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      山楂總黃酮的逆流提取研究

      2012-01-25 07:34:32戴曉燕余陳歡吳巧鳳
      中成藥 2012年9期
      關(guān)鍵詞:逆流溶媒飲片

      戴曉燕,余陳歡,吳巧鳳*

      (1.浙江中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院,浙江杭州310053;2.浙江省醫(yī)學(xué)科學(xué)院,浙江杭州310013)

      山楂系薔薇科植物山里紅Crataegus pinnatifida Bge.var.major N.E.Br.或山楂Crataegus pinnatifida Bge.的干燥成熟果實(shí),具有健胃消食,行氣散瘀之功效,屬于我國藥食同源的傳統(tǒng)中藥材。現(xiàn)代研究表明,黃酮類物質(zhì)為山楂的主要活性成分[1],含有量較高[2],能夠起到助消化[3]、降血脂[4]、保肝[5]、強(qiáng)心[6]及抗氧化[7]等作用。山楂在醫(yī)用藥品及保健品方面的開發(fā)利用較頻繁,它的價(jià)值往往體現(xiàn)于其加工產(chǎn)品的附加值上,故加強(qiáng)山楂有效物質(zhì)的產(chǎn)業(yè)化提取十分必要。目前,山楂黃酮的提取方法包括有熱回流法、水煎法及滲漉法等方法,其中以熱回流法最為常用,但這些方法存在著提取率低、提取時(shí)間長(zhǎng)、溶劑用量大、后續(xù)工段能耗大等缺點(diǎn)[8]。逆流提取是一種基于傳統(tǒng)單罐提取發(fā)展起來的新型提取方法,研究表明,該方法可確保藥材與溶劑之間始終保持較大的有效成分濃度差,可大大增加提取效率[9]。本研究擬采用三級(jí)逆流提取、三效逆流提取工藝模型的實(shí)驗(yàn)室模擬方法及常規(guī)回流提取方法提取山楂總黃酮,并客觀地將3種方法進(jìn)行比較和評(píng)價(jià),確定山楂總黃酮的最適提取方法,以期為山楂黃酮相關(guān)產(chǎn)品的產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

      1 儀器與試藥

      1.1 儀器UV—2550紫外可見分光光度計(jì)(日本島津公司),UV probe紫外工作站;HH—S型恒溫水浴鍋(鞏義市瑛峪予華儀器廠);0412—1型高速離心機(jī)(上海手術(shù)器械廠);BS110S電子分析天平(北京賽多利斯天平有限公司);DHG—9035熱風(fēng)循環(huán)烘箱(上海林頻儀器設(shè)備有限公司),WND—200A型高速中藥粉碎機(jī)(上海微型電機(jī)廠)。

      1.2 試藥蘆丁對(duì)照品(批號(hào):100226)購自中國藥品生物制品檢定所;山楂飲片(產(chǎn)地:山東;批號(hào):111118)購自浙江中醫(yī)藥大學(xué)飲片廠,經(jīng)浙江中醫(yī)藥大學(xué)俞冰副教授鑒定屬薔薇科植物山楂Crataegus pinnatifida Bge.的干燥成熟果實(shí);所用試劑均為分析純,實(shí)驗(yàn)用水為蒸餾水。

      2 方法與結(jié)果

      2.1 不同提取方法提取山楂總黃酮

      2.1.1 三級(jí)逆流提取精密稱取干燥至恒定質(zhì)量的山楂飲片3份,各10.0 g,分別置于3個(gè)圓底燒瓶中,以60%乙醇為提取溶媒,按照三級(jí)逆流提取工藝進(jìn)行提取。具體方法如圖1所示,第1階段山楂飲片被提取3次,每次均加入新鮮溶媒50 mL,得溶液E1-1、E1-2、E1-3,其中E1-1儲(chǔ)存。第2階段提取,溶液E1-2、E1-3分別作為第1次、第2次提取的溶媒,得溶液E2-1、E2-2,其中E2-1儲(chǔ)存;第3次則采用新鮮溶媒提取第2次所得藥渣,得溶液E2-3。第3階段,溶液E2-2、E2-3分別作為第1、第2次提取的溶媒,得溶液E3-1、E3-2均儲(chǔ)存;第3次采用新鮮溶媒提取第2次所得藥渣,得溶液E3-3儲(chǔ)存。每階段每次提取溫度為80℃,提取時(shí)間20 min。最后合并各所得溶液,放涼得最終提取液。該提取方法平行試驗(yàn)3次。

