尖山橙中生物堿類成分的研究

周長江， 關煥玉， 張援虎*， 徐 冉， 郝小江， 楊小生

(1.貴州師范大學化學與材料科學學院，貴州貴陽550001;2.貴州省、中國科學院天然產(chǎn)物化學重點實驗室，貴州貴陽550002)

尖山橙 Melodinus fusiformis Champ.ex Benth.又名竹芚、芚皮黃、雞腿果、石牙楓，系夾竹桃科山橙屬植物。該屬植物全世界約有53種，主要分布于亞洲熱帶，亞熱帶及大洋洲。我國產(chǎn)11種，主要布于西南，華南及臺灣等省區(qū)。尖山橙主要分布于廣東、廣西、貴州、四川等地，全株供藥用，可用于活血，補肺，通乳和治風濕性心臟病等［1-2］。尖山橙中富含單萜吲哚生物堿類成分，該類成分具有多種生物活性，如抗生育，消炎，抗腫瘤等［3-5］。目前對尖山橙化學成分的研究報道較少［6］，本實驗對尖山橙中的生物堿類成分進行了系統(tǒng)研究，并從中分離鑒定了9個單體成分，分別為:tabersonine(Ⅰ )，11-hydroxytabersonine(Ⅱ)，venalstonidine(Ⅲ )，pachysiphine(Ⅳ )，venalstonine(Ⅴ)，scandine(Ⅵ)，10-hydroxyscandine(Ⅶ )，scandine Nb-oxide(Ⅷ)和5-methoxystrictamine(Ⅸ)?；衔铫?，Ⅳ，Ⅸ為首次從尖山橙中分離鑒定，其中化合物Ⅸ是首次從山橙屬植物中分離鑒定。

1 儀器和材料

X-4型顯微熔點儀(溫度計未校正);美國 Rudolph公司Autopol 1型自動旋光測定儀;美國 Varian INOVA-400型核磁共振儀(TMS內(nèi)標);美國惠普公司GC-MS5937型質(zhì)譜儀;(D001×7)強酸型離子樹脂為天津南開大學化工廠生產(chǎn);薄層色譜、柱色譜用硅膠均為青島海洋化工分廠產(chǎn)品;反相 Rp-18薄層色譜板為德國Merck公司生產(chǎn);Rp-18柱色譜用硅膠(50 μm)為日本 YMC公司生產(chǎn);葡聚糖凝膠Sephadex LH-20為瑞士生產(chǎn);分離提取用溶劑均為工業(yè)級重蒸使用。

樣品于2008年7月采自貴州省遵義市綏陽縣旺草鎮(zhèn)寬闊水，經(jīng)貴陽中醫(yī)學院陳德媛教授鑒定為尖山橙Melodinus fusiformis，標本存放于貴州省、中國科學院天然產(chǎn)物化學重點實驗室。

