)新技術(shù)及其應(yīng)用等進行綜述，以期為虎杖的綜合利用、增加虎杖的研發(fā)深度和工業(yè)開發(fā)價值提供借鑒和依據(jù)。

2 虎杖提取技術(shù)現(xiàn)狀

對于虎杖的提取分離研究包括虎杖中單組分分離和一類或幾類物質(zhì)的綜合提取研究。前者的深入研究可以提高某種組分的提取效率降低生產(chǎn)成本，后者有利于虎杖的綜合開發(fā)，發(fā)現(xiàn)新化合物，提高藥材的附加值。

2.1 常規(guī)溶劑提取技術(shù) 溶劑提取是中草藥中有效部位提取的通用方法。該方法利用溶劑對有效組分的溶解和植物細胞內(nèi)外的濃差傳質(zhì)達到提取的目的，所以在對目標組分或部位進行提取時溶劑的選擇至關(guān)重要?；⒄戎杏行ЫM分的工業(yè)提取目前仍然采用常規(guī)溶劑提取法。用于虎杖中白藜蘆醇的提取溶劑主要有甲醇、乙醇、丙酮、石油醚-乙酸乙酯等，其中以乙醇為溶劑對虎杖進行回流提取為最常用。劉仁旺等［3］通過正交實驗優(yōu)化了乙醇提取虎杖中白藜蘆醇的條件，用體積分數(shù)為80%乙醇為溶劑，藥材與乙醇質(zhì)量體積比為1∶15(g/mL)，溫度為70℃時提取2 h，從10 g虎杖中提取出白藜蘆醇及其苷186.36 mg；羅迎春［4］則用95%工業(yè)酒精對5 kg虎杖進行了綜合提取分離，提取液經(jīng)不同極性的溶劑萃取和數(shù)次柱層析，得到了10種化合物，其中在三氯甲烷萃取相得到白藜蘆醇和虎杖苷，白藜蘆醇的含有量約為原植物藥材的0.28%；聶媛等［5］以乙醇為溶劑對白藜蘆醇、虎杖苷、大黃素等有效成分進行提取，確定出最佳工藝為溶劑80%乙醇，提取溫度70℃，料液比1∶20(g/mL)，提取時間2 h，提取率白藜蘆醇為5.57%、白藜蘆醇苷為10.74%、大黃素為2.67%、未知物1為8.87%、未知物2為7.13%?？傮w來講利用醇提法對虎杖中的組分進行分離，溶劑相對便宜，而且提取效率較高。

2.2 雙水相提取技術(shù)(aqueous two phase extraction，ATPE) 雙水相萃取屬于液液萃取的范疇，指當物質(zhì)進入雙水相體系后，由于表面性質(zhì)、電荷作用和各種力(如憎水鍵、氫鍵和離子鍵等)的作用和溶液環(huán)境的影響，在分成的上、下相中具有不同的梯度，從而達到萃取目的的一種方法。具有分相時間短，易于連續(xù)化操作，易于放大，技術(shù)簡單經(jīng)濟等特點。雙水相萃取技術(shù)主要應(yīng)用于生物工程領(lǐng)域，表現(xiàn)為對酶、蛋白質(zhì)等的分離，近幾年在天然產(chǎn)物分離中的應(yīng)用也得到了快速的發(fā)展，尤其是分離黃酮、有機酸等物質(zhì)的雙水相萃取技術(shù)逐漸成熟。常用的高聚物/無機鹽體系是聚乙二醇(PEG)/硫酸鹽或PEG/磷酸鹽體系、PEG/葡聚糖(Dectran)體系。雙水相萃取嚴格意義上講屬于分離技術(shù)而非提取技術(shù)，但是可以和提取環(huán)節(jié)相結(jié)合成為一個步驟，既節(jié)省時間又可以有針對性的提取組分。Wang H等［6］構(gòu)建了乙醇/硫酸銨體系對虎杖進行了微波輔助雙水相提取分離的研究，以雙水相體系為提取溶劑，省去了傳統(tǒng)溶劑的再萃取過程，同時具備微波輔助提取和雙水相萃取的優(yōu)點，把兩個操作步驟合為一步，提高了收率，降低了成本，比傳統(tǒng)的提取方法省去了1～2個步驟，更具優(yōu)越性。應(yīng)用該技術(shù)對虎杖白藜蘆醇和大黃素的提取效率較微波輔助提取和加熱回流提取分別提高了10%和20%，單從此收率來看其提高幅度不高，但是雙水相萃取技術(shù)作為分離技術(shù)與虎杖的提取技術(shù)的耦合應(yīng)用較少，還有很大的潛力。