      圖1 三級(jí)逆流提取過程示意圖Fig.1 Schematic diagram of three-stage countercurrent extraction

      2.1.2 三效逆流提取平行精密稱取干燥至恒定質(zhì)量的山楂飲片5份,各6.0 g,分別置于5個(gè)圓底燒瓶中以60%乙醇為提取溶媒,按照三效逆流提取工藝進(jìn)行提取。具體提取方法如圖2所示,方框中1-12分別代表第1至12提取步驟,方框上方符號(hào)代表每步驟所加入的溶媒,左側(cè)符號(hào)代表被提取物,如:步驟1為加入新鮮提取溶媒與新鮮飲片進(jìn)行提取;步驟2為新鮮提取溶媒與步驟1所得藥渣進(jìn)行提取,依此類推。每步提取溫度為80℃,提取時(shí)間為15 min,凡需加入新鮮溶媒時(shí)其加入體積均為30 mL。最后合并各所得溶液,放涼得最終提取液。該提取方法平行試驗(yàn)3次。

      圖2 三效逆流提取過程示意圖Fig.2 Schematic diagram of three-effect countercurrent extraction

      2.1.3 常規(guī)回流提取精密稱取干燥至恒定質(zhì)量的山楂飲片30 g,置圓底燒瓶中,加入60%乙醇溶液300 mL,80℃熱回流5 h,傾出放涼得最終提取液。該提取方法平行試驗(yàn)3次。

      2.2 總黃酮的定量測(cè)定

      2.2.1 對(duì)照品溶液的制備精密稱取干燥至恒定質(zhì)量的蘆丁對(duì)照品5.58 mg置于25 mL量瓶中,以60%乙醇稀釋至刻度線,搖勻,得質(zhì)量濃度為0.223 2 mg/mL的蘆丁對(duì)照品溶液,備用。

      2.2.2 供試品溶液的制備量定2.1項(xiàng)下各最終提取液體積,均量取120 mL提取液濃縮至50 mL,以4 000 r/min的轉(zhuǎn)速高速離心10 min,傾出上清液并將濃縮液用60%乙醇溶液定容成100 mL,備用。

      2.2.3 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇精密吸取對(duì)照品溶液1.0 mL于25 mL量瓶中,加入5%NaNO2溶液1.0 mL,搖勻,放置6 min后加入10%的Al(NO3)3溶液1.0 mL,搖勻,放置6 min后再加入10%NaOH溶液10 mL,搖勻后用60%乙醇溶液稀釋至刻度線,放置15 min后,在波長(zhǎng)400~600 nm范圍內(nèi)進(jìn)行掃描,每隔10 nm測(cè)定吸光度。結(jié)果發(fā)現(xiàn)溶液在510 nm處的吸光度值最大,故本實(shí)驗(yàn)選擇510 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

      2.2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立精密吸取對(duì)照品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、4.0、5.0 mL,分別置于25 mL的量瓶中,同2.2.3項(xiàng)下方法顯色后,作同行試劑空白對(duì)照測(cè)定吸光度,以吸光度A為縱坐標(biāo)Y,以蘆丁質(zhì)量濃度C(mg/mL)為橫坐標(biāo)X,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得回歸方程:Y=13.064X-0.022 9(R=0.999 6)。結(jié)果表明,蘆丁在0.004 464~0.044 64 mg/mL范圍內(nèi)與吸光度呈良好的線性關(guān)系。

