組織型纖溶酶原激活物在進(jìn)展期大腸癌組織中的表達(dá)與微血管密度的相關(guān)性研究*

顧 敏，孟信春，王 強(qiáng)，楊清平

(1.重慶市長(zhǎng)壽區(qū)中醫(yī)院普外科 401220；2.重慶市長(zhǎng)壽區(qū)人民醫(yī)院普外科 401220；3.重慶市長(zhǎng)壽區(qū)人民醫(yī)院病理科 401220)

組織型纖溶酶原激活物(t-PA)由血管內(nèi)皮細(xì)胞合成分泌，可以選擇性激活與纖維蛋白結(jié)合的纖溶酶原而發(fā)揮纖溶作用，近年來(lái)發(fā)現(xiàn)t-PA能夠通過(guò)激活細(xì)胞外基質(zhì)中的蛋白質(zhì)酶聯(lián)反應(yīng)來(lái)降解微血管基膜及細(xì)胞外基質(zhì)，從而阻礙微血管的生成。國(guó)內(nèi)多家研究數(shù)據(jù)顯示癌組織中t-PA濃度明顯低于正常組織。本文通過(guò)檢測(cè)癌組織浸液中t-PA濃度及癌組織微血管密度(MVD)，初步探討t-PA在腫瘤浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移過(guò)程中的調(diào)節(jié)機(jī)制。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2008年6月至2010年8月本院大腸癌患者手術(shù)切除的標(biāo)本60例。患者術(shù)前檢查未發(fā)現(xiàn)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，術(shù)前未接受放化療，無(wú)急性腸梗阻患者，經(jīng)腸道準(zhǔn)備后行標(biāo)準(zhǔn)大腸癌根治術(shù)。肉眼見(jiàn)腸管漿膜層、直腸系膜或鄰近組織有浸潤(rùn)。病理證實(shí)癌組織浸潤(rùn)腸管全層，包括高中低分化腺癌及黏液腺癌。切取外緣癌組織為研究組，另取距腫瘤5 cm以上的正常腸管組織20例為對(duì)照組。

1.2方法 將外緣癌組織分為兩等分，分別檢測(cè)組織型纖溶酶原激活物及微血管密度。t-PA檢測(cè)采用發(fā)色底物法，試劑購(gòu)自上海太陽(yáng)生物技術(shù)公司。將癌組織剪成細(xì)小碎塊，按比例加入PBS液后研碎，獲取組織勻漿，離心后取上清液檢測(cè)。MVD檢測(cè)采用免疫組化SP法，鼠抗人CD34單克隆抗體及試劑盒購(gòu)自武漢博士德生物工程公司。每張切片在100低倍光鏡下挑選微血管分布最密集區(qū)，然后在200高倍光鏡下計(jì)算5個(gè)視野的微血管數(shù)目取平均值。

2 結(jié) 果

進(jìn)展期大腸癌外緣癌組織浸液t-PA濃度低于癌旁正常腸管組織(P<0.01)，外緣癌組織的微血管密度高于正常(P<0.01)。相關(guān)性分析顯示，t-PA濃度與MVD呈負(fù)相關(guān)(r=-0.570 8)。

表1 研究組和對(duì)照組t-PA濃度及微血管密度的比較±s)

圖1 SP染色，CD34定位于血管內(nèi)皮細(xì)胞的細(xì)胞膜與細(xì)胞質(zhì)，研究組的密度明顯高于對(duì)照組

圖2 大腸癌組t-PA濃度與MVD的相關(guān)性分析

3 討 論

腫瘤的生長(zhǎng)和浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移同時(shí)存在細(xì)胞外基質(zhì)的降解和微血管基膜的生成兩種微觀過(guò)程。這兩種過(guò)程由大量的信號(hào)分子來(lái)綜合調(diào)控。有研究證實(shí)，乙酰肝素酶、尿激酶型纖溶酶原激活物、基質(zhì)金屬蛋白酶等能夠介導(dǎo)降解細(xì)胞外基質(zhì)的活性分子在癌組織中大量表達(dá)。而多項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)，作為尿激酶型纖溶酶原激活物的同類型物質(zhì)，組織型纖溶酶原激活物同樣能介導(dǎo)細(xì)胞外基質(zhì)的降解，卻在腫瘤組織中低表達(dá)。

本研究嚴(yán)格選取已浸潤(rùn)漿膜層的進(jìn)展期大腸癌外緣癌組織作為檢測(cè)對(duì)象，因?yàn)檫M(jìn)展期的腫瘤生長(zhǎng)較為成熟，腫瘤內(nèi)各種活性因子表達(dá)較高，而處于外緣的癌組織侵襲性更強(qiáng)，血管生成更為密集，并且我們除外了急性腸梗阻的病例，因腸管擴(kuò)張組織水腫能改變被檢測(cè)物的濃度，故檢測(cè)結(jié)果具有代表性。本研究發(fā)現(xiàn)，在外緣癌組織中的t-PA濃度確實(shí)明顯低于正常組織，而微血管密度卻顯著高于正常。

正常情況下t-PA 及PAI-1分布在血管腔表面，并且存在動(dòng)態(tài)平衡調(diào)節(jié)著血漿纖溶活性，由于新生微血管內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)功能不完整，t-PA 能夠擴(kuò)散至腔外，從而能夠降解微血管基膜及細(xì)胞外基質(zhì)，阻礙微血管的生成。筆者認(rèn)為腫瘤組織通過(guò)某種信號(hào)介導(dǎo)降低血管內(nèi)皮細(xì)胞的t-PA合成分泌，同時(shí)增加PAI-1的表達(dá)，阻斷t-PA對(duì)新生微血管基膜的降解，有助于新生內(nèi)皮細(xì)胞的穩(wěn)定附著，從而促進(jìn)微血管的生成。并且t-PA濃度降低后造成纖溶酶活性減低，造成局部的高凝狀態(tài)，高凝狀態(tài)可以減少免疫細(xì)胞的造訪，可以提供相對(duì)穩(wěn)定的物理環(huán)境以維持各種活性因子的濃度，有利于腫瘤細(xì)胞的復(fù)制和微血管的生成。

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