2 提取和分離

255 kg干燥粉碎尖山橙全草用0.05 mol/L鹽酸冷浸，浸液通過強酸型離子樹脂后，用10% 的氨水堿化，晾干，再用95% 乙醇洗脫濃縮得浸膏1510 g。浸膏經(jīng)硅膠(200～300目)柱色譜分離，以三氯甲烷-甲醇(100∶0→0∶100)梯度洗脫，TLC檢測合并，得到18個流份。其中，流份A部分(130 g)經(jīng)過反復正相硅膠、反相Rp-18和葡聚糖凝膠LH-20柱色譜分離與純化，分別用三氯甲烷-甲醇(100∶0→0 ∶100)、石油醚-丙酮(100 ∶0→0 ∶100)、水-甲醇(100∶100→0∶100)梯度洗脫，洗脫物再經(jīng)反復分離純化，重結(jié)晶，得到化合物Ⅰ(1.2 g)，Ⅱ (60 mg)，Ⅲ(560mg)，Ⅳ(21 mg)，Ⅴ(500 mg)，Ⅵ (18.5 g)，Ⅶ (3.0 g)，Ⅷ (14 mg)。同樣方法，從流份 B部分 (146 g)得到化合物Ⅸ(90 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物Ⅰ:白色粉末;分子式為C21H24O2N2;［α］D9.7-23.5(CHCl3，C 0.85);EI-MS m/z:336［M］+，305，229，214，196，170，168，154，135，122，121，107，93。1H NMR(CDCl3，400 MHz)δ:9.00(1H，s，-NH)，7.25(1H，d，J=7.2 Hz，H-9)，7.17(1H，t，J=7.6 Hz，H-11)，6.89(1H，t，J=7.6 Hz，H-10)，6.83(1H，d，J=8.0 Hz，H-12)，5.81(1H，dd，J=10.0，3.6 Hz，H-14)，5.73(1H，d，J=10.0 Hz，H-15)3.77(3H，s，-OMe)，1.08(2H，q，J=7.6 Hz，H-19)，0.66(3H，t，J=7.6 Hz，H-18)。13C NMR(CDCl3，100 MHz)δ:169.3(s，C=O)，166.7(s，C-2)，143.5(s，C-13)，137.8(s，C-8)，133.4(d，C-15)，128.0(d，C-11)，125.1(d，C-14)，121.8(d，C-9)，120.9(d，C-10)，109.6(d，C-12)，92.4(s，C-16)，70.4(d，C-21)，55.4(s，C-7)，51.2(q，OCH3)，50.9(t，C-5)，50.8(t，C-3)，44.8(t，C-6)，41.6(s，C-20)，28.7(t，C-19)，27.2(t，C-17)，7.8(q，C-18)。以上數(shù)據(jù)和文獻［7-8］報道的 tabersonine一致，故鑒定該化合物為 tabersonine。

化合物Ⅱ:無色塊狀結(jié)晶(甲醇);分子式為C21H24O3N2;mp 165 ℃;［α］D10.7-288.4(CHCl3，C 0.43)。EI-MS m/z:352 ［M］+，336，321，294，245，221，184，170，135，122，121，107，93。1H NMR(CDCl3，400 MHz)δ:8.97(1H，s，-NH)，7.07(1H，d，J=8.0 Hz，H-9)，6.39(1H，s，H-12)，6.33(1H，d，J=8.0 Hz，H-10)，5.78(1H，m，H-14)，5.71(1H，d，J=10.0 Hz，H-15)，3.77(3H，s，-OMe)，3.48(1H，d，J=15.6 Hz，H-3)，3.19(1H，d，J=15.6 Hz，H-3)，3.05(1H，brs，H-5)，2.68(1H，brd，H-5)，2.62(1H，brs，H-21)，2.56(1H，d，J=16.4 Hz，H-17)，2.44(1H，d，J=16.4 Hz，H-17)，2.08(1H，brs，H-6)，1.79(1H，brs，H-6)，1.01(1H，m，H-19)，0.88(1H，m，H-19)，0.65(3H，t，J=7.8 Hz，H-18)。13C NMR(CDCl3，100 MHz)δ:169.2(s，C=O)，167.3(s，C-2)，156.0(s，C-11)，144.4(s，C-13)，133.1(d，C-15)，130.3(s，C-8)，124.8(d，C-14)，122.0(d，C-10)，106.9(d，C-9)，97.7(d，C-12)，92.4(s，C-16)，70.1(d，C-21)，54.5(s，C-7)，51.1(q，OCH3)，50.9(t，C-5)，50.6(t，C-3)，44.6(t，C-6)，41.4(s，C-20)，28.4(t，C-19)，26.9(t，C-17)，7.5(q，C-18)。EI-MS、1H NMR 數(shù)據(jù)與文獻［9-10］報道的11-hydroxytabersonine一致，故鑒定該化合物為11-hydroxytabersonine。