2.3 水解提取技術(shù) 由于虎杖中的白藜蘆醇、大黃素、黃酮等物質(zhì)多以葡糖糖苷的形式存在，故在提取過程中為了提高目標物質(zhì)收率，常常在提取時融合化學(xué)、生物等水解技術(shù)來展開。現(xiàn)階段水解劑主要有無機酸、微生物和酶等。

在虎杖的提取中的化學(xué)水解主要利用鹽酸、硫酸等無機非氧化性酸。劉新榮等［7］利用12%鹽酸-乙醇體系對反式白藜蘆醇苷在55～75℃進行水解1～3 h，實驗表明白藜蘆醇苷轉(zhuǎn)化率高達45%，反應(yīng)時間為1～3 h，大大少于酶水解和酵解所需時間(最低約24 h)。此研究表明可以利用酸來輔助溶劑提取增加白藜蘆醇等目標物的提取量。酸水解具有轉(zhuǎn)化效率高，轉(zhuǎn)化時間短，轉(zhuǎn)化成本低等優(yōu)點，但是由于酸水解相對比較劇烈，可能會催化某些副反應(yīng)，破壞提取物中的相應(yīng)組分。因而人們又將反應(yīng)條件溫和，無副反應(yīng)等優(yōu)點的生物技術(shù)和酶技術(shù)應(yīng)用到虎杖的提取分離中。李夢青等［8］利用纖維素酶對虎杖進行了酶解，酶解后用乙醇在50℃提取2 h，提高了白藜蘆醇提取率的同時還提取出白藜蘆醇苷和大黃素，其中白藜蘆醇得率達到1.50%；另有研究顯示［9］，利用質(zhì)量分數(shù)為20 mg/g纖維素酶，加入3倍量的水，水解6 h，再用9倍體積的甲醇提取可使白藜蘆醇的提取率從0.5%上升到0.82%；對虎杖進行酶解多用纖維素酶，當然利用復(fù)合酶對虎杖進行水解的研究也在進行，黃志芳等［10］利用復(fù)合酶酶解虎杖提取物后經(jīng)水、乙醇-水、堿溶液分步溶解沉淀后，得到的白藜蘆醇粗品純度可達65%。酶法轉(zhuǎn)化率較高，但是酶的回收較為困難，目前的發(fā)展趨勢是將酶固定化，以提高酶的利用效率。

工業(yè)上對于虎杖的水解多采用微生物水解法，如利用酵母等微生物對糖苷鍵進行水解，水解后得到的苷元產(chǎn)量有較大程度的提高。呂之堯等［11］選取了幾種具有含糖苷鍵水解酶的微生物對虎杖進行直接作用篩選出四種優(yōu)良菌株，經(jīng)過TLC分析Aspergillus niger L.，菌株處理后的虎杖得率到達1.197%，與醇提和自酶解后醇提比較，提取效率顯著提高；鄒賢德等［12］將虎杖用水浸潤，控制溫度為35～45℃，酵母浸泡發(fā)酵72 h后，發(fā)酵液中白藜蘆醇量提高到原來的2.6～4.1倍；虎杖中的白藜蘆醇和大黃素等物質(zhì)具有抑菌作用，對酵母等微生物的繁殖緩慢，造成發(fā)酵時間偏長，Wang H等［13］在發(fā)酵培養(yǎng)基中加入虎杖粉末，以此馴化食品級微生物米曲霉，得到的米曲霉能夠在虎杖提取物中快速繁殖，用米曲霉直接將虎杖粗藥材中的虎杖苷轉(zhuǎn)化為白藜蘆醇，白藜蘆醇的提取百分率提高到1.36%，是微波輔助提取的3.6倍，最為重要的是發(fā)酵12 h后白藜蘆醇的轉(zhuǎn)化率就達到了100%。在該研究中的米曲霉是一種β-葡萄糖苷水解酶的高效生產(chǎn)菌株，普通的β-葡萄糖苷水解酶對糖苷鍵的水解效果在起始階段較好，但是隨著葡萄糖量的增加抑制了該酶的活性，馴化后的米曲霉可以在虎杖提取液中快速繁殖，高效的生產(chǎn)出β-葡萄糖苷水解酶作用域虎杖苷產(chǎn)生的葡萄糖又被米曲霉作為碳源消耗掉，即節(jié)省了時間又提高了效率。

