Sysmex XE－2100全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀對(duì)血細(xì)胞形態(tài)異常警示功能的評(píng)價(jià)和分析

林 楨，張玉霞（.廣州醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科 5060；.廣東醫(yī)學(xué)院檢驗(yàn)系，廣東 東莞 53808）

Sysmex XE－2100血細(xì)胞分析儀除了采用傳統(tǒng)的電阻抗法和射頻法外，還采用了流式細(xì)胞技術(shù)，結(jié)合特殊的化學(xué)試劑及熒光染料對(duì)外周血細(xì)胞進(jìn)行分類(lèi)，并可分析原始細(xì)胞、幼稚細(xì)胞和有核紅細(xì)胞，大大提高了工作效率，但Sysmex XE－2100全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀有著許多儀器共同存在的問(wèn)題。例如，在鑒別血細(xì)胞的形態(tài)和結(jié)構(gòu)等方面還不夠完善，對(duì)異常細(xì)胞的篩檢不甚理想等等。如果過(guò)分地依賴(lài)自動(dòng)化血細(xì)胞分析儀而忽視了手工復(fù)檢血涂片，將導(dǎo)致臨床上相當(dāng)一部分的漏檢、漏診及誤診，嚴(yán)重影響了臨床醫(yī)師的治療方案。但如對(duì)每個(gè)血常規(guī)標(biāo)本進(jìn)行血涂片的復(fù)檢，則會(huì)給檢驗(yàn)人員引起不必要的負(fù)擔(dān)。所以，針對(duì)本實(shí)驗(yàn)室的血細(xì)胞分析儀制定血細(xì)胞顯微鏡復(fù)查血涂片的標(biāo)準(zhǔn)是非常有必要的［1］。本實(shí)驗(yàn)室制定了Sysmex XE－2100血細(xì)胞分析儀復(fù)檢血涂片的標(biāo)準(zhǔn)，并對(duì)血細(xì)胞分析儀提供的信息與顯微鏡檢查結(jié)果進(jìn)行一致性的評(píng)估。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集廣州醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院各科室的住院患者標(biāo)本共855例，用廣州陽(yáng)普公司生產(chǎn)的乙二胺四乙酸二鉀真空抗凝管采集。

1.2 儀器 Sysmex XE－2100全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀，由日本東亞公司提供；Olympus雙目光學(xué)顯微鏡用于血涂片顯微鏡分析。

1.3 試劑 Sysmex XE－2100全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀原裝配套試劑及全血質(zhì)控物；瑞氏染液，染液按照《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》的要求配制［2］。

1.4 復(fù)檢標(biāo)準(zhǔn)制定 參考國(guó)際血液分析儀檢測(cè)結(jié)果顯微鏡41條復(fù)檢規(guī)則［3］，并根據(jù)2003年浙江省臨床檢驗(yàn)中心頒布的《使用血細(xì)胞分析儀及尿分析儀檢測(cè)結(jié)果應(yīng)予復(fù)查和鏡檢的要求》及本院具體情況和XE－2100的性能制定出較為可行的外周血涂片復(fù)檢標(biāo)準(zhǔn)。顯微鏡檢查血涂片的標(biāo)準(zhǔn)：（1）儀器有報(bào)警提示，白細(xì)胞（WBC）、紅細(xì)胞（RBC）、血小板（PLT）三系計(jì)數(shù)異常和（或）散點(diǎn)圖異常及直方圖異常。（2）三系或二系或一系減少或增加而儀器未報(bào)警者，WBC＜2.5×109／L或 WBC＞25.0×109／L；WBC分類(lèi)結(jié)果有異常，中性粒細(xì)胞（N）＞0.90、淋巴細(xì)胞（L）＞0.60（成人）、淋巴細(xì)胞（L）＞0.70（兒童）、單核細(xì)胞相對(duì)值（M）＞0.15、嗜酸粒細(xì)胞（E）＞0.15、嗜堿粒細(xì)胞（B）＞0.03；RBC＜2.0×1012／L或＞6.0×1012／L；血紅蛋白（Hb）＜70 g／L 或 ＞180 g／L；PLT＜60×109／L 或 PLT＞600×109／L；平均紅細(xì)胞體積（MCV）＜70 f L或＞105 f L［1］。（3）儀器報(bào)警結(jié)果顯示，①未成熟粒細(xì)胞（Immature Gran）；②有核紅細(xì)胞（NRBC）；③血小板聚集（PLT Clumps）；④原始細(xì)胞（Blasts）；⑤異型淋巴細(xì)胞（Atypitical Lympho）；⑥核左移（Left Shift）；⑦直方圖、散點(diǎn)圖異常。（4）臨床醫(yī)師有鏡檢要求。（5）血液科患者。（6）與臨床診斷或提示明顯不符。