化合物Ⅲ:白色塊狀結(jié)晶，分子式為C21H24O3N2，mp 230 ℃。［α］D8.9-78.6(CHCl3，C 1.0)。EI-MS m/z:352［M］+:335，323，309，279，214，194，180，156，138，123，108.1H NMR(CDCl3，400 MHz)δ:7.04(1H，d，J=7.6 Hz，H-9)，7.00(1H，t，J=7.6 Hz，H-11)，6.75(1H，t，J=7.6 Hz，H-10)，6.70(1H，d，J=7.6 Hz，H-12)，3.80(1H，s，-NH)，3.76(3H，s，-OCH3)。13C NMR(CDCl3，100 MHz)δ:174.1(s，C=0)，149.1(s，C-13)，139.1(s，C-8)，126.9(d，C-11)，121.2(d，C-9)，119.3(d，C-10)，111.1(d，C-12)，67.0(d，C-2)，61.6(s，C-21)，58.0(d，C-15)，55.8(s，C-7)，53.6(d，C-14)，52.0(q，OCH3)，49.2(t，C-5)，48.0(t，C-3)，43.2(d，C-16)，36.2(t，C-6)，35.8(s，C-20)，33.8(t，C-19)，27.6(t，C-18)，26.8(t，C-17)。以上 EI-MS、1H NMR 數(shù)據(jù)與文獻［11-13］報道的 venalstonidine基本一致。B.Das等于1965年首次分得該化合物，但未提供13C NMR數(shù)據(jù)，本實驗首次提供13C NMR數(shù)據(jù)。

化合物Ⅳ:白色結(jié)晶(甲醇);分子式為C21H24O3N2;mp 168 ℃;［α］D11.3-403.8(CHCl3，C 1.0)。EI-MS m/z:352［M］+，335，322，309，295，266，253，238，227，214，180，167，154，138，127，108，93。1H NMR(CDCl3，400 MHz)δ:8.99(1H，s，-NH)，7.18(1H，d，J=7.2 Hz，H-9)，7.16(1H，t，J=7.8 Hz，H-11)，6.89(1H，t，J=7.8 Hz ，H-10)，6.81(1H，d，J=7.8 Hz，H-12)，3.78(3H，s，-OCH3)，0.94(2H，m，H-19)，0.74(3H，t，J=7.2 Hz，H-18)。13C NMR(CDCl3，100 MHz)δ:168.9(s，C=O)，165.2(s，C-2)，143.1(s，C-13)，137.6(s，C-8)，127.8(d，C-11)，121.4(d，C-9)，120.5(d，C-10)，109.3(d，C-12)，91.1(s，C-16)，71.2(d，C-21)，56.3(d，C-15)，54.6(s，C-7)，52.1(d，C-14)，51.1(t，C-5)，51.0(q，OCH3)，49.7(t，C-3)，44.1(t，C-6)，37.2(s，C-20)，26.4(t，C-19)，23.3(t，C-17)，7.2(q，C-18)。以上數(shù)據(jù)與文獻［14-15］報道的pachysiphine一致，故鑒定該化合物為pachysiphine。

化合物Ⅴ:無色塊狀結(jié)晶(甲醇);分子式為C21H24O2N2;mp 138 ℃;［α］D8.8-52.4(CHCl3，C 0.84)。EI-MS m/z:336 ［M］+，308，242，229，216，156，135，122，107。1H NMR(CDCl3，400 MHz)δ:7.09(1H，d，J=7.2 Hz，H-9)，7.05(1H，t，J=7.6 Hz，H-11)，6.77(1H，t，J=7.6 Hz，H-10)，6.72(1H，d，J=7.2 Hz，H-12)，5.75(1H，m，H-14)，5.53(1H，d，J=9.6 Hz，H-15)，3.88(1H，s，-NH)，3.74(3H，s，-OCH3)，3.50(2H，d，J=10.0 Hz，H-3)。13C NMR(CDCl3，100 MHz)δ:174.2(s，C=0)，149.3(s，C-13)，140.0(s，C-8)，132.8(d，C-15)，126.9(d，C-11)，126.9(d，C-14)，121.5(d，C-9)，119.4(d，C-10)，111.3(d，C-12)，67.0(d，C-21)，66.8(s，C-2)，56.3(s，C-7)，51.9(q，OCH3)，50.2(t，C-5)，49.2(t，C-3)，43.6(d，C-16)，36.4(t，C-6)，35.2(s，C-20)，34.2(t，C-19)，31.7(t，C-18)，29.7(t，C-17)。以上數(shù)據(jù)與文獻［11，16］報道的 venalstonine一致，故鑒定該化合物為venalstonine。