2.4 超聲提取技術(shù) 超聲技術(shù)在天然產(chǎn)物的分離純化過程中，通過產(chǎn)生的空化效應(yīng)、騷動效應(yīng)、熱效應(yīng)，引起機械攪拌，從而破壞植物組織，加速溶劑穿透，促進有效組分溶出，提高提取率，同時還可以避免高溫提取對有效組分的破壞?；⒄戎械陌邹继J醇極其不穩(wěn)定，在70～80℃時會發(fā)生部分分解，利用超聲輔助可以在較低溫度下實現(xiàn)高效溶劑提取，保證組分的穩(wěn)定性。鄭可利等［14］通過正交實驗優(yōu)化了虎杖中白藜蘆醇的超聲輔助提取工藝，以80%的乙醇-丙酮(體積比為1∶1)水溶液為提取劑，料液比1∶10，pH為6，提取溫度30℃，提取50 min，白藜蘆醇的提取率為1.83%；超聲技術(shù)同樣也可以應(yīng)用于虎杖中蒽醌類物質(zhì)的提取，王欣等［15］采用正交設(shè)計優(yōu)選了蒽醌類物質(zhì)的超聲提取工藝，當提取溫度為50℃時，用藥材8倍量的80%醇溶液超聲提取30 min，在40 g虎杖原料中可提取出3.602 g蒽醌類物質(zhì)。

由于超聲提取裝置的技術(shù)指標只有功率和頻率，所以選擇合適的溶劑及提取時間尤為重要。超聲輔助提取作為一個新的高效的輔助提取技術(shù)有著廣闊的應(yīng)用前景，但是其對設(shè)備和能源的要求相對較高。

2.5 微波提取技術(shù) 微波萃取技術(shù)也是近年來應(yīng)用到天然產(chǎn)物提取方面的新興技術(shù)，微波可直接作用于分子，使分子的熱運動加劇，從而引起溫度升高，這種熱效應(yīng)可以快速破壞細胞壁，使有效成分更快的被分離提取出來。因此，其具有加熱時間短、加熱均勻、產(chǎn)品質(zhì)量好、較易實現(xiàn)自動化控制等優(yōu)點。而且不同極性的分子加熱速度不同，因此，微波技術(shù)可以通過控制條件來針對某種組分進行提取。公衍玲等［16］對虎杖中的色素進行微波輔助提取，實驗發(fā)現(xiàn)當采用30%乙醇溶劑，料液比1∶30(g/mL)，超聲溫度25℃，功率50 W，提取20 min時，色價和提取率都明顯提高；孫娟等［17］利用微波技術(shù)提取虎杖苷，在最佳工藝條件下白藜蘆醇的提取率可達到了91%；微波提取技術(shù)和其它技術(shù)聯(lián)用時能得到更高的提取效率，蘭天路等［18］采用纖維素酶-微波聯(lián)合提取虎杖中的白藜蘆醇，以體積分數(shù)為80% 乙醇溶液為提取劑，料液質(zhì)量比1∶20，酶解30 min，510 W功率下微波提取10 s，提取收率提高3倍，縮短了提取時間降低了生產(chǎn)成本；黎彧等［19］則將表面活性劑輔助提取與微波輔助提取技術(shù)相結(jié)合用于提取虎杖色素，以2 g虎杖干粉為原料，0.03%脂肪醇聚氧乙烯醚(AEO)-60%乙醇水溶液為提取劑，提取劑用量100 mL，微波功率800 W，提取時間0.0694 h，提取2次，與溶劑浸提取法(24 h)和索氏提取法(2 h)相比，提取率分別從77.2% 和61.8%增加到98.9%。由此可見，微波萃取技術(shù)應(yīng)用已經(jīng)相對成熟，與其它技術(shù)之間的聯(lián)用還有很大的潛力。

