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    Reg Ⅳ蛋白在結(jié)腸癌組織中表達(dá)及與其發(fā)生發(fā)展的關(guān)系

    2012-01-09 05:35:10鄭聲琴張全安
    實(shí)用癌癥雜志 2012年4期
    關(guān)鍵詞:結(jié)腸癌結(jié)腸染色

    鄭聲琴 何 杰 鄭 勤 張全安

    結(jié)腸癌是我國(guó)常見(jiàn)的消化系統(tǒng)惡性腫瘤之一,發(fā)生具有多階段、多因素的特征,在此過(guò)程中涉及癌基因的突變和活化、抑癌基因的丟失或表達(dá)失調(diào)以及凋亡調(diào)節(jié)機(jī)制紊亂等遺傳學(xué)改變[1,2]。再生基因 Ⅳ (regenerating gene Ⅳ,Reg Ⅳ) 是新發(fā)現(xiàn)的1個(gè)癌基因,其有可能參與腫瘤尤其是消化道腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。基因表達(dá)的序列分析 (serial analysis of gene expressi on,SAGE) 結(jié)果得到: Reg Ⅳ在結(jié)腸正常黏膜、結(jié)腸腺癌、 胰腺癌、 胃癌和前列腺癌中均表達(dá),尤其在結(jié)直腸腺瘤癌變區(qū)其轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)特別明顯,但是在結(jié)腸正常黏膜 Reg Ⅳ 基因呈低表達(dá)[3]。通過(guò) SAGE表達(dá)譜分析認(rèn)為,Reg Ⅳ基因可能是消化系統(tǒng)癌微轉(zhuǎn)移的特異性標(biāo)記物[4],其表達(dá)上調(diào)可能與預(yù)后不良有關(guān)。我們采用免疫組織化學(xué)法,檢測(cè)Reg Ⅳ蛋白在結(jié)腸癌中的表達(dá)情況,旨在探討Reg Ⅳ在結(jié)腸癌發(fā)生發(fā)展中的作用。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    選取我院病理科 2008年~2010 年收集的102例結(jié)腸癌石蠟標(biāo)本 (均取自腫瘤原發(fā)灶,均經(jīng)病理檢查確診)。其中男性 70例,女性32例,年齡 31~75 (51± 30) 歲,術(shù)前均未行放療和化療。50例正常結(jié)腸黏膜組織術(shù)中取出經(jīng)4%多聚甲醛固定后制成石蠟標(biāo)本。免疫 Reg Ⅳ蛋白多克隆抗體為Santa cruz產(chǎn)品,稀釋度為 1∶200; SABC免疫組織化學(xué)試劑盒及DAB顯色試劑盒均購(gòu)自北京天根有限公司。

    1.2 方法

    結(jié)腸癌標(biāo)本用4%多聚甲醛固定,石蠟包埋,連續(xù)切片 (厚度 4 pm),其中一片用于常規(guī)HE 染色,其余用于免疫組織化學(xué)。石蠟切片經(jīng)脫蠟水化后入PBS (pH7.4),經(jīng)甲醇- H2O2,室溫孵育20 min,除去內(nèi)源性過(guò)氧化物酶活性,蒸餾水洗3遍;微波修復(fù)抗原,滴加抗原修復(fù)液室溫 10 min,甩去血清后滴加1 ∶200 Reg Ⅳ多抗,4℃ 過(guò)夜,0.5 mol/L PBS洗2 min 3 次;滴加生物素化羊抗兔IgG, 37℃、20 min,O- SM PBS 洗 5 min 4 次;經(jīng)DAB顯色,蘇木精輕度復(fù)染,脫水、透明、封片。正常結(jié)腸組織對(duì)照用PBS代替一抗。

    1.3 觀察指標(biāo)