化合物Ⅵ:無色塊狀結(jié)晶(甲醇);分子式為C21H22O3N2;mp 192 ℃;［α］D8.5183.8(CHCl3，C 1.09)。EI-MS m/z:350［M］+，335，322，291，263，230，199，134，91，77。1H NMR(CDCl3，400 MHz)δ:9.14(1H，s，-NH)，7.39(1H，d，J=7.6 Hz，H-9)，7.19(1H，t，J=7.6 Hz，H-11)，7.08(1H，t，J=7.6 Hz，H-10)，6.77(1H，d，J=7.6 Hz，H-12)，5.72(2H，m，H-14，15)，5.72(1H，m，H-19)，4.94(1H，d，J=17.2 Hz，H-18)，4.81(1H，d，J=10.8 Hz，H-18)，3.59(3H，s，OCH3)。13C NMR(CDCl3，100 MHz)δ:170.5(s，C-2)，169.4(s，C=O)，142.2(d，C-19)，134.3(s，C-13)，131.5(d，C-15)，128.7(s，C-8)，127.5(d，C-11)，126.9(d，C-9)，123.7(d，C-10)，122.8(d，C-14)，115.6(d，C-12)，114.6(t，C-18)，83.6(d，C-21)，63.6(s，C-16)，57.7(s，C-7)，53.3(t，C-5)，52.6(q，OCH3)，47.7(t，C-3)，44.0(t，C-17)，46.6(s，C-20)，39.8(t，C-6)。以上數(shù)據(jù)與文獻［17］報道的 scandine一致，故鑒定該化合物為scandine。

化合物Ⅶ:白色塊狀結(jié)晶(甲醇);分子式為C21H22O4N2;mp 180 ℃;［α］D8.5254.5(CHCl3，C 1.00)。EI-MS m/z:366［M］+，351，338，307，279，246，226，134，120。1H NMR(CDCl3，400 MHz)δ:8.78(1H，s，-NH)，6.92(1H，s，H-9)，6.52(1H，d，J=8.0 Hz)，6.40(1H，d，J=8.0 Hz)，5.86(2H，m，H-14，15)，5.76(1H，dd，J=17.0，10 Hz，H-19)，5.03(1H，d，J=17.0 Hz，H-18)，4.90(1H，d，J=10.0 Hz，H-18)，3.55(1H，s，OCH3)，3.03(1H，d，J=13.6 Hz，3-H)，2.68(1H，d，J=13.6 Hz，3-H)。13C NMR(CDCl3，100 MHz)δ:170.0(s，C-2)，168.1(s，C=O)，152.7(s，C-10)，142.8(d，C-19)，132.5(d，C-15)，129.0(s，C-13)，127.2(s，C-8)，121.7(d，C-14)，116.1(d，C-12)，114.6(d，C-9)，114.6(d，C-11)，113.8(t，C-18)，81.9(d，C-21)，62.3(s，C-16)，58.8(s，C-7)，52.7(q，OCH3)，52.6(t，C-5)，46.3(t，C-3)，44.7(s，C-20)，43.7(t，C-17)，36.1(t，C-6)。以上數(shù)據(jù)與文獻［17］報道的10-hydroxy scandine一致，故鑒定該化合物為10-hydroxy scandine。