2.6 超臨界提取法 超臨界流體技術(shù)是近年來發(fā)展起來的一種分離新技術(shù)，尤其對生物資源的有效提取分離有獨特的特點和優(yōu)勢。應(yīng)用最多的超臨界流體是CO2，由于CO2不會對大氣造成污染，更不會對操作者帶來身體傷害，符合“綠色化學(xué)”的要求，因而得到廣泛應(yīng)用。周錦珂等［20］用95%乙醇作為夾帶劑，在50℃的條件下以25 MPa的萃取壓力，萃取90 min，最終提取物中的白藜蘆醇量達到33%以上。倪網(wǎng)東等［21］使用超臨界CO2技術(shù)萃取虎杖中的白藜蘆醇、虎杖苷、大黃素等成分，當壓力為25 MPa、溫度為40℃、CO2體積流量為25 L/h、夾帶劑為200 mL的80%乙醇，萃取時間為90 min時，獲得較高萃取率。超臨界CO2作為溶劑極性相對較小，對虎杖中的極性較小的大黃素等蒽醌類物質(zhì)提取率較高，而對白藜蘆醇等物質(zhì)的提取率相對較差。但是由于虎杖中的有效組分蒽醌類物質(zhì)較多，超臨界萃取殘渣中的其他組分也得到了相對的富集，因此，超臨界萃取對虎杖的開發(fā)和利用提供了一個很好的思路。但是超臨界提取裝置的成本較高，限制了它的大規(guī)模應(yīng)用。

2.7 環(huán)糊精(Cyclodextrin，CD)提取技術(shù) CD及其衍生物是近幾年來發(fā)展起來的一種新型材料，在改善藥物制劑方面的應(yīng)用尤為廣泛，在中藥制劑中的應(yīng)用表現(xiàn)為揮發(fā)油的固定化、增加藥物的穩(wěn)定性及溶解性等。國內(nèi)外學(xué)者對虎杖中白藜蘆醇CD技術(shù)的應(yīng)用始于制劑［22-24］，但近年CD技術(shù)也被用作特異性的提取分離材料應(yīng)用到包括虎杖在內(nèi)的天然產(chǎn)物的提取分離方向。研究發(fā)現(xiàn)［25］利用分子包含結(jié)晶法將水洗后的虎杖藥材加入β-CD后加熱攪拌，過濾，濾液在冰箱放置即可得到β-CD部位，該包合物的體外抗內(nèi)毒素作用強于陽性對照多黏菌素B，此過程直接就可以形成制劑，減少了分離步驟，省去了制劑時間。環(huán)糊精分離技術(shù)用于分離純化研究較少，還有很大的潛力。

