氣相色譜法測(cè)定茶籽油中角鯊烯含量的研究

謝 勇，蘇素嬌，梁一池

（福建中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，福建 福州 350108）

氣相色譜法測(cè)定茶籽油中角鯊烯含量的研究

謝 勇，蘇素嬌，梁一池*

（福建中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，福建 福州 350108）

建立氣相色譜法測(cè)定茶籽油中活性成分角鯊烯的含量.結(jié)果表明：角鯊烯在10～80μg/mL（r=0.999 6）范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系，回收率為103.16%（n=5），RSD為1.865%（n=5）.

茶籽油；角鯊烯；氣相色譜法

0 前言

油茶（Camillia oleifera Abel），俗稱苦茶、建茶、白花茶，屬山茶科，分布在長(zhǎng)江流域及以南各省，是重要的木本油科植物[1].油茶與油棕、橄欖、椰子并稱“世界四大木本油料”.油茶果實(shí)稱為“茶果”，由茶蒲和茶籽組成.茶籽油是良好的食用油，色清而味香，其主要成分是以油酸和亞油酸為主的不飽和脂肪酸，含量占90%以上.現(xiàn)代營(yíng)養(yǎng)科學(xué)家們把茶籽油譽(yù)為益壽油、多維油、無(wú)公害油.茶籽油被美國(guó)衛(wèi)生研究院營(yíng)養(yǎng)合作委員會(huì)主席西莫奧普勒博士譽(yù)為“世界上最好的食用油”[2].

角鯊烯是一種重要的生物活性物質(zhì)，廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、食品、化妝品等許多行業(yè).角鯊烯有類似紅細(xì)胞的攝氧功能，可增強(qiáng)組織對(duì)氧的利用.研究表明，角鯊烯具有極強(qiáng)的供氧能力，可抑制癌細(xì)胞的生成，防止癌細(xì)胞擴(kuò)散[3]，并通過(guò)供氧增強(qiáng)白細(xì)胞代謝活動(dòng)，對(duì)腫瘤化療等所致的白細(xì)胞減少癥有較好的療效[4].此外，角鯊烯可提高血紅蛋白攜氧能力，促進(jìn)新陳代謝，降低血清總膽固醇和防止動(dòng)脈粥樣硬化等功能[5]，因此常作為功效成分添加于保健食品如角鯊烯膠囊中.目前，角鯊烯提取多來(lái)源于深海鯊魚(yú)肝油，如鎧鯊肝油中含量為40%～74%，而江海鯊魚(yú)含量偏低，如閩南近海水層鯊鰩類含量?jī)H為0.012%～0.116%[6].然而，根據(jù)世界自然保護(hù)聯(lián)盟（IUCN）提供的數(shù)據(jù)，有多達(dá)1/3的鯊魚(yú)種群面臨滅絕風(fēng)險(xiǎn).因此，有必要從植物中尋找新的角鯊烯資源.油茶是中國(guó)特有的木本油料作物，全國(guó)現(xiàn)有油茶林333.33萬(wàn)hm2，福建是全國(guó)第5大主產(chǎn)區(qū)，因此開(kāi)發(fā)油茶角鯊烯具有顯著的資源優(yōu)勢(shì).

李冬梅[7]對(duì)茶籽油甲脂化物的典型GC圖譜分析表明，茶籽油中5種主要甲酯化成分：棕櫚酸甲酯、硬脂酸甲酯、油酸甲酯、亞油酸甲酯和角鯊烯中，角鯊烯相對(duì)含量達(dá)7.62%.然而，目前未有對(duì)油茶角鯊烯含量檢測(cè)方法及分析的系統(tǒng)性研究.作者建立了用氣相色譜法測(cè)定茶籽油中角鯊烯含量的方法，為評(píng)價(jià)油茶的質(zhì)量提供了參考依據(jù).

1 材料與方法

1.1 材料

角鯊烯對(duì)照品（批號(hào)：140721-200603）：中國(guó)藥品生物制品檢定所；正己烷為分析純；油茶來(lái)源于福建順昌地區(qū)，為湘林油茶高產(chǎn)優(yōu)良無(wú)性系，并經(jīng)福建中醫(yī)藥大學(xué)梁一池教授鑒定.