      2.2.5 精密度試驗(yàn)精密吸取對(duì)照品溶液2.0 mL,依2.2.3項(xiàng)中方法顯色后于510 nm波長(zhǎng)處連續(xù)測(cè)定6次吸光度。結(jié)果RSD為1.67%,表明儀器的精密度良好。

      2.2.6 重復(fù)性試驗(yàn)精密稱取山楂飲片,依照2.1項(xiàng)下各方法提取,并按2.2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液各6份,同2.2.3項(xiàng)中方法顯色后分別測(cè)定吸光度。結(jié)果RSD分別為1.15%、0.74%、0.97%,表明方法的重復(fù)性良好。

      2.2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)精密吸取供試品溶液0.3 mL,依2.2.3項(xiàng)下方法顯色后,每隔5 min測(cè)定吸光度,結(jié)果RSD為1.43%,表明溶液在30 min內(nèi)顯色穩(wěn)定。因此,吸光度的測(cè)定應(yīng)控制在30 min以內(nèi)進(jìn)行。

      另精密吸取0.3 mL供試品溶液分別于0、1、2、3、4、5、6 h后,按2.2.3項(xiàng)下方法顯色后測(cè)定吸光度,結(jié)果RSD為2.28%,表明供試品溶液在6 h內(nèi)穩(wěn)定。

      2.2.8 加樣回收試驗(yàn)適量量取已知總黃酮量的山楂提取液9份,分別精密加入相當(dāng)于溶液中總黃酮含有量80%、100%及120%的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品,按2.2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液,并依2.2.3項(xiàng)下方法顯色后,測(cè)定吸光度,計(jì)算回收率,結(jié)果平均回收率為99.68%,RSD為1.60%,符合要求,見表1。

      2.2.9 山楂總黃酮提取得率精密量取供試品溶液0.2 mL,依2.2.3項(xiàng)下方法顯色,測(cè)定吸光度,代入回歸方程計(jì)算總黃酮含有量,并進(jìn)一步算得提取得率。

      2.3 不同提取方法的比較為客觀地比較不同提取方法,對(duì)上述各提取方法的飲片用量、溶劑用量、總提取時(shí)間及提取得率進(jìn)行了羅列,見表2。

      表1 加樣回收試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果(n=9)Tab.1 Results of recovery tests(n=9)

      表2 不同提取方法藥材用量、溶劑用量、提取時(shí)間及提取得率Tab.2 Usage,solvent usage,extract time and extract yield of different extract methods

      由表2可知,三級(jí)逆流、三效逆流提取方法與常規(guī)回流提取方法相比,三者的總黃酮提取得率相當(dāng),但前兩種提取方法的溶劑消耗量明顯下降,其中三效逆流提取的溶劑消耗量?jī)H為常規(guī)回流提取方法的1/2;較之常規(guī)回流提取,兩種逆流提取方法的提取時(shí)間也大大縮短,為常規(guī)回流提取方法的3/5。表明逆流提取方法具有提取效果好、節(jié)省溶劑、節(jié)約實(shí)驗(yàn)成本以及縮短提取時(shí)間等優(yōu)點(diǎn),將逆流提取方法引入山楂黃酮類物質(zhì)的實(shí)驗(yàn)室提取或推廣至山楂黃酮相關(guān)產(chǎn)品的產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)均有可助于工作效率的大幅度提高。

      為進(jìn)一步說明逆流提取方法具有較高的提取效率,另取山楂飲片3份,各10 g,分別采用三級(jí)逆流、三效逆流及常規(guī)回流提取方法,以60%乙醇為溶劑,控制三者的總提取時(shí)間均為1 h,總?cè)軇┯昧烤鶠?00 mL,提取溫度均為80℃,提取山楂中總黃酮。提取結(jié)束放涼后,取各提取液20 mL,以60%乙醇定容至50 mL量瓶中。采集用不同方法提取并定容后所得溶液的圖像(見圖3),運(yùn)用Imagepro Plus 6.0(專業(yè)圖像分析軟件6.0)對(duì)各圖像進(jìn)行參數(shù)分析。