    采用Olympus光學(xué)顯微鏡觀察,胞質(zhì)或胞膜呈棕色、棕褐色者為陽(yáng)性細(xì)胞。顯微鏡下觀察 Reg Ⅳ表達(dá)強(qiáng)度, 標(biāo)準(zhǔn)為:0~5個(gè)腫瘤細(xì)胞染色記為0分;6 ~20個(gè)腫瘤細(xì)胞染色為1分;21~50個(gè)腫瘤細(xì)胞染色為2分;50個(gè)以上腫瘤細(xì)胞染色為3分。0分為陰性, 1~3 分為陽(yáng)性。

    1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

    應(yīng)用 SPSS 11.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件,組間比較采用χ2檢驗(yàn),P<0.05為差異有顯著性。

    2 結(jié)果

    2.1 Reg Ⅳ在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)

    免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示,50例正常結(jié)腸黏膜上皮中無(wú)Reg Ⅳ 表達(dá),而102例結(jié)腸癌組織中35例 (34.31%) 呈陽(yáng)性表達(dá),兩組比較差異有顯著性 (P<0.05)。

    2.2 Reg Ⅳ表達(dá)與結(jié)腸癌病理分級(jí)和臨床分期的關(guān)系

    G1級(jí)結(jié)腸癌組織與G3級(jí)比較,Reg Ⅳ陽(yáng)性表達(dá)率明顯增高,差異有顯著性,P<0.05。T0~T4期結(jié)腸癌組織中Reg Ⅳ陽(yáng)性率分別為0、33.33%、44.44%、52.38%和71.42%,差異均有顯著性(P<0.05);與T0期比較,T4期染色體分值明顯增加,P<0.05,見(jiàn)表1。對(duì)Reg Ⅳ表達(dá)陽(yáng)性率與結(jié)腸癌臨床分期做回歸分析,見(jiàn)圖1,回歸方程為 γ=5.955+15.83X,為直線回歸,相關(guān)系數(shù) γ=0.973,表明 Reg Ⅳ表達(dá)強(qiáng)度與結(jié)腸癌臨床分期呈線性關(guān)系。

    3 討論

    Reg家族是一群主要在肝、胰和胃腸道中發(fā)揮作用的小分子、多功能的分泌性蛋白,與組織損傷、炎癥、糖尿病和腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)。2001年Hartupee等[5]從炎癥性腸病庫(kù)中篩選出再生基因4 (regenerating islet-derived family,member 4,RegⅣ),其定位于1p12-13.1,RegⅣ蛋白由158個(gè)氨基酸組成。 RegⅣ選擇性表達(dá)于正常胰腺和胃腸道上皮,炎癥或腫瘤組織中其表達(dá)明顯增強(qiáng), 提示RegⅣ與消化系統(tǒng)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展可能關(guān)系密切。

    表1 Reg Ⅳ表達(dá)與結(jié)腸癌組織臨床病理特征的關(guān)系(例)