綜上所述，虎杖的提取以采取溶劑提取技術(shù)為主流，超聲、微波和超臨界等新技術(shù)的引入，能有效提高虎杖藥材的提取效率，對環(huán)境更加友好。

3 虎杖中有效組分的分離和純化技術(shù)發(fā)展

虎杖提取物的有效部位可以直接應(yīng)用于臨床，但是藥理學(xué)和藥效研究則必須得到有效成分單體，這不僅是中藥發(fā)展和國際化的要求，也是提高產(chǎn)品附加值的有效途徑。而有效成分單體的獲取有賴于高效的分離純化技術(shù)，柱層析技術(shù)是目前天然產(chǎn)物分離純化的一個重要技術(shù)，傳統(tǒng)的柱層析技術(shù)包括硅膠柱層析和氧化鋁柱層析，兩者在醫(yī)藥工業(yè)發(fā)展過程中的貢獻不可抹殺，但是其針對性較差，單單靠洗脫劑的極性變化來進行分離純化，操作繁瑣，不容易控制。隨著材料技術(shù)的不斷發(fā)展，以大孔樹脂、膜分離、分子印記等分離純化技術(shù)被廣泛的應(yīng)用于虎杖有效成分的分離和純化技術(shù)上，有的已經(jīng)實現(xiàn)了產(chǎn)業(yè)化，大大的提高了生產(chǎn)效率。

3.1 大孔樹脂技術(shù) 大孔吸附樹脂是一種具有多空立體結(jié)構(gòu)的合成聚合高分子吸附劑，其聚合單體一般是苯乙烯和二苯乙烯類物質(zhì)，依靠分子篩和物理吸附作用對組分進行吸附，達到分離富集的作用?；⒄戎械陌邹继J醇和虎杖苷等物質(zhì)屬于二苯乙烯類物質(zhì)，與大孔樹脂單體結(jié)構(gòu)類似，因此分離富集作用較好。楊菊紅等［26］將虎杖被β-糖苷酶水解后的產(chǎn)物利用H1020型大孔樹脂進行了分離，其對白藜蘆醇的飽和吸附量高達51.4 mg/g，解吸率達到92.4%，純化后白藜蘆醇的純度達到71.5%(粗品中白藜蘆醇純度僅為8.71%)，起到了很好的富集和純化的作用；劉丹等［27］則對虎杖有效部位進行了大孔樹脂吸附純化研究，以虎杖苷、白藜蘆醇、大黃素、大黃素甲醚和總蒽醌的吸附量和解吸率為評價指標，發(fā)現(xiàn)D101樹脂對虎杖各有效成分具有較好的吸附分離性能；向海艷等［28］同樣使用大孔樹脂對白藜蘆醇苷進行了分離純化，用乙醇回流對虎杖有進行提取后，提取液中白藜蘆醇苷的純度僅為5.71%，使用了AB-8型大孔樹脂進行分離純化后藜蘆醇苷的純度可達31.5%。目前商業(yè)化的大孔樹脂數(shù)量和種類已經(jīng)基本上滿足了醫(yī)藥工業(yè)的需要，但是其分離純化的針對性和特異性還不是很強，因此，為了進行更好的分離純化，研發(fā)合成新的大孔樹脂材料也成為大孔樹脂發(fā)展的一個重要方向。

3.2 膜分離技術(shù) 膜分離技術(shù)是20世紀60年代后迅速崛起的一門分離新技術(shù)，由于兼有分離、濃縮、純化和精制的功能，又有高效、節(jié)能、環(huán)保、分子級過濾的優(yōu)點，過濾過程簡單、易于控制，因此，其在天然產(chǎn)物分離領(lǐng)域應(yīng)用和推廣速度驚人，并產(chǎn)生了巨大的經(jīng)濟效益和社會效益。劉志昌等［29］用HPLC檢測到虎杖白藜蘆醇苷粗提物的純度為8.7%，采用微濾膜對其進行除雜處理后，白藜蘆醇純度達到30.5%，繼續(xù)采用超濾膜對微濾膜濾液進行濃縮分離處理，得到的白藜蘆醇的純度達到了55.8%，兩次膜分離過程膜通量均較高。他們還對膜清洗后的膜通量進行了研究發(fā)現(xiàn)，清洗后膜通量為原來的99%，膜可以多次使用；蔣明廉等［30］首先利用逆流萃取對虎杖提取液進行了初步純化后白藜蘆醇純度達到20%以上，然后選擇了截留相對分子量為4000 Da的超濾膜，起到了很好的分離效果，分離后白藜蘆醇純度可以達到95%。由于膜分離過程完全是物理分離作用，耗能低，無廢液產(chǎn)生，可以達到清潔生產(chǎn)的目的，但是提取物中的高分子物質(zhì)可能會造成膜堵塞，所以要進行前處理過程，膜的相對造價較高，該方法適用于后端的分離純化。