1.5 實(shí)驗(yàn)方法 將收集的標(biāo)本于采血后30min至4 h用Sysmex XE－2100自動(dòng)進(jìn)樣模式進(jìn)行檢測(cè)，包括全血細(xì)胞計(jì)數(shù)（CBC）、白細(xì)胞分類(lèi)（DC）、有核紅細(xì)胞（NRBC）和網(wǎng)織紅細(xì)胞（RET），將檢測(cè)結(jié)果備份存檔。同時(shí)，每份標(biāo)本制備1張血涂片，用瑞氏染液進(jìn)行染色，然后用顯微鏡油鏡行鏡檢，計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，按其形態(tài)特征進(jìn)行分類(lèi)計(jì)數(shù)。

1.6 涂片復(fù)檢陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn) （1）原始和幼稚細(xì)胞大于或等于1%；（2）早幼粒細(xì)胞和中幼粒細(xì)胞大于或等于1%；（3）晚幼粒細(xì)胞大于2%；（4）異形淋巴細(xì)胞大于1%；（5）NRBC＞1%［3］。

1.7 評(píng)估方法 對(duì)血細(xì)胞分析儀的檢測(cè)結(jié)果變化和顯微鏡復(fù)檢結(jié)果用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。以手工顯微鏡法為標(biāo)準(zhǔn)計(jì)算Kappa值，判斷儀器結(jié)果與鏡檢結(jié)果的一致性程度。Kappa值大于或等于0.75，說(shuō)明兩者達(dá)到相當(dāng)滿(mǎn)意的一致性；Kappa值大于0.4，說(shuō)明兩者一致性尚可；Kappa值小于0.4，說(shuō)明兩者一致性不夠理想［4］。通過(guò)血涂片顯微鏡檢查，計(jì)算結(jié)果陽(yáng)性率，以此來(lái)判斷所制定標(biāo)準(zhǔn)的合理性、有效性。

2 結(jié) 果

2.1 儀器警告提示的評(píng)價(jià) 對(duì)XE－2100檢測(cè)的855份標(biāo)本符合涂片復(fù)檢中標(biāo)準(zhǔn)的標(biāo)本進(jìn)行血涂片顯微鏡鏡檢分析，并用Kappa值評(píng)價(jià)儀器報(bào)警提示與顯微鏡檢查結(jié)果一致性程度，見(jiàn)表1。

表1 儀器提示結(jié)果與顯微鏡鏡檢結(jié)果的一致性程度

2.2 符合血涂片復(fù)檢標(biāo)準(zhǔn)的標(biāo)本顯微鏡檢查的陽(yáng)性符合率符合本標(biāo)準(zhǔn)本實(shí)驗(yàn)復(fù)查標(biāo)本555份，其中部分標(biāo)本存在著符合多種標(biāo)準(zhǔn)的可能，逐項(xiàng)復(fù)查血涂片陽(yáng)性率見(jiàn)表2。

2.3 300份隨機(jī)標(biāo)本血涂片顯微鏡鏡檢結(jié)果 300份隨機(jī)標(biāo)本經(jīng)XE－2100檢查后只要符合其中任一項(xiàng)血涂片復(fù)檢標(biāo)準(zhǔn)即為符合復(fù)檢標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性標(biāo)本；300份隨機(jī)標(biāo)本均進(jìn)行血涂片顯微鏡鏡檢，顯微鏡檢出一項(xiàng)陽(yáng)性即為血涂片顯微鏡鏡檢陽(yáng)性標(biāo)本。結(jié)果顯示：敏感度為95.70%，特異度為81.16%，準(zhǔn)確性為85.67%，見(jiàn)表3。

