茶毛蟲核型多角體病毒毒株分化對(duì)病毒增殖和毒效的影響

唐美君，殷坤山，郭華偉，肖 強(qiáng)

(中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 茶葉研究所，浙江 杭州 310008)

茶毛蟲 (Euproctis pseudoconspersa Strand)又名茶黃毒蛾，是我國(guó)高山茶園和有機(jī)茶園常見的害蟲。茶毛蟲核型多角體病毒 (EpNPV)是控制茶毛蟲種群的重要病原物［1］。茶毛蟲病毒殺蟲劑具有防效高、持效期長(zhǎng)、對(duì)環(huán)境安全等優(yōu)點(diǎn)［2-4］，近年來(lái)在茶葉生產(chǎn)中得到了廣泛應(yīng)用，受到了有機(jī)茶農(nóng)的歡迎。有研究報(bào)道，采自貴州、湖北、浙江和湖南的EpNPV毒株之間存在較大的致病力差異，不同毒株之間的遺傳距離也有較大差距，表明不同毒株之間出現(xiàn)了遺傳分化［5］。這種毒株分化對(duì)EpNPV大量增殖是否會(huì)有不利影響，以及不同毒株組合后對(duì)毒效是否有增效作用，目前尚不明確。為了篩選合適的病毒毒株用于病毒生產(chǎn)和田間應(yīng)用，進(jìn)行了Ep NPV毒株分化對(duì)病毒增殖和毒效的影響研究，旨在為EpNPV的生產(chǎn)和應(yīng)用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試?yán)ハx

從田間 (江蘇宜興)采集茶毛幼蟲，以鮮茶葉為飼料，在 (23.5±0.5)℃，相對(duì)濕度70%～80%和光周期12 h/12 h(白天/晚上)的人工氣候室中連續(xù)飼養(yǎng)。

1.2 供試毒株

供試毒株分別為貴州毒株、湖北毒株、浙江毒株、湖南毒株4個(gè)茶毛蟲核型多角體病毒分離株。2009年分別從貴州中八、湖北襄樊、浙江雁蕩和湖南長(zhǎng)沙采集，將各毒株分別進(jìn)行病毒增殖，按蟲尸搗碎、過(guò)濾、差速離心、顯微鏡測(cè)、定量稀釋的方法獲得各分離株1×109PIB·mL-1的純病毒原液備用。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 對(duì)病毒增殖產(chǎn)量的影響

分別配制濃度為1×106PIB·mL-1的浙江毒株、貴州毒株、湖北毒株和湖南毒株的病毒液各1 000 mL備用。從茶園剪取帶老葉茶枝，分別在各毒株病毒液中浸濕，晾干后放入有銅紗網(wǎng)蓋的木盒(46 cm×32 cm×17 cm)中。接入5齡茶毛蟲幼蟲，在 (24.5±0.5)℃、相對(duì)濕度70% ～80%、光周期12 h/12 h的恒溫培養(yǎng)室內(nèi)飼養(yǎng)。幼蟲取食帶病毒葉3 d后無(wú)病毒葉片繼續(xù)飼養(yǎng)。每處理設(shè)3次重復(fù)，每重復(fù)供試蟲100頭。

幼蟲開始死亡后，逐日收集蟲尸，并稱重。幼蟲全部死亡或化蛹后，提取蟲尸中的病毒，用血球計(jì)數(shù)法測(cè)定病毒多角體含量，計(jì)算病毒產(chǎn)量。

1.3.2 對(duì)病毒毒效的影響

首先配制濃度為1×106PIB·mL-1的浙江毒株、貴州毒株和湖北毒株病毒液?jiǎn)蝿└?00 mL，然后將浙江毒株分別與貴州毒株、湖北毒株按體積比1∶1進(jìn)行混配，形成2個(gè)病毒濃度為1×106PIB·mL-1的混劑。從茶園剪取老葉，分別在各病毒液中浸濕，晾干后放入500 mL罐頭瓶中。接入2齡茶毛幼蟲，同等條件下飼養(yǎng)，以飼喂不加病毒的茶葉為對(duì)照。每處理設(shè)3次重復(fù)，每重復(fù)供試蟲50頭以上。待幼蟲開始死亡后，逐日檢查死蟲數(shù)。

采用Sakai公式計(jì)算毒株混用后的協(xié)同毒力指數(shù)，然后判定兩者的協(xié)同作用。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

采用DPS軟件統(tǒng)計(jì)分析病毒產(chǎn)量的數(shù)據(jù)，進(jìn)行單因素試驗(yàn)方差分析，均值之間的差異顯著性采用鄧肯氏新復(fù)極差法進(jìn)行檢驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 對(duì)病毒增殖產(chǎn)量的影響