3.3 分子印跡技術(shù) 分子印跡技術(shù)是近年來迅速發(fā)展起來的一種對特定目標分子具有高結(jié)合力的聚合物的制備技術(shù)，將功能單體在印跡分子上進行交聯(lián)，然后除去印跡分子，從而所合成的材料對目標物有特定的“契合”位置。故對待分離的物質(zhì)具有很高的選擇性。一般合成的材料性質(zhì)穩(wěn)定，對各種環(huán)境的耐受性好，該技術(shù)應(yīng)用到分離純化過程中效果顯著。向海艷等［31］以白藜蘆醇為模板分子，丙烯酰胺為功能單體，乙二醇二甲基丙烯酸酯(EGDMA)為交聯(lián)劑，合成了對白藜蘆醇具有較好選擇性的印跡聚合物，將虎杖提取液上印跡聚合物柱后，對比上柱前后的HPLC譜圖發(fā)現(xiàn)白藜蘆醇峰消失，利用5%乙酸－甲醇溶液為洗脫劑，洗脫發(fā)現(xiàn)洗脫液中主要為白藜蘆醇和虎杖苷，達到了非常明顯的富集效果；張明磊等［32］則以表面修飾乙烯基團的SiO2微球為基體，白藜蘆醇為模板分子，丙烯酰胺(AA)為功能單體，EGDMA為交聯(lián)劑，采用表面印跡技術(shù)制備核-殼型白藜蘆醇印跡微球，成功用于分離虎杖提取液中白藜蘆醇，分離后白藜蘆醇純度由45.7%提高為89.3%；張艷芳等［33］則將分子印跡技術(shù)和膜分離技術(shù)結(jié)合起來，制備出白藜蘆醇分子印跡復(fù)合膜，解決了普通印跡聚合物對目標分子類似物的吸附作用，該印跡復(fù)合膜對模板分子白藜蘆醇的吸附量遠遠大于其它結(jié)構(gòu)類似物，其飽和吸附量達1.72 μmol/g，為非印跡膜的3倍。分子印跡技術(shù)是一種不斷發(fā)展和創(chuàng)新的技術(shù)，但是分子印跡顆粒的合成則必須利用純度較高的目標產(chǎn)物作為模板分子。因此，成本相對較高，但是可以利用較為廉價的衍生物和結(jié)構(gòu)類似物進行替代，因此分子印跡技術(shù)的產(chǎn)業(yè)化還有很長的路要走。

