鹽酸環(huán)丙沙星、恩諾沙星和諾氟沙星對(duì)孔雀魚(yú)急性毒性試驗(yàn)研究

房英春，齊 躍，李 瑩，尚鵬釗，孫蓬蓬

（沈陽(yáng)大學(xué)生物與環(huán)境工程學(xué)院，遼寧沈陽(yáng) 110044）

鹽酸環(huán)丙沙星、恩諾沙星和諾氟沙星對(duì)孔雀魚(yú)急性毒性試驗(yàn)研究

房英春，齊 躍，李 瑩，尚鵬釗，孫蓬蓬

（沈陽(yáng)大學(xué)生物與環(huán)境工程學(xué)院，遼寧沈陽(yáng) 110044）

在室內(nèi)常溫、靜水條件下，利用鹽酸環(huán)丙沙星、恩諾沙星和諾氟沙星3種藥物，采用生物毒性試驗(yàn)方法對(duì)孔雀魚(yú)進(jìn)行急性毒性試驗(yàn)研究.3種藥物都設(shè)置了5個(gè)質(zhì)量濃度梯度，鹽酸環(huán)丙沙星藥物質(zhì)量濃度為300、350、400、450和500mg／L，諾氟沙星藥物質(zhì)量濃度為200、225、250、275和300mg／L，恩諾沙星藥物質(zhì)量濃度為25、50、75、100和125mg／L.通過(guò)24、48和96h中毒和死亡情況的觀(guān)察，結(jié)果表明：鹽酸環(huán)丙沙星、諾氟沙星和恩諾沙星對(duì)孔雀魚(yú)的安全質(zhì)量濃度分別為：300、200、25mg／L，最低致死質(zhì)量濃度分別為350、225、50mg／L，半致死質(zhì)量濃度為365、237、70mg／L，3種藥物對(duì)孔雀魚(yú)的毒性依次為：恩諾沙星＞諾氟沙星＞鹽酸環(huán)丙沙星.

孔雀魚(yú)；鹽酸環(huán)丙沙星；恩諾沙星；諾氟沙星；急性毒性試驗(yàn)

魚(yú)類(lèi)是水生食物鏈的一環(huán)，也是重要的經(jīng)濟(jì)動(dòng)物.在污染水體中，當(dāng)污染物達(dá)到一定濃度時(shí)，就會(huì)引起魚(yú)類(lèi)各種中毒反應(yīng)，例如行為失常，組織器官病變，生理功能紊亂乃至死亡.在人為控制條件下，進(jìn)行魚(yú)類(lèi)毒性實(shí)驗(yàn)，不僅用于化學(xué)品毒性強(qiáng)度測(cè)定、水體污染程度、廢水及其處理效果檢查，也可為制定水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)、評(píng)價(jià)環(huán)境質(zhì)量和管理廢水排放提供科學(xué)依據(jù).

一般觀(guān)賞魚(yú)都是經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期馴化變種而來(lái)，比較嬌貴，所以環(huán)境也相對(duì)穩(wěn)定，一旦管理不善很容易引起疾病.和其他熱帶魚(yú)一樣，孔雀魚(yú)作為觀(guān)賞用魚(yú)引入新加坡、中國(guó)臺(tái)灣和大陸，現(xiàn)已繁衍分布于部分熱帶地區(qū)的河川下游及湖沼、溝渠中，其野生棲地呈現(xiàn)多樣化，主要棲息于淡水流域及湖沼.其繁殖能力很強(qiáng)，并能耐受污染的水域，具群居性，性情溫和，能與溫和的中小型熱帶魚(yú)混養(yǎng)，活潑好動(dòng)，對(duì)環(huán)境的適應(yīng)能力強(qiáng)，目前全世界都有分布.