結(jié)果 (表1)表明，浙江毒株較其他3個(gè)毒株病毒產(chǎn)量略高，每克蟲尸的病毒產(chǎn)量為48.17×108PIB，其他3個(gè)毒株的病毒產(chǎn)量40.44×108～46.06×108PIB·g-1，4個(gè)毒株的病毒增殖產(chǎn)量沒(méi)有顯著差異 (F=0.128 0，n=3，P=0.940 6)。

顯微觀察結(jié)果顯示，浙江毒株和貴州毒株增殖的病毒，多角體大而均勻;其余2個(gè)毒株增殖的病毒則多角體大小不勻，小的較多。此外，浙江毒株各次增殖的產(chǎn)量穩(wěn)定，其余3株的產(chǎn)量不穩(wěn)定。因此，人工大量增殖EpNPV時(shí)選用浙江毒株為最佳。

表1 Ep NPV分離株病毒增殖的產(chǎn)量比較

2.2 對(duì)病毒毒效的影響

供試的4個(gè)毒株毒力強(qiáng)弱依次為浙江毒株＞貴州毒株＞湖北毒株 ＞湖南毒株［5］。本研究選取了毒力最強(qiáng)的浙江毒株分別與貴州毒株、湖北毒株進(jìn)行組合，結(jié)果表明 (圖1)，浙江毒株與貴州毒株1∶1混配，其協(xié)同毒力始終為相加作用;浙江毒株與湖北毒株1∶1混配，前期表現(xiàn)為拮抗作用，后期為相加作用。不同分離株組合后總體上為相加作用，未見增效作用。因此，在實(shí)際應(yīng)用EpNPV時(shí)以單一毒株為宜。

圖1 茶毛蟲核型多角體病毒分離株混配后的協(xié)同毒力

3 小結(jié)與討論

昆蟲病毒的毒力強(qiáng)弱是評(píng)價(jià)該病毒應(yīng)用潛力的重要指標(biāo)。但并非毒力越強(qiáng)越好。如果毒力太強(qiáng)，以至于寄主種群不能在自然界較長(zhǎng)時(shí)間存活，該毒株也會(huì)無(wú)法生存和流行;同時(shí)，在昆蟲病毒的增殖生產(chǎn)過(guò)程中，如果毒株的毒力太強(qiáng)，將無(wú)法實(shí)現(xiàn)人工大量增殖［6］。已有的研究表明，EpNPV浙江毒株的毒力強(qiáng)于其他 3個(gè)毒株［5］。本研究表明，Ep NPV毒株分化對(duì)病毒增殖沒(méi)有不利影響，4個(gè)毒株的病毒增殖產(chǎn)量相差不大，但浙江毒株優(yōu)于其他3個(gè)毒株;強(qiáng)弱毒株組合后的協(xié)同作用總體為相加作用，沒(méi)有發(fā)現(xiàn)有增效作用。因此，浙江毒株是適宜用于室內(nèi)病毒增殖和田間茶毛蟲防治的較理想的EpNPV分離株。

［1］ 齊義鵬，葉林柏，劉岱岳，等.用茶毛蟲核型多角體病毒防治茶毛蟲 ［J］.生物防治通報(bào)，1986，2(1):43.

［2］ 孫椒德，吳光遠(yuǎn)，林阿祥，等.茶毛蟲核型多角體病毒制劑的防效 ［J］.華東昆蟲學(xué)報(bào)，1996，5(1):55-59.

［3］ 冷楊，肖強(qiáng)，殷坤山.茶毛蟲核型多角體病毒 Bt混劑的作用特性 ［J］.植物保護(hù)學(xué)報(bào)，2007，34(2):177-181.

［4］ 唐美君，殷坤山，郭華偉，等.茶毛蟲核型多角體病毒和Bt混劑的配比篩選及藥效評(píng)價(jià) ［J］.植物保護(hù)，2010，36(5):165-167.

［5］ 付建玉，席羽，唐美君，等.茶毛蟲核型多角體病毒不同分離株的毒力水平與遺傳結(jié)構(gòu)關(guān)系分析 ［J］.茶葉科學(xué)，2011，31(4):289-294.

［6］ 孫修煉，胡志紅.我國(guó)昆蟲病毒殺蟲劑的研究與應(yīng)用進(jìn)展［J］.中國(guó)農(nóng)業(yè)科技導(dǎo)報(bào)，2006，8(6):33-37.