    注: ①為與 G1相比,P<0.05;②為與T0相比,P<0.05;③為與T1相比,P<0.05

    圖1 Reg Ⅳ表達(dá)與結(jié)腸癌臨床分期的相關(guān)性

    Oue 等[6]發(fā)現(xiàn)雖然RegⅣ在結(jié)直腸癌 (colorectal cancer,CRC) 的表達(dá)比正常結(jié)腸組織高。36.1% (13/36) 結(jié)腸直腸腺癌是RegⅣ陽(yáng)性,并與腫瘤分期有關(guān)。93.3% (14/15) 結(jié)腸直腸類(lèi)癌瘤檢測(cè)到RegⅣ表達(dá)。有學(xué)者[7]應(yīng)用RT-QPCR和膜芯片技術(shù),研究CRC患者外周血中RegⅣ等6種mRNA標(biāo)志物的表達(dá),發(fā)現(xiàn)RegⅣ mRNA過(guò)表達(dá)率為80.0% (64/80),RegⅣ mRNA過(guò)表達(dá)與CRC TNM分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。CRC伴肝轉(zhuǎn)移者RegⅣ表達(dá)陽(yáng)性率明顯高于無(wú)轉(zhuǎn)移病例。 RegⅣ陽(yáng)性表達(dá)CRC比陰性表達(dá)存活率低 。ELISA法檢測(cè)CRC患者術(shù)前血清RegⅣ水平顯示Ⅳ期CRC伴肝轉(zhuǎn)移患者較0~Ⅲ期患者明顯升高,說(shuō)明RegⅣ是預(yù)后不良的預(yù)測(cè)因子,血清RegⅣ濃度可能預(yù)測(cè)CRC并發(fā)肝轉(zhuǎn)移。Violette 等[8]應(yīng)用差異展示PCR法,分析發(fā)現(xiàn)RegⅣ在CRC耐藥細(xì)胞中高表達(dá),在敏感細(xì)胞系則是低表達(dá),提示RegⅣ在CRC中的潛在作用,而且可能是影響腫瘤患者存活率的預(yù)后指標(biāo)并與腫瘤的耐藥性有關(guān)。

    Oue 等[7]發(fā)現(xiàn)29.4%的胃癌RegⅣ呈陽(yáng)性表達(dá),并與小腸黏蛋白表型和神經(jīng)內(nèi)分泌分化有關(guān)。定量RT-PCR分析顯示RegⅣ在30.4%的胃癌組織中呈高水平表達(dá),而在正常胃、十二指腸、回腸、結(jié)腸、胰腺都呈低水平表達(dá)。Sentani 等[9]對(duì)多種組織印戒細(xì)胞癌 (signet-ring cell carcinoma,SRCC) 進(jìn)行免疫組織化學(xué)分析,發(fā)現(xiàn)RegⅣ染色有助于胃腸道SRCC的診斷。Takehara 等[10]報(bào)道RegⅣ在胰腺導(dǎo)管腺癌(pancreatic ductal adenocarcinoma,PDAC)細(xì)胞中過(guò)表達(dá)。 RegⅣ蛋白呈時(shí)間劑量依賴(lài)性促進(jìn)PDAC細(xì)胞的生長(zhǎng),通過(guò)RNA干擾技術(shù)可阻斷RegⅣ的促生長(zhǎng)效應(yīng),同時(shí)外源性RegⅣ蛋白促進(jìn)PK-45P細(xì)胞的Akt的磷酸化, 提示RegⅣ的促生長(zhǎng)效應(yīng)可能通過(guò)PKB/Akt信號(hào)通路來(lái)介導(dǎo), 以抗體中和RegⅣ效應(yīng)可能是一潛在的治療PDAC的工具。早期PDAC患者血清中呈現(xiàn)RegⅣ水平的顯著提高, 血清RegⅣ可能是檢測(cè)早期PDAC的腫瘤標(biāo)志物。然而, RegⅣ在CRC、 GC、炎癥性腸病、闌尾黏液囊腺瘤和腹膜假性黏液瘤 (pseudomyxoma peritonei,PMP)、前列腺癌和唾液腺囊性腺樣癌中高表達(dá),所以血清中RegⅣ水平的升高在診斷中的靈敏度和特異度還要大量基礎(chǔ)研究的證實(shí)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:Reg Ⅳ在結(jié)腸癌中的表達(dá)明顯高于正常結(jié)腸組織 ;在結(jié)腸癌細(xì)胞中 G1、G2和G3級(jí)表達(dá)分別為 0 、22.22%和68.66%,與G1相比,G3級(jí)染色分值明顯增加,兩者間比較,差異有顯著性。結(jié)果表明,Reg Ⅳ與結(jié)腸癌分化密切相關(guān),分化程度越低,其表達(dá)越高,提示Reg Ⅳ有可能是結(jié)腸癌病理分級(jí)診斷的輔助指標(biāo),通過(guò)研究?jī)烧呦嚓P(guān)性我們發(fā)現(xiàn)兩者呈線性關(guān)系,這也表明Reg Ⅳ表達(dá)水平隨結(jié)腸癌侵襲力增強(qiáng)而增高。Reg Ⅳ有望作為1種有價(jià)值的生物標(biāo)志物來(lái)評(píng)估結(jié)腸癌的惡性程度,對(duì)治療方案的選擇和術(shù)后隨訪提供指導(dǎo),提示Reg Ⅳ與結(jié)腸癌的發(fā)生及演變過(guò)程密切相關(guān),對(duì)結(jié)腸癌行Reg Ⅳ蛋白的檢測(cè)有可能作為臨床判斷結(jié)腸癌生物學(xué)行為浸潤(rùn)深度的一項(xiàng)重要指標(biāo),但其作用機(jī)制還有待進(jìn)一步探討。谷化平等[11]研究認(rèn)為VEGF、EGFR和PTEN與結(jié)腸癌的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移有關(guān),可作為判斷結(jié)腸癌預(yù)后的指標(biāo),而VEGF和EGFR是目前臨床應(yīng)用較廣的檢測(cè)指標(biāo),Reg Ⅳ的作用是否與VEGF、EGFR相關(guān),可能是我們下一步研究的內(nèi)容之一。