1.2 儀器與設(shè)備

Agilent6890N氣相色譜儀及色譜工作站：安捷倫科技公司上海分公司；KQ—500E型超聲波清洗機(jī)：昆山市超聲儀器有限公司；DFY—600型搖擺式高速中藥粉碎機(jī)：溫嶺市林大機(jī)械有限公司；Sartorius CP225 D電子天平：德國(guó)Sartorius公司；AR2130千分之一電子天平：奧豪斯儀器有限公司制造；HH—S型恒溫水浴鍋：鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司.

1.3 方法

1.3.1 對(duì)照品溶液的制備

精確稱取角鯊烯對(duì)照品2.1 mg于潔凈干燥的5 mL容量瓶中，加正己烷（分析純）溶解定容至濃度為400μg/mL，作為角鯊烯標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液.取該儲(chǔ)備液， 用正己烷稀釋成 10、20、40、60、80、100 μg/mL 6個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，搖勻并于4℃冰箱保存?zhèn)溆?

1.3.2 樣液的制備

稱取茶籽仁粉末約10 g，采用正己烷作提取用溶劑，在索氏提取器中提取，水浴加熱回流，7～10min回流1次，抽提時(shí)間3 h以上.抽提液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓回收溶劑，得到金黃色的茶油，氣相色譜進(jìn)樣檢測(cè)角鯊烯含量.

2 結(jié)果與分析

2.1 提取方法的確定

取同種油茶粉末約10 g分別采用加熱浸提、回流提取和索氏提取3種方法提取，結(jié)果見(jiàn)表1.

表1 不同提取方法對(duì)茶油角鯊烯提取的影響

由表1可知，茶油的提油率依次為：索氏提取＞回流提?。炯訜峤幔酋徬┑奶崛÷室来螢椋核魇咸崛。炯訜峤帷只亓魈崛。蔬x擇索氏提取作為角鯊烯的提取方法.

2.2 色譜條件

角鯊烯是一種高度不飽和烴類化合物，分子質(zhì)量大，沸點(diǎn)高，難揮發(fā).因此，選用HP-5MS耐高溫彈性石英毛細(xì)管柱，進(jìn)樣口溫度和柱箱溫度均設(shè)為250℃，在此條件下，既可保證樣品的充分氣化，又能保證固定液無(wú)流失[8].

色譜柱：毛細(xì)管柱 HP-5（30.0 m×320μm×0.5 μm），檢 測(cè) 器 ：FID 檢 測(cè) 器 ，載 氣 N2（純 度99.999%），空氣 400 mL/min，氫氣 40 mL/min，分流比1∶10，進(jìn)樣口溫度250℃，檢測(cè)器溫度290℃，柱箱溫度150℃維持1min，15℃/min升溫至250℃，進(jìn)樣口壓力204 kPa，進(jìn)樣量1μL.

2.3 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)

分別精確吸取混合對(duì)照品溶液和供試品溶液各1μL進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果角鯊烯的理論塔板數(shù)為133 650；對(duì)稱因子為1.03；色譜圖如圖1、圖2所示.

2.4 線性考察

按2.1色譜條件，取角鯊烯對(duì)照品溶液10、20、40、60、80 μg/mL 進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖，以角鯊烯對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，回歸方程為：y=728.84x-1.171 3，r=0.999 3，表明角鯊烯在10～80μg/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好.

圖1 對(duì)照品色譜圖（峰1為角鯊烯）

圖2 樣品色譜圖（峰1為角鯊烯）

2.5 平行實(shí)驗(yàn)

稱取油茶粉末約10 g共5份，制備供試品溶液，氣相色譜進(jìn)樣，記錄色譜峰面積，計(jì)算得角鯊烯的平均含量為 20.22 mg/100 g，RSD為 1.072%，表明本方法的重復(fù)性良好.

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一份供試品溶液，每隔2 h進(jìn)樣1次，共進(jìn)樣5次，記錄色譜峰面積，計(jì)算得角鯊烯的RSD分別為3.093%，表明供試品溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定.

2.7 加樣回收率試驗(yàn)

稱取油茶約5 g，共5份，置索氏提取器中，分別精確加入100μg/mL角鯊烯對(duì)照品10 mL，制備5份供試品溶液，氣相色譜進(jìn)樣.角鯊烯平均回收率為 103.16%，RSD為1.865%，結(jié)果見(jiàn)表2.

