胃癌組織中Tiam1的表達及臨床意義

曹蘇娟 李國亮 張忠山 王小華

腫瘤的侵襲與轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤患者預(yù)后的1個重要因素。近年的研究[1,2]顯示，T淋巴瘤侵襲轉(zhuǎn)移因子1(T lymphoma invasion and metastasis inducing factor 1，Tiam1)在人體乳腺癌、結(jié)腸癌、膀胱癌等多種腫瘤中高表達，相似的結(jié)果在動物模型中也被證實；并且Tiam1表達增強能誘導(dǎo)并促進腫瘤細胞侵襲、轉(zhuǎn)移。但有關(guān)Tiam1在胃癌組織中的表達及其臨床意義尚不清楚。我們應(yīng)用免疫組化方法檢測Tiam1在胃癌及正常胃黏膜組織中的表達，并初步探討其與胃癌組織TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織分化程度、腫塊大小等臨床病理參數(shù)間的關(guān)系，為胃癌的治療提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 一般資料

收集2005年3月～2011年12月我院臨床和病理資料完整的胃癌標(biāo)本56例，全部病例術(shù)前從未行過放療、化療，術(shù)后經(jīng)病理檢查確診。其中男性38例，女性18例，年齡37～79歲，平均62.1歲。腫塊直徑≥2.5 cm者40例，<2.5 cm者16例。臨床和病理上證實有區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移36例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移20例。高分化胃癌20例，中分化胃癌17例，低分化胃癌19例。浸潤深度：T1期6例，T2期11例，T3期36例，T4期3例。TNM分期：Ⅰ期10例，Ⅱ期15例，Ⅲ期25例，Ⅳ期6例。另取正常胃黏膜組織15例作為對照組，標(biāo)本取自胃十二指腸潰瘍手術(shù)標(biāo)本中正常的胃黏膜組織，并經(jīng)病理證實且排除重度不典型增生。全部標(biāo)本經(jīng)10%福爾馬林液固定，石蠟包埋，4 μm連續(xù)切片，1張用于HE染色，其余用于免疫組化備用。

1.2 SP免疫組化法檢測Tiam1蛋白表達

將臘塊切片HE染色，確定標(biāo)本組織分化程度。采用鏈霉素-生物素(SP法)免疫組織化學(xué)技術(shù)。濃縮型兔抗人Tiam1多克隆抗體購自Santa Cruz生物公司，操作嚴格按照說明書進行。用已知陽性標(biāo)本做陽性對照，PBS緩沖液代替一抗作為陰性對照。

1.3 免疫組化判定標(biāo)準

以檢測細胞出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性細胞。根據(jù)免疫陽性細胞染色程度(A)：無染色為0分；細胞膜或質(zhì)內(nèi)見淡黃色顆粒，明顯高于背景為1分；較多棕黃色顆粒為2分；大量棕黃色顆粒為3分。每片隨機觀察5個視野，計數(shù)500個細胞中染色陽性細胞數(shù)(B)：陽性細胞數(shù)<5%為0分，5%～25%為1分，26%～50%為2分，>50%為3分。A與B相乘為其最后得分，0～1為陰性(-)，2～3為陽性(+)，4分及4分以上為強陽性(++)。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

所有資料經(jīng)SPSS13.0統(tǒng)計軟件處理，各指標(biāo)之間相關(guān)因素的差異性比較采用成組設(shè)計的非參數(shù)檢驗。各指標(biāo)的相關(guān)性研究采用以Spearman相關(guān)分析法，以P<0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Tiam1在正常胃黏膜和胃癌組織中的表達

在正常胃黏膜組織中Tiam1 蛋白染色全部為陰性。Tiam1蛋白在胃癌組織中陽性染色為黃色或棕色顆粒,主要在細胞膜或細胞質(zhì)表達，其中陰性為11例，弱陽性為11例，陽性為20例，強陽性為14例。胃癌組織中Tiam1蛋白陽性表達與正常胃黏膜中的比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(U=4.964，P<0.01)。

2.2 胃癌組織中Tiam1的表達與臨床病理特征的相關(guān)性

胃癌組織中Tiam1表達與患者性別、年齡無顯著性相關(guān)(P>0.05)；胃癌組織中Tiam1表達與TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織類型、腫塊大小、浸潤深度有顯著相關(guān)性(P>0.05)，見表1。隨著臨床分期的提高、淋巴轉(zhuǎn)移的產(chǎn)生、腫瘤病理分化程度的降低、腫瘤的增大和腫瘤浸潤深度的加深，胃癌組織中Tiam1陽性表達率明顯升高。

3 討論

胃癌是常見的來源于上皮組織的惡性腫瘤之一，在我國占消化道惡性腫瘤的第1位，早期胃癌治療效果較滿意，5年生存率可達95%～100%；但占病例絕大多數(shù)的進展期胃癌，則預(yù)后差，5年生存率徘徊在30%～40%。多年來胃癌死亡率一直居惡性腫瘤的首位，胃癌患者死亡的主要原因是腫瘤侵襲和術(shù)后轉(zhuǎn)移。

