慢性阻塞性肺疾病患者急性加重期與緩解期痰液及血清IL-6、IL-8、TNF-α表達水平的差異及其臨床意義

龍仕居，陳忠仁

(海南省海口市人民醫(yī)院呼吸內(nèi)科 570208)

慢性阻塞性肺疾病(COPD)是呼吸系統(tǒng)的常見病和多發(fā)病，按病程可分為急性加重期和穩(wěn)定期，前者指在短期內(nèi)出現(xiàn)咳嗽、咳痰、氣喘加重、痰量增多，發(fā)熱等癥狀；穩(wěn)定期咳嗽、咳痰、氣喘等癥狀穩(wěn)定或輕微。近年來隨著COPD的氣道炎癥研究日益深入，發(fā)現(xiàn)各種炎癥細胞、細胞因子、黏附因子及酶參與了COPD的發(fā)病過程[1]，尤其是細胞因子日益受到關注。本研究比較了COPD患者急性加重期與穩(wěn)定期痰液及血清中白細胞介素-6(interleukin 6，IL-6)、白細胞介素-8(interleukin 8，IL-6)和腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)表達水平的差異，并探討其臨床意義。

1 資料與方法

1.1一般資料 2008年4月至2010年4月本院門診和住院的COPD患者80例，其中，急性加重期組40例，臨床緩解期組40例；門診健康體檢者30例為對照組。急性加重期組男20例，女20例；年齡52～78歲，平均(65±3.5)歲。臨床緩解期組男21例，女19例；年齡54～76歲，平均(64±4.2)歲。均符合中華醫(yī)學會呼吸病學分會制定的COPD診斷及分期標準[2]。對照組男14例，女16例；年齡50～70歲，平均(62±4.6)歲；無呼吸、循環(huán)、消化、泌尿及神經(jīng)系統(tǒng)疾病，未用糖皮質(zhì)激素等免疫抑制劑[3]。

表1 3組患者誘導痰液及血清中IL-6、IL-8、TNF-α水平的變化

a：P<0.05，b：P<0.01，與對照組比較；c：P<0.05，d：P<0.01，與緩解期組比較。

1.2方法

1.2.1標本采集 血清：清晨空腹抽取肘靜脈血5 mL，4℃靜置30 min，臺式低溫離心機離心10 min(離心半徑為12.5 cm，3 000 r/min)，提取上清液，分裝后置于―80 ℃冰箱保存待測[4]。誘導痰液：吸入沙丁胺醇氣霧劑200 μg，休息15 min，經(jīng)超聲霧化儀吸入3%高滲鹽水20 min；患者感覺有痰時，清潔口腔后用力咳出深部痰液約5 mL；加等量新配制的0.1%二硫蘇糖醇(DTT)振蕩混勻，置于37 ℃水浴箱30 min，加入與DTT等體積的PBS緩沖液振蕩混勻5 min，篩網(wǎng)過濾，將細胞懸液以3 000 r/min離心10 min(離心半徑12.5 cm)，吸取上清液，分裝，置于―80℃保存待測[5]。

1.2.2細胞因子檢測 采用雙抗體夾心ELISA法檢測血清和誘導痰上清液中IL-6、IL-8、TNF-α的含量，試劑盒由美國Genzyme公司獨家提供大包裝，深圳晶美生物工程有限公司分裝試劑盒，嚴格按照說明書進行。儀器：美國BIO-TEK ELX800全自動酶標儀。

2 結(jié) 果

各組誘導痰液及血清IL-6、IL-8、TNF-α水平的變化，見表1。緩解期組和急性加重期組誘導痰液中IL-6、IL-8、TNF-α水平均高于對照組(P<0.05)，急性加重期組誘導痰中IL-6、IL-8、TNF-α水平均高于緩解期組(P<0.05)；緩解期組和急性加重期組血清中IL-6、IL-8水平高于對照組(P<0.05)，急性加重期組血清中IL-6、IL-8、TNF-α水平均高于緩解期組(P<0.05)。

3 討 論

COPD是一常見病、多發(fā)病,患者勞動能力和生活自理能力降低，甚至喪失,目前在全球?qū)е禄颊咚劳龅募膊≈信诺?位[6]。COPD是以不可逆慢性氣流受限或慢性氣流阻塞為特征的一組肺部疾病的總稱，主要病理特點為由多種細胞和細胞因子參與的慢性氣道炎癥。其中，TNF-α是與COPD密切相關的細胞因子，是氣道反應和炎癥反應中的重要介質(zhì)[7-8]，，主要是由活化的巨噬細胞、單核細胞以及T細胞產(chǎn)生,它具有激活中性粒細胞、刺激IL-8釋放等致炎作用[9]。IL-6、IL-8亦是參與COPD氣道炎癥的重要的細胞因子[10-11]。IL-6是一種由活化的單核細胞、巨噬細胞、T和B淋巴細胞、內(nèi)皮細胞及成纖維細胞等分泌的具有多種生物學功能的細胞因子，直接參與炎癥和損傷。IL-8可誘導氣道黏膜中中性粒細胞及嗜酸性粒細胞浸潤而加重炎癥反應[12- 13]。

本研究比較了COPD患者急性加重期與緩解期誘導痰及血清中IL-6、IL-8和TNF-α表達水平的變化，結(jié)果顯示臨床緩解期組患者痰液IL-6、IL-8和TNF-α的含量明顯高于對照組，急性加重期組患者痰液IL-6、IL-8和TNF-α的含量明顯高于緩解期組。血清中IL-6、IL-8和TNF-α的變化趨勢與誘導痰相似，但不如誘導痰中的含量高。提示：(1)誘導痰作為一種非侵入性研究方法，能更準確地反映氣道炎癥細胞、炎癥介質(zhì)及細胞因子的水平；(2)隨著病情進展，誘導痰及血清IL-6、IL-8和TNF-α的含量隨之增加；(3)TNF-α作為炎癥介質(zhì)促進炎癥細胞的趨化和活化，釋放較多的IL-6、IL-8；反之，增高的IL-6、IL-8又使局部的炎癥細胞進一步增多，使炎癥持續(xù)加重，最終引起小氣道和肺泡組織結(jié)構(gòu)的改變。

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