孔雀魚(yú)在人工養(yǎng)殖過(guò)程中已經(jīng)具有了較為成熟的技術(shù)和經(jīng)驗(yàn)，在觀(guān)賞魚(yú)市場(chǎng)具有價(jià)格合理、適于養(yǎng)殖的特點(diǎn)，深受養(yǎng)殖者和業(yè)余愛(ài)好者歡迎.但該魚(yú)也易發(fā)生疾病.對(duì)于常見(jiàn)的魚(yú)病，國(guó)內(nèi)已有較多的防治藥物，然而鹽酸環(huán)丙沙星、恩諾沙星、諾氟沙星對(duì)一般養(yǎng)殖魚(yú)類(lèi)可允許的計(jì)量對(duì)孔雀魚(yú)卻不一定適用.因此，本實(shí)驗(yàn)采用上述3種藥物對(duì)該魚(yú)的急性毒性試驗(yàn)研究，不僅對(duì)孔雀魚(yú)且對(duì)其他觀(guān)賞魚(yú)的飼養(yǎng)、疾病防控、治療及對(duì)養(yǎng)殖水體的健康持續(xù)利用等方面都具有借鑒和指導(dǎo)意義.

1 材料與方法

1.1 材料

實(shí)驗(yàn)用魚(yú)為孔雀魚(yú)［1］，購(gòu)于沈陽(yáng)市北市花鳥(niǎo)魚(yú)蟲(chóng)市場(chǎng)，規(guī)格整齊，反應(yīng)靈敏，魚(yú)體健康［2］.平均全長(zhǎng)3.2cm，平均體重0.35g.試驗(yàn)用藥分別是：鹽酸左氧氟沙星膠囊（諾倍康）國(guó)藥準(zhǔn)字H20010731，上海天龍藥業(yè)有限公司，規(guī)格為0.1g（以左氧氟沙星計(jì)）；諾氟沙星膠囊（華源鋒）國(guó)藥準(zhǔn)字H2102700，上海華源長(zhǎng)富藥業(yè)集團(tuán)遼寧制藥有限公司，規(guī)格為0.1g；恩諾沙星注射液（貝諾星）獸用，獸藥字（2007）100151295，江蘇華東貝爾生物藥業(yè)有限公司，規(guī)格為10ml：恩諾沙星250mg.

1.2 方法

取諾氟沙星200、225、250、275、300mg分別溶于100mL備用水中，并在100mL備用水中試探性滴入體積分?jǐn)?shù)為30%醋酸.先將200mg諾氟沙星溶于100mL水中，逐滴入體積分?jǐn)?shù)為30%醋酸，同時(shí)用玻璃棒不斷攪拌，直到諾氟沙星完全溶于醋酸中，無(wú)沉淀，無(wú)懸浮顆粒.換藥要輕、慢，盡量不要干擾魚(yú)的情緒.換藥過(guò)程控制在10 min之內(nèi).鹽酸左氧氟沙星和恩諾沙星溶液配置與諾氟沙星溶液一致.

實(shí)驗(yàn)以預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定實(shí)驗(yàn)藥物濃度梯度.3種藥物分別設(shè)置5個(gè)濃度，鹽酸左氧氟沙星藥物質(zhì)量濃度為300、350、400、450和500mg／L，諾氟沙星藥物質(zhì)量濃度為200、225、250、275和300 mg／L，恩諾沙星藥質(zhì)量物濃度為25、50、75、100和125mg／L.同時(shí)設(shè)空白對(duì)照組.每組實(shí)驗(yàn)用魚(yú)10尾.每天檢測(cè)pH值、溶解氧（DO）和水溫（t），保持pH值在6.0～8.5，DO值在5mg／L，t控制±2℃.實(shí)驗(yàn)期間，控制換藥在10min內(nèi)，不對(duì)溶液強(qiáng)烈充氣，避免產(chǎn)生對(duì)魚(yú)類(lèi)的干擾行為，不投食，實(shí)驗(yàn)用水經(jīng)充分曝氣［3-4］.

實(shí)驗(yàn)以96h為一個(gè)實(shí)驗(yàn)周期，在24、48和96h時(shí)記錄實(shí)驗(yàn)魚(yú)的死亡數(shù)，確定魚(yú)類(lèi)死亡50%時(shí)的受試物質(zhì)量濃度，半數(shù)致死濃度用96h LC50表示，記錄無(wú)死亡的最大質(zhì)量濃度和導(dǎo)致魚(yú)類(lèi)全部死亡的最小實(shí)驗(yàn)濃度［5］.

