HBV-LP檢測對慢性乙型肝炎病毒復制的診斷意義

周美英，周紅波

(上饒市第二人民醫(yī)院檢驗科，江西 上饒334000)

HBV-LP檢測對慢性乙型肝炎病毒復制的診斷意義

周美英，周紅波

(上饒市第二人民醫(yī)院檢驗科，江西 上饒334000)

乙型肝炎病毒大蛋白；HBV-DNA；HBeAg

我國的乙型肝炎病毒(HBV)攜帶率為7.18%，在14億人口中有近9300萬為HBV攜帶者，現(xiàn)今抗病毒治療以HBeAg陰轉(zhuǎn)和抑制HBV-DNA復制為主要趨勢，而HBeAg陰轉(zhuǎn)的病人中仍然存在著病毒的復制[1]。由HbsAg、Pre-S1蛋白和Pre-S2蛋白3種蛋白成分組成的乙肝病毒外膜大蛋白(HBV-LP)，具有反式激活病毒復制功能，并能顯著增強細胞內(nèi)的病毒復制和基因表達。研究結(jié)果表明，具有復雜拓撲結(jié)構(gòu)的前S區(qū)抗原是乙型肝炎病毒大蛋白的特征，應用結(jié)構(gòu)生物學和免疫學技術(shù)，篩選出針對乙型肝炎病毒大蛋白構(gòu)象型前S抗原的單克隆抗體，在微孔條上預包被此單克隆抗體，配以酶標記抗體(HBsAb-HRP)及TMB顯色劑等其它試劑，采用雙抗體夾心法原理定性檢測人血清中乙型肝炎病毒大蛋白[2]。

我們聯(lián)合檢測HBV-LP、HBeAg和HBV-DNA中發(fā)現(xiàn)三者間陽性表達率存在著相關(guān)性，現(xiàn)進行統(tǒng)計學分析,從而探討HBV-LP抗原在乙肝病毒檢測中的臨床價值。

1 材料與方法

1.1 標本來源 236例標本均為上饒市二院門診及住院的抗病毒治療慢性乙肝患者，其中男193例，女43例，年齡19～57歲，平均45歲，診斷符合中華醫(yī)學會肝病學分會與中華醫(yī)學會感染病學分會聯(lián)合制訂《慢性乙型肝炎防治指南(2010年版)》。清晨空腹靜脈抽血5ml，待血液自然凝固后2500r/min離心15min分離血清。

1.2 試劑與方法 (1)HBeAg血清標志物采用ELISA酶聯(lián)免疫法，試劑由山東3V生物限公司提供;(2)HBV-LP血清標志物采用ELISA酶聯(lián)免疫法，試劑由北京貝爾生物工程有限公司提供;(3)HBV-DNA采用熒光定量聚合酶鏈反應進行測定，試劑由廣州達安基因技術(shù)有限公司提供，HBVDNA定量>1000 copies/ml判斷為HBV DNA陽性。均嚴格按試劑說明書操作。

1.3 主要儀器 深圳雷杜醫(yī)學儀器有限公司生產(chǎn)的RT-2010型多功能全自動酶標儀。RT-2010型全自動洗板機。美國應用生物系統(tǒng)中國公司ABI－7300熒光定量PCR檢測儀。

1.4 統(tǒng)計學處理 采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件分析，計數(shù)資料比較用χ2檢驗。

2 結(jié)果

2.1 236例慢性乙型肝炎患者HBeAg、HBV-DNA、HBV-LP陽性率比較 236例標本中:HBeAg陽性98例，陽性率為41.5%；HBV-DNA陽性177例，陽性率75.0%；HBV-LP陽性204例，陽性率為86.4%，三者之間陽性率比較有顯著性差異 (χ2＝108.88，P<0.05)，HBV-LP＞ HBV-DNA＞ HBeAg，見表1。

2.2 177例HBV-DNA陽性患者中HBV-LP陽性率為92.1%，HBeAg陽性率為55.4%兩者比較有顯著 性差異 (χ2=58.07,P＜0.05)，HBV-LP 陽性率＞HBeAg陽性率，見表2。

表1 236例慢性乙型肝炎患者HBeAg、HBV-DNA、HBV-LP陽性率比較

表2 177例HBV-DNA陽性患者中HBV-LP與HBeAg陽性率比較

2.3 236 例標本中 HBeAg不同模式 HBV-LP、HBV-DNA陽性率的比較 在98例HBeAg陽性標本中HBV-DNA陽性94例，陽性率95.9%；HBVLP陽性92例，陽性率94.8%兩者比較無顯著性差異(χ2=2.11,P＞0.05)；在 138 例 HBeAg 陰性標本中HBV-DNA陽性83例，陽性率59.7%，HBV-LP陽性112例，陽性率80.5%，兩者比較有顯著性差異(χ2=14.99，P＜0.05)，HBV-LP 陽性率＞HBV-DNA 陽性率，見表3。