      結(jié)果各溶液圖像的像素密度大小依次為三效逆流(132.67)>三級(jí)逆流(115.66)>常規(guī)回流(92.67),表明在相同的提取條件下,逆流提取能更有效地使藥材中的溶質(zhì)擴(kuò)散至溶劑中。

      圖3 不同提取方法所得提取液圖像Fig.3 Solution images of different extract methods

      3 討論

      藥材有效成分的提取過程是溶質(zhì)從固相藥材高濃度向液相低濃度滲透的傳質(zhì)過程。有效成分的提取浸出擴(kuò)散力來源于提取溶媒與固相藥材組織內(nèi)有效成分的濃度差,濃度差越大,擴(kuò)散傳質(zhì)的動(dòng)力越大,浸出速度越快,有效成分浸出率越大[10]。逆流提取方法可始終保持兩相間較大的濃度梯度,從而維持較好的提取推動(dòng)力來達(dá)到提高提取效率的目的。本實(shí)驗(yàn)分別采用了傳統(tǒng)回流提取與兩種逆流提取方法來提取山楂中總黃酮,結(jié)果顯示逆流提取可大大減少提取的溶劑用量和時(shí)間,在節(jié)省提取成本的同時(shí)也保證了提取的質(zhì)量,且對(duì)提取設(shè)備無過高要求,既適合推廣應(yīng)用于山楂黃酮類相關(guān)藥品、食品的生產(chǎn)也適用于實(shí)驗(yàn)室的中藥成分提取。此外,考慮實(shí)際生產(chǎn)或?qū)嶒?yàn)的方便性及可操作性,與三效逆流相比之下,三級(jí)逆流提取的操作步驟相對(duì)簡(jiǎn)便,亦能較好的提高提取效率,值得進(jìn)一步推廣應(yīng)用。

      [1]吳世杰,李秋津,肖學(xué)鳳,等.山楂化學(xué)成分及藥理作用的研究[J].藥物評(píng)價(jià)研究,2010,33(4):316-319.

      [2]蔣福勇.山楂資源的開發(fā)與利用簡(jiǎn)述[J].南方園藝,2011,22(1):56-58.

      [3]劉家蘭,徐曉玉.山楂的藥理作用研究進(jìn)展[J].中草藥,2009,40(S1):63-66.

      [4]楊宇杰,林靜,王春民,等.山楂葉總黃酮對(duì)大鼠高脂血癥早期干預(yù)的實(shí)驗(yàn)研究[J].中草藥,2008,39(12):1848-1850.

      [5]李晶,馮五金.生山楂、澤瀉、莪術(shù)對(duì)大鼠脂肪肝的影響及其交互作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].山西中藥,2006,22(3):57-59.

      [6]鞠曉云,方泰惠,張文通.山楂葉總黃酮凍干粉對(duì)麻醉犬冠脈結(jié)扎所致心肌梗死的影響[J].南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2005,21(6):381-383.

      [7]Liu T X,Cao Y N,Zhao M M.Extraction optimization,purification and antioxidant activity of procyanidins from hawthorn(C.pinnatifida Bge.var.major)fruits[J].Food Chem,2010,119(4):1656-1662.

      [8]柳唐鏡,張棵,劉國英,等.中國山楂屬植物資源研究和利用現(xiàn)狀[J].南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2011,42(8):847-852.

      [9]Gaile A A,Saifidinov B M,Kolesov V V,Koldobskaya L L.Multistep countercurrent extraction of organic sulfur compounds and arenes from the high-sulfur diesel fraction[J].Russian J Applied Chem,2010,83(3):473-476.

      [10]韓平,張燕,何榮.逆流提取工藝在中藥提取中的應(yīng)用[J].西部醫(yī)藥,2009,21(2):284-285.

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