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

在室內(nèi)常溫、靜水條件下，利用鹽酸左氧氟沙星、恩諾沙星和諾氟沙星3種藥物，采用生物毒性試驗(yàn)方法對(duì)孔雀魚(yú)進(jìn)行急性毒性試驗(yàn)研究.三種藥物分別設(shè)置了5個(gè)質(zhì)量濃度梯度，鹽酸左氧氟沙星為300、350、400、450和500mg／L，諾氟沙星為200、225、250、275和300mg／L，恩諾沙星為25、50、75、100和125mg／L.通過(guò)24、48和96h中毒和死亡情況的觀(guān)察，結(jié)果表明：鹽酸左氧氟沙星、諾氟沙星和恩諾沙星對(duì)孔雀魚(yú)的安全質(zhì)量濃度分別為：300、200、25mg／L，最低致死質(zhì)量濃度分別為350、225、50mg／L，半致死質(zhì)量濃度為365、237、70mg／L，三種藥物對(duì)孔雀魚(yú)的毒性依次為：恩諾沙星＞諾氟沙星＞鹽酸左氧氟沙星.

2.1 鹽酸左氧氟沙星對(duì)孔雀魚(yú)的致死情況

根據(jù)表1可得鹽酸左氧氟沙星對(duì)孔雀魚(yú)的最低致死質(zhì)量濃度為350mg／L，安全質(zhì)量濃度為300mg／L.根據(jù)半致死質(zhì)量濃度的計(jì)算方法可得孔雀魚(yú)的半致死質(zhì)量濃度為365mg／L.

表1 鹽酸左氧氟沙星對(duì)孔雀魚(yú)的致死率Tabel 1 Ciprofloxacin hydrochloride on guppies lethality rate

2.2 諾氟沙星對(duì)孔雀魚(yú)的致死情況

根據(jù)表2可得諾氟沙星對(duì)孔雀魚(yú)的最低致死質(zhì)量濃度為225mg／L，安全質(zhì)量濃度為200mg／L.根據(jù)半致死質(zhì)量濃度的計(jì)算方法可得孔雀魚(yú)的半致死濃度為237mg／L.

表2 諾氟沙星對(duì)孔雀魚(yú)的致死率Tabel 2 Norfloxacin on guppies lethality rate

2.3 恩諾沙星對(duì)孔雀魚(yú)的致死情況

根據(jù)表3可得恩諾沙星對(duì)孔雀魚(yú)的最低致死質(zhì)量濃度為50mg／L，安全質(zhì)量濃度為25mg／L.根據(jù)半致死質(zhì)量濃度的計(jì)算方法可得孔雀魚(yú)的半致死質(zhì)量濃度為70mg／L.

表3 恩諾沙星對(duì)孔雀魚(yú)的致死率Tabel 3 Enrofloxacin on guppies lethality rate

本類(lèi)藥大量使用后，可能出現(xiàn)抗藥性的趨向（在48和96h換藥時(shí)魚(yú)體對(duì)藥物敏感性降低，猜測(cè)可能產(chǎn)生抗藥性）.

3 討 論

由表1～表3得出：

（1）最低致死質(zhì)量濃度：鹽酸左氧氟沙星為350mg／L；諾氟沙星225mg／L；恩諾沙星50mg／L.

（2）安全質(zhì)量濃度：鹽酸左氧氟沙星為300 mg／L；諾氟沙星200mg／L；恩諾沙星25mg／L.

（3）半致死質(zhì)量濃度：鹽酸左氧氟沙星為365 mg／L；諾氟沙星237mg／L；恩諾沙星70mg／L.

（4）3種藥物對(duì)孔雀魚(yú)的毒性大小依次為恩諾沙星＞諾氟沙星＞鹽酸左氧氟沙星.

（5）該試驗(yàn)以孔雀魚(yú)為試驗(yàn)用魚(yú)，利用鹽酸左氧氟沙星、恩諾沙星和諾氟沙星作為試驗(yàn)藥物，對(duì)其毒性作嘗試性研究.旨在尋找其安全用藥范圍，減少藥物對(duì)魚(yú)體的危害，使藥殘達(dá)到最小，減小污染，促進(jìn)大規(guī)模的觀(guān)賞魚(yú)養(yǎng)殖業(yè)持續(xù)、健康發(fā)展.