    [1] Gaddam KK,Pimenta E,Husain S,et al.Aldosterone and cardiovascular disease〔J〕.Curr Probl Cardiol,2009,34(2):51.

    [2] Swynghedauw B,Delcayre C,Samuel J L,et al.Molecular mechanisms in evolutionary cardiology failure〔J〕.Ann N Y Acad Sci,2010,1188:58.

    [3] Zhang Y W,Ding L S,Lai M D.Reg gene family and human diseases〔J〕.World J Gastr oenterol,2003,9 (12) :263522641 .

    [4] Zhang Y W,Lai M D,Gu X M,et al .Reg Ⅳ,a differentially expressed gene in col orectaladenoma 〔J〕.Chinese Medica Journal,2003,116 (6) :9182922 .

    [5] Hartupee JC,Zhang H,Bonaldo MF,et al.Isolation and c-haracterization of a cDNA encoding a novel member of the human regenerating protein family:Reg IV〔J〕.BiochimBiophys Acta,2001,1518:287.

    [6] Oue N,Mitani Y,Aung PP,et al.Expression and local izat ion of Reg IV in human neoplastic and non-neoplastic tissues:Reg Ⅳ expression is associated with intestinal and neuroendocrine differentiation in gastric adenocarcinoma〔J〕.J Pathol,2005, 207:185.

    [7] Oue N,Kuniyasu H,Noguchi T,et al.Serum concentration of Reg IV in patients with colorectal cancer:overexpression and high serum levels of Reg Ⅳ are associated with liver metastasis〔J〕.Oncology,2007, 72:371.

    [8] Violette S,Festor E,Pandrea-Vasile I,et al.Reg IV,a new member of the regenerating gene family,is overexpressed in colorectal carcinomas〔J〕.Int J Cancer,2003,103:185.

    [9] Sentani K,Oue N,Tashiro T,et al.Immunohistochemical staining of Reg IV and claudin-18 is useful in the diagnosis of gastrointestinal signet ring cell carcinoma〔J〕.Am J Surg Pathol,2008,32:1182.

    [10] Takehara A,Eguchi H,Ohigashi H,et al.Novel tumor marker REG4 detected in serum of patients with resectable pancreaticcancer and feasibility for antibody therapy targeting REG4〔J〕.Cancer Sci,2006,97:1191.

    [11] 谷化平,尚培中.EGFR、VEGF和PTEN在結(jié)直腸癌中表達(dá)機(jī)器臨床病理特征的關(guān)系〔J〕.實(shí)用癌癥雜志,2011,26(3):259.

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