表1 胃癌組織中Tiam1表達與臨床病理特征的關(guān)系(例)

侵襲和轉(zhuǎn)移是胃癌生物學(xué)特征之一，也是影響治療效果和復(fù)發(fā)死亡的主要原因。因此探討胃癌侵襲、轉(zhuǎn)移相關(guān)的因素，尋找預(yù)防和治療的有效途徑，是當(dāng)代腫瘤學(xué)研究的一項迫切任務(wù)。

胃癌的侵襲和轉(zhuǎn)移是腫瘤細胞與宿主間質(zhì)及宿主細胞間的一系列復(fù)雜的、多步驟的相互作用的結(jié)果，其中涉及到許多種基因及其產(chǎn)物。Tiam1最初是由荷蘭癌癥研究所Habets等采用前病毒插入致突變的原理，并結(jié)合在成纖維細胞單層上進行侵襲篩選的方法，由BW 5147小鼠T淋巴瘤細胞高侵襲變異株中分離鑒定，經(jīng)與基因庫對比及DNA印跡分析，證實這是1個可以影響侵襲力的基因，故命名為Tiam1基因。Tiam1編碼蛋白N端被切除后，可激活其致瘤活性，確定這是1種原癌基因，它是近年來腫瘤研究的熱點。一些研究[3,4]表明，Tiam1在胰腺癌、乳腺癌、淋巴瘤、肺癌等多種腫瘤細胞中高表達，特別是在低分化的和伴有局部浸潤或遠處轉(zhuǎn)移的腺癌或鱗癌組織中呈強陽性表達。本實驗數(shù)據(jù)表明，Tiam1在胃癌組織中的表達明顯高于正常胃黏膜組織(U=4.964，P<0.01)。這表明Tiam1基因具有癌基因的活性,在胃癌發(fā)生、發(fā)展中起一定的作用。進一步研究表明[5,6]，Tiam1在淋巴瘤、黑色素瘤、乳腺癌、肺癌、膀胱癌等惡性腫瘤中的表達水平與腫瘤細胞的分化程度及侵襲、轉(zhuǎn)移能力密切相關(guān)，目前對于Tiam1如何誘導(dǎo)腫瘤細胞侵襲、轉(zhuǎn)移的機制尚不十分清楚，其可能機制有以下幾個方面：① Tiam1基因產(chǎn)物參與信號傳導(dǎo)途徑進而調(diào)節(jié)細胞骨架結(jié)構(gòu)，引起片足和絲狀偽足的形成，誘導(dǎo)腫瘤細胞侵襲、轉(zhuǎn)移。②Tiam1基因的DH功能區(qū)具有鳥苷酸轉(zhuǎn)換功能，PH功能區(qū)能介導(dǎo)蛋白復(fù)合物的形成，誘導(dǎo)細胞膜皺褶，從而誘導(dǎo)腫瘤細胞的侵襲、轉(zhuǎn)移。③通過多種方式影響CD44v6、E-cadherin等多種腫瘤細胞黏附分子的表達而促進細胞侵襲和轉(zhuǎn)移。本研究結(jié)果表明，胃癌組織中Tiam1表達與患者性別、年齡無顯著性相關(guān)，但與TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫塊大小、浸潤深度有顯著性相關(guān)(P<0.05)，即隨著臨床分期的提高、淋巴轉(zhuǎn)移的產(chǎn)生、腫瘤的增大和腫瘤浸潤深度的加深，胃癌組織中Tiam1陽性表達率明顯升高。由此可推測，Tiam1蛋白在胃癌的侵襲和轉(zhuǎn)移中起著十分重要的作用，有望成為腫瘤惡性進展及預(yù)后判斷的有效指標(biāo)，但其具體機制和途徑還有待于進一步深入研究。

[1] Simon A,Woodcock CA,Helen J,et al.Tiam1-Rac signaling counteracts Eg5 during bipolar spindle assembly to facilitate chromosome congression〔J〕.Curr Biol,2010,20(7)：669.

[2] 李紅方,赫玉增,趙惠民,等.Tiam 1、VEGF在非小細胞肺癌中的表達及與微血管生存的關(guān)系〔J〕.河北醫(yī)藥，2009,31(2)：134.

[3] Yang W,Lv S,Liu X,et al.Up-regulation of Tiam 1 and Rac1 correlates with poor prognosis in hepatocellular carcinoma〔J〕.Jpn J Clin Oncol,2010,40(11):1053.

[4] 張香梅，陳培芬，劉 芳.不同轉(zhuǎn)移特性的人鼻咽癌細胞株中Tiam-1表達及其意義〔J〕.實用癌癥雜志，2010，25(3)：240.

[5] Malliri A，van der Kalnlnen RA，Clark K，et al.Mice deficient in the Rac activator Tiam1 are resistant to Ras-induced skin tumours〔J〕.Nature,2007,417(6891)：867.

[6] Zhao L,Liu Y,Sun X,et al.Overexpression of T lymphoma invasion and metastasis 1 predict renal cell carcinoma metastasis and overall patient survival〔J〕.J Cancer Res Clin Oncol,2011,137(3):393.