（6）氟喹諾酮類(lèi)藥品已經(jīng)成為水產(chǎn)養(yǎng)殖中普遍使用的高效抗感染藥物之一，被廣泛應(yīng)用于各種水產(chǎn)動(dòng)物疾病的預(yù)防和治療［6］.國(guó)內(nèi)外對(duì)環(huán)丙沙星、氧氟沙星、諾氟沙星、恩諾沙星等氟喹諾酮類(lèi)藥物在水產(chǎn)動(dòng)物體內(nèi)的應(yīng)用都有研究，并總結(jié)分析了生理差異、藥理、環(huán)境等各因素對(duì)這些藥物在水產(chǎn)動(dòng)物體內(nèi)的藥物動(dòng)力學(xué)和殘留消除規(guī)律的影響.對(duì)于常見(jiàn)的魚(yú)病，國(guó)內(nèi)已有較多的防治藥物，然而鹽酸左氧氟沙星、恩諾沙星、諾氟沙星對(duì)觀(guān)賞魚(yú)中的孔雀魚(yú)及其魚(yú)病防治的可允許計(jì)量尚無(wú)報(bào)道.本實(shí)驗(yàn)采用魚(yú)的急性毒性試驗(yàn)，對(duì)這三種生物藥的應(yīng)用進(jìn)行研究，目的是給出三種藥對(duì)孔雀魚(yú)正確合理的安全質(zhì)量濃度.試驗(yàn)結(jié)果將對(duì)觀(guān)賞魚(yú)的水環(huán)境保護(hù)和健康養(yǎng)殖提供依據(jù).

［1］楊鳶劼.魚(yú)類(lèi)作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在環(huán)境毒理學(xué)研究中的應(yīng)用［J］.水產(chǎn)科技情報(bào)，2010，37（4）：187-190.

［2］尚禮.孔雀魚(yú)的飼養(yǎng)和繁殖［J］.花木盆景：花卉園藝，2001（6）：50.

［3］周兵，韋其鋒，楊淞，等.3種常用水產(chǎn)藥物對(duì)孔雀魚(yú)和月光魚(yú)的急性毒性試驗(yàn)［J］.水利漁業(yè)，2008，28（2）：89-91.

［4］房英春，李越，李勝男.二溴海因和三氯異氰尿酸對(duì)孔雀魚(yú)的急性毒性試驗(yàn)［J］.水產(chǎn)養(yǎng)殖，2005，26（6）：38-39.

［5］周永欣，張宗涉.水生生物毒性試驗(yàn)方法［M］.北京：農(nóng)業(yè)出版社，1989：50-52.

［6］郭海燕，馬躍崗，朱林，等.氟喹諾酮類(lèi)藥物在水產(chǎn)動(dòng)物體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)和殘留規(guī)律［J］.水生態(tài)學(xué)雜志，2008（1）：1-8.

Acute Toxicity Experience to Guppy with Ciprofloxacin HCI，Enrofloxacin and Norfloxacin

FANG Yingchun，QI Yue，LI Ying，SHANG Pengzhao，SUN Pengpeng

（College of Biological and Environmental Engineering，Shenyang University，Shenyang 110044，China）

Under the room temperature，static water conditions，the experiment took advantage of ciprofloxacin HCI，enrofloxacin and norfloxacin.And it studied the acute toxicity experience to the guppy with the experimental methods of comparative analysis and toxicology.This experiment will firstly set 5teams of concentration gradient for the 3drugs.And it is ciprofloxacin HCI 300、350、400、450and 500mg／L，norfloxacin 200、225、250、275and 300mg／L，enrofloxacin 25、50、75、100and 125 mg／L.Under the observation of poisoning and death in 24，48and 96h，the guppies＇safe concentrations of ciprofloxacin HCI，enrofloxacin and norfloxacin are：300、200、25mg／L，the minimum lethal oxygen concentration：350、225、50mg／L，half lethal concentration：365、237、70mg／L.The experiment result shows：enrofloxacin has the strongest toxicity，and then the norfloxacin，and ciprofloxacin HCl has the weakest.

guppy；ciprofloxacin hydrochloride；enrofloxacin；norfloxacin；acute toxicity test

Q 95-3

A

1008-9225（2012）03-0015-03

2011-12-27

遼寧省教育廳科學(xué)技術(shù)研究課題（2008Z148）.

房英春（1960-）女，遼寧錦州人，沈陽(yáng)大學(xué)教授.

王 穎】