化合物Ⅷ:白色結(jié)晶(丙酮);分子式為C21H22O4N2;mp 241℃(分解);［α］D13.8148.5(CHCl3，C 1.00)。EI-MS m/z:366 ［M］+:350，335，322，307，291，235，230，198，130，115。1H NMR(CDCl3，400 MHz)δ:9.85(1H，s，-NH)，8.13(1H，d，J=7.6 Hz，H-9)，7.24(1H，t，J=7.6 Hz，H-11)，7.13(1H，t，J=7.6Hz H-10)，6.84(1H，d，J=7.6 Hz，H-12)，5.88(1H，d，J=10.4 Hz，H-18)，5.13(1H，d，J=17.2 Hz，H-19)，5.04(1H，d，J=10.4 Hz，H-18)，4.00(1H，s，H-21)，3.57(3H，s，OCH3)，3.07(1H，d，J=14.0 Hz，H-17)，2.48(1H，d，J=14.0 Hz，H-17)。13C NMR(CDCl3，100 MHz)δ:169.2(s，C-2)，168.3(s，C=O)，142.6(d，C-19)，136.5(s，C-13)，131.9(d，C-15)，131.4(d，C-9)，129.8(d，C-11)，126.7(s，C-8)，124.8(d，C-14)，116.5(d，C-10)，115.8(d，C-12)，115.7(t，C-18)，92.9(d，C-21)，66.4(t，C-5)，62.9(t，C-3)，62.6(s，C-16)，59.9(s，C-7)，52.6(q，OCH3)，50.2(s，C-20)，42.8(t，C-17)，34.8(t，C-6)。以上數(shù)據(jù)與文獻［6］報道的scandine Nb-oxide一致，故鑒定該化合物為 scandine Nb-oxide。

化合物Ⅸ:無色粉末，分子式為 C21H24O3N2;mp 230 ℃;［α］D10-167.2(CHCl3，C 0.20)。EIMS m/z:352［M］+307，275，229，214，204，191，168，137，123，108。1H NMR(CCl3，400 MHz)δ:7.62(1H，d，J=7.6 Hz，H-9)，7.39(1H，d，J=7.6 Hz，H-12)，7.34(1H，dd，J=7.2，7.6 Hz，H-10)，7.14(1H，dd，J=7.2，7.6 Hz，H-11)，5.50(1H，d，J=6.8 Hz，H-19)，4.48(1H，d，J=5.2 Hz，H-3)，4.07(1H，d，J=16.8 Hz，H-21)，3.88(1H，d，J=4.0 Hz，H-5)，3.75(1H，dd，J=4.4，15.2 Hz，H-6)，3.70(3H，s，OCH3)，3.43(1H，s，H-15)，3.21(3H，s，OCH3)，3.09(1H，d，J=17.2 Hz，H-21)，2.68(1H，m，H-14)，2.22(1H，d，J=15.2 Hz，H-6)，1.91(1H，d，J=3.6 Hz，H-16)，1.76(1H，m，H-14)，1.54(3H，d，J=6.8 Hz，H-18).13C NMR(CDCl3，100 MHz)δ:190.7(s，C-2)，171.6(s，C-17)，155.6(s，C-13)，145.4(s，C-8)，136.6(s，C-20)，128.0(d，C-11)，125.0(d，C-10)，123.2(d，C-12)，121.0(d，C-19)，120.7(d，C-9)，89.9(d，C-5)，56.0(d，C-16)，54.6(q，OCH3)，53.5(s，C-7)，51.5(d，C-3)，51.5(q，C-22)，50.3(t，C-21)，38.4(t，C-6)，35.8(t，C-14)，32.6(d，C-15)，12.9(q，C-18)。以上數(shù)據(jù)與文獻［18］報道的5-methoxystrictamine一致，故鑒定該化合物為5-methoxystrictamine。

［致謝］核磁共振波譜數(shù)據(jù)和質(zhì)譜數(shù)據(jù)由貴州省、中國科學院天然產(chǎn)物化學重點實驗室儀器室提供。

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