表2 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.8 含量測(cè)定

稱取不同產(chǎn)地油茶粉末約10 g，每個(gè)產(chǎn)地稱取3份，置索氏提取器中，加入正己烷50 mL，加熱回流抽提3 h以上，抽提液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓回收溶劑，得到金黃色的茶油.氣相色譜進(jìn)樣，以外標(biāo)法定量，結(jié)果見(jiàn)表3.

表3 不同品種茶籽油中角鯊烯的含量

有文獻(xiàn)報(bào)道，除提取方法對(duì)茶油中角鯊烯含量有一定影響外，儲(chǔ)存期的長(zhǎng)短（無(wú)論是茶油還是油茶籽）對(duì)角鯊烯含量的影響較大[7].本試驗(yàn)選擇采收期一致的幾種油茶品種，檢測(cè)其茶籽油中角鯊烯含量，表明品種間差異較大，含量最高品種較最低品種角鯊烯含量高69.5%.

3 結(jié)論

用氣相色譜法檢測(cè)茶籽油中活性成分角鯊烯的含量，以毛細(xì)管柱 HP-5（30.0m×320μm×0.5μm）為色譜柱，檢測(cè)器為 FID檢測(cè)器，載氣 N2（純度99.999%），空氣 400 mL/min，氫氣 40 mL/min，分流比 1∶10，進(jìn)樣口溫度 250℃，檢測(cè)器溫度 290℃，柱箱溫度 150℃，角鯊烯在 10～80 μg/mL（r=0.999 6）范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系，回收率為103.16%（n=5），RSD 為 1.865%（n=5）.氣相色譜法操作簡(jiǎn)便，穩(wěn)定性好，分離度好，重現(xiàn)性好，結(jié)果準(zhǔn)確.

［1］中國(guó)中醫(yī)藥管理局編委會(huì).中華本草［M］.上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2008：356.

［2］趙振東，孫震.生物活性物質(zhì)角鯊烯的資源及其應(yīng)用研究進(jìn)展［J］.林產(chǎn)化學(xué)與工業(yè)，2004，24（3） ：107-112.

［3］Harivardhan R L，Couvreur P.Squalene：a natural triterpene for use in disease management and therapy［J］ .Advanced Drug Delivery Reviews，2009，61（15） ：1412-1426.

［4］許瑞波，劉瑋瑋，王明艷，等.角鯊烯的制備及 應(yīng)用 進(jìn) 展［J］. 山 東 醫(yī) 藥 ，2005，45（35）：69-70.

［5］饒麗晶，陳冠敏，黃宗銹，等.角鯊烯亞急性毒性試驗(yàn)研究［J］.海峽預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，2008，14（2） ：59-60.

［6］趙振東，孫震.生物活性物質(zhì)角鯊烯的資源及其應(yīng)用研究進(jìn)展［J］.林產(chǎn)化學(xué)與工業(yè)，2004，24（3） ：107-112.

［7］李冬梅，王婧，畢良武，等.提取方法對(duì)茶油中活性成分角鯊烯含量的影響［J］.生物質(zhì)化學(xué)工程，2006，40（1） ：9-14.

［8］雷治國(guó)，黃永芳，何會(huì)蓉.油茶及其種質(zhì)資源研究進(jìn)展［J］.經(jīng)濟(jì)林研究，2003，21（4）：123-125.

CONTENT DETERMINATION OF SQUALENE IN CAMELLIA OIL BY GASCHROMATOGRAPHY

XIE Yong,SU Su-jiao,LIANG Yi-chi
（School of Medicine,Fujian University of Traditional Chinese Medicine,Fuzhou 350108,China）

The paper constructed a method for determ ining the content of squalene,an active component in camellia oil,by gas chromatography.The results showed the content of squalene was in a good linear relationship w ith the peak area in a range of 10 to 80μg/m L (r=0.999 6),the recovery rate was 103.16% (n=5),and RSD was 1.865%(n=5).

camellia oil； squalene； gas chromatography

TS 201.2

B

CNKI:41-1378/N.20120208.0844.010

1673-2383（2012）01-0042-03

http://www.cnki.net/kcms/detail/41.1378.N.20120208.0844.010.html< class="emphasis_bold">網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間：

時(shí)間：2012-2-8 08:44:47AM

2011-09-19

福建省自然科學(xué)基金計(jì)劃項(xiàng)目（2011J05073）

謝勇（1976-），男，福建建甌人，副教授，研究方向?yàn)楣δ苄允称?

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