3.4 高速逆流色譜技術(shù)(High Speed Counter Current Chromatography，HSCCC) 經(jīng)典色譜技術(shù)和高效液相色譜技術(shù)在現(xiàn)代天然產(chǎn)物分離和活性研究中發(fā)揮了非常重要的作用，已經(jīng)成為了基礎(chǔ)性和標準性的技術(shù)。在這些技術(shù)中多以硅膠或鍵合硅膠作為固定相起到載體和支撐作用，固定相對樣品的吸附過程會引起樣品損失，組分變性，進而樣本回收率會有所下降。HSCCC技術(shù)則是構(gòu)建一個兩相溶劑系統(tǒng)，以其中一相作為固定相，另外一相作為流動相，獨特的轉(zhuǎn)動系統(tǒng)帶動分離管道進行高速行星運動，形成無數(shù)個分液萃取過程，在短時間內(nèi)實現(xiàn)樣品在兩相體系中分配。各組分在兩相中分配狀況不同從而被流動相帶出的順序也不同，由此達到分離的目的。HSCCC技術(shù)分離純度效率高，可以一步制備純品，很多標準品制備都用到該技術(shù)。HSCCC技術(shù)目前也已應(yīng)用與分離黃酮、生物堿、多酚、醌類等，國內(nèi)外學(xué)者對虎杖的HSCCC分離進行了廣泛的探索和研究。如Chen L等［34］利用HSCCC技術(shù)對虎杖中乙酸乙酯提取物和水提取部分進行了分離，其中乙酸乙酯提取物用三氯甲烷-甲醇-水(4∶3∶2)組成的溶劑系統(tǒng)進行分離得到白藜蘆醇，水提物則用乙酸乙酯-乙醇-水(10∶1∶10)和比例為70∶1∶70相同溶劑系統(tǒng)進行了分離，白藜蘆醇和虎杖苷的得率分別為2.18%和1.07%；Chu X等［35］利用HSCCC分離了虎杖中的五種化合物，以石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水(2∶5∶4∶6)構(gòu)建兩相系統(tǒng)，提取物進樣后從上相中得到了樣本1，從下相中得到了樣本2。利用石油醚-乙酸乙酯-水(1∶5∶5)系統(tǒng)處理200 mg樣本1后得到19.3 mg的虎杖苷，17.6 mg的大黃素-8-D-葡萄糖苷，用石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水(3∶5∶4∶6)，和石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水(3∶5∶7∶3)系統(tǒng)梯度洗脫220 mg樣本2，得到了18.5 mg的白藜蘆醇，35.3 mg的大黃素和8.2 mg的大黃素甲醚，所得產(chǎn)品的HPLC純度均在95%以上；Fan P H等［36］對3種白藜蘆醇類似物進行了分離，虎杖的甲醇提取物利用半制備HSCCC，以環(huán)己烷-乙酸鹽-甲醇-水(1∶5∶1∶5)體系作為兩相體系，在500 mg提取物中經(jīng)一步制備出虎杖苷23 mg，白藜蘆醇糖苷17 mg，白皮杉醇苷15 mg，純度均為80%以上。

3.5 各種聯(lián)用技術(shù) 由于分離原理的限制或樣本性質(zhì)的特殊性，各種分離純化技術(shù)在應(yīng)用中總是存在著一些缺陷，聯(lián)用技術(shù)可以保留各種技術(shù)的優(yōu)勢，使各種技術(shù)特點實現(xiàn)互補，起到事半功倍的效果。所以，其成為當今藥物有效成分分離的一個重要的方法和發(fā)展趨勢。Zhang D L等［37］利用大孔樹脂-反相液相色譜技術(shù)將提取物中的虎杖苷、白藜蘆醇、大黃素甲醚的純度分別從7.5%、1.3%、2.4%提高到98.8%、98.2%和98.6%；Du F Y等［38］利用特殊狀態(tài)下的離子離子液體的不揮發(fā)、不可燃、性質(zhì)穩(wěn)定特性，結(jié)合微波輔助萃取，應(yīng)用于虎杖的提取分離，取到了相當好的效果，將1-n-丁基-3-甲基咪唑基離子液體作為虎杖微波輔助提取反式白藜蘆醇的溶劑，在最優(yōu)的條件下反式白藜蘆醇的提取率達到了92.8%。這些研究顯示出技術(shù)聯(lián)用帶來的強大效力。

4 展望

隨著對中藥虎杖的不斷研究，其化學(xué)成分及其藥理作用逐漸的被人們所了解，針對虎杖的開發(fā)也將進入了一個嶄新的階段。目前新技術(shù)的大規(guī)模的推廣和利用還遠遠不夠，分離提取方面針對虎杖的提取和分離組分的多樣化，實現(xiàn)綜合提取，這是增加虎杖商品附加值的有效途徑，也是虎杖研發(fā)的重要方向。另外，虎杖在國內(nèi)尚沒有一個有效的質(zhì)量控制標準，這是以虎杖為代表的中藥走向世界，為國際醫(yī)學(xué)界所認可的瓶頸之一。隨著儀器技術(shù)的發(fā)展和材料科學(xué)的不斷進步，虎杖中有效成分的提取分離技術(shù)以及相應(yīng)的質(zhì)控技術(shù)也將得到不斷的更新和升級，我們有理由相信這些新生力量在不久的將來會成為降低生產(chǎn)成本、發(fā)展綠色經(jīng)濟的強大引擎。

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