表3 236例乙型肝炎患者HBeAg不同模式中HBV-DNA HBV-LP陽性率比較

3 討論

乙肝病毒大蛋白的定性檢測作為乙型肝炎病毒e抗原指標的補充，用于乙型肝炎病毒感染的輔助診斷，HBV-LP陽性表明患者血液內(nèi)仍存在HBV Dane顆粒和管狀顆粒，HBV-LP與HBV的侵入、組裝和復制有著重要聯(lián)系，能反映患者機體內(nèi)HBV的復制情況。HBV-LP是HBV Dane顆粒和亞病毒顆粒的主要包膜成分，與HBV的復制程度密切相關(guān)，在感染早期，它與細胞受體結(jié)合并介導病毒的細胞內(nèi)侵入；在感染晚期，是病毒組裝和分泌的關(guān)鍵；即使在HBV-DNA低水平時，HBVLP仍能在血清中存在，因此檢測HBV-LP對臨床上判定HBV復制具有一定的意義[3]。

本次研究顯示在236例慢性乙型肝炎中HBeAg陽性率為41.5%，HBV-DNA陽性率75.0%，HBV-LP陽性率為86.4%，三者之間陽性率比較有顯著性差異 (P<0.05)，HBV-LP的陽性率高于HBV-DNA和HBeAg。這可以解釋部分患者經(jīng)過抗病毒治療后HBeAg轉(zhuǎn)陰HBV-DNA復制受抑制的情況下并不能抑制已經(jīng)形成的病毒表達蛋白，富含在蛋白的亞病毒顆粒在一段時間內(nèi)仍然存在，如果這時停止抗病毒治療即出現(xiàn)HBV-DNA的反彈。

在177例HBV-DNA陽性的慢性乙肝患者中，HBV-LP陽性率為 92.1%，HBeAg陽性率為55.4%，兩者陽性率比較有顯著性差異(P<0.05)，這可以解釋部分慢性乙型肝炎患者在長期的治療及機體免疫力的作用下HBV基因前C區(qū)或CP區(qū)發(fā)生變異導致HBeAg陰性，HBV仍在繼續(xù)復制。

在97例HBeAg陽性的慢性乙肝患者中HBV-LP陽性率為 94.8%，HBV-DNA陽性率為95.9%，兩者比較無顯著性差異(P>0.05)，這可以解釋在病毒復制活躍時，三者均能很好地反映病毒的復制情況。這與說明書中的靈敏性相符：HBVLP在HBeAg陽性患者中，HBV-LP與HBV-DNA陽性符合率為97.18%接近。

在139例HBeAg陰性的慢性乙肝患者中HBV-LP陽性率為 80.5%，HBV-DNA陽性率為59.7%，兩者有顯著性差異(P<0.05)，這可以解釋部分慢性乙肝患者HBeAg與HBV-DNA均陰性，即臨床上的慢性活動性“小三陽”肝炎患者，亦稱這為難治型“小三陽”體內(nèi)病毒仍在復制。

在使用抗核苷類藥物治療慢性乙型肝炎時血清HBV-DNA拷貝數(shù)的下降是評估其療效的主要指標，但臨床應用表明，血液中HBV-DNA拷貝數(shù)下降和轉(zhuǎn)陰并不能作為乙肝抗病毒效果監(jiān)測和停藥終點的判定指標，抗病毒治療后相當比例患者病情反彈，而乙肝病毒大蛋白由于其特殊的PreS結(jié)構(gòu)與病毒復制相關(guān)，因此研究人員認為治療效果監(jiān)測上單獨采用HBV-DNA指標是不夠的，應該增加對乙肝病毒復制具有反式激活作用、對肝細胞具有直接毒性的乙肝病毒大蛋白的檢測[4]。HBV-LP陽性率大于HBV-DNA陽性率，顯示部分慢性乙肝患者肝內(nèi)病毒繼續(xù)復制和或抗病毒治療不徹底，故HBV-LP的檢測可為慢性乙肝患者確立抗病毒治療停藥時間提供參考，在預防肝硬化、肝癌等方面也有一定的意義[5]。HBV-LP的檢測方法方便快捷，檢測條件易于控制，值得在臨床實驗室推廣使用。

[1]中華醫(yī)學會肝病學分會與中華醫(yī)學會感染病學分會聯(lián)合制訂.中國慢性乙型肝炎防治指南(2010年版)。

[2]彭建明，李金明.病毒樣顆粒在免疫測定中的研究中進展[M].中華醫(yī)學檢驗雜志.2005,28(2):214-216.

[3]毛遠麗，李伯安，馬洪濱，等.乙肝患者外膜蛋白血清學檢測對于判定HBV-DNA復制的意義 [J].中華檢驗和臨床病毒學雜志,2006,20(3):276-278.

[4]游選旺,黃 健,唐畢畢.乙型肝炎病毒大蛋白臨床檢測意義初探[J].實驗與檢驗醫(yī)學,2009，27(2):275-276.

[5]游選旺.乙肝病毒大蛋白用于抗病毒治療效果監(jiān)測的臨床意義[J].實驗與檢驗醫(yī)學,2011,29(2):165-166.

R512.6+2,R446.62

B

1674-1129(2012)05-0512-03

10.3969/j.issn.1674-1129.2012.05.042