表2 555份符合標(biāo)準(zhǔn)的標(biāo)本顯微鏡復(fù)查分析

表3 300份隨機(jī)標(biāo)本符合標(biāo)準(zhǔn)與血涂片顯微鏡鏡檢比較（n）

3 討 論

Sysmex XE－2100全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀具有靈活的進(jìn)樣方式和7種檢測(cè)模式，可以滿(mǎn)足臨床不同標(biāo)本的檢測(cè)要求，并可節(jié)約試劑成本。其應(yīng)用專(zhuān)用的 WBC／BASO、IMI和 WBC DIFF檢測(cè)通道、半導(dǎo)體激光流式細(xì)胞術(shù)原理結(jié)合細(xì)胞化學(xué)熒光染色技術(shù)對(duì)血細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)，當(dāng)細(xì)胞（或其他顆粒）通過(guò)激光束被照射時(shí)，細(xì)胞（或其他顆粒）因本身的各種特性（如體積大小、染色程度、細(xì)胞成分濃度或細(xì)胞核密度等），可阻擋或改變激光束的方向，產(chǎn)生與細(xì)胞（或其他顆粒）特征相應(yīng)的各種角度的散射光。通過(guò)每個(gè)細(xì)胞產(chǎn)生的3種信號(hào)來(lái)分辨細(xì)胞，前向散射光反映細(xì)胞的體積，側(cè)向90°散射光反映細(xì)胞內(nèi)容物（如核和顆粒等），側(cè)向熒光反映細(xì)胞內(nèi)核酸的含量，并得到細(xì)胞散點(diǎn)圖和用細(xì)胞直方圖直觀(guān)表示［5］，從而保證了白細(xì)胞分類(lèi)的質(zhì)量。

血涂片顯微鏡復(fù)檢不僅能夠補(bǔ)充儀器鑒別血細(xì)胞形態(tài)能力的不足，而且可以直觀(guān)地評(píng)估和驗(yàn)證血細(xì)胞分析儀所報(bào)告結(jié)果的可行性。表1對(duì)符合復(fù)檢標(biāo)準(zhǔn)的標(biāo)本與血涂片顯微鏡鏡檢一致性程度進(jìn)行比較，結(jié)果表明儀器提示血小板減少與血涂片顯微鏡鏡檢結(jié)果相比較Kappa值0.97，U＝16.90，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），顯示兩者一致性滿(mǎn)意；提示核左移的儀器結(jié)果與鏡檢結(jié)果比較Kappa值0.68，U＝9.43，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），提示兩者一致性尚可；而提示未成熟粒細(xì)胞、異型淋巴細(xì)胞、原始粒細(xì)胞、有核紅細(xì)胞、血小板聚集的儀器結(jié)果與鏡檢結(jié)果比較，Kappa值分別為0.35、0.31、0.27、0.28、0.25，U 值分別為7.15、4.89、4.66、4.17、4.55，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），為顯示兩者一致性尚不夠理想。其中不排除由于推片和閱片的限制，以及分析數(shù)量的影響。結(jié)果說(shuō)明，在儀器存在上述報(bào)警信號(hào)提示時(shí)，必須進(jìn)行人工推片，染色鏡檢，以證實(shí)提示信息的可靠性，更排除一些誤報(bào)警的情況存在。

表2顯示，異常提示與人工鏡檢的符合率因異常細(xì)胞的種類(lèi)不同而有較大差異。部分標(biāo)本出現(xiàn)符合多種復(fù)檢標(biāo)準(zhǔn)的現(xiàn)象，逐項(xiàng)進(jìn)行鏡檢發(fā)現(xiàn)儀器報(bào)警提示白細(xì)胞計(jì)數(shù)異常、血小板減少的陽(yáng)性率分別為97.85%、99.46%，符合率較高；提示核左移的陽(yáng)性率為65.52%，符合率較好；提示原始細(xì)胞、未成熟粒細(xì)胞、異型淋巴細(xì)胞、有核紅細(xì)胞的陽(yáng)性率分別為25.81%、37.78%、28.30%、25.00%，符合率相對(duì)較差。36份儀器提示有核紅細(xì)胞的標(biāo)本中血涂片有27份未見(jiàn)有核紅細(xì)胞，導(dǎo)致誤報(bào)警的原因可能是XE－2100是根據(jù)側(cè)向熒光和側(cè)向散射光信號(hào)來(lái)計(jì)算NRBC，所以導(dǎo)致儀器誤把小淋巴細(xì)胞計(jì)為有核紅細(xì)胞；也有可能是中熒光網(wǎng)織紅細(xì)胞與高熒光網(wǎng)織紅細(xì)胞（HFR）胞漿內(nèi)核糖體等堿性物質(zhì)含量增多，體積近似于紅細(xì)胞，被熒光染色后造成計(jì)數(shù)上的誤差；也有可能是因?yàn)楦鞣N原因所致的血小板聚集或巨大血小板等因素引起計(jì)數(shù)上的誤差。53份儀器提示異型淋巴細(xì)胞的標(biāo)本中血涂片有38份未見(jiàn)異型淋巴細(xì)胞，可能與實(shí)驗(yàn)者對(duì)異常淋巴細(xì)胞的辨認(rèn)尚不夠準(zhǔn)確有關(guān)，也有可能是大顆粒淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞在體積、顆粒及染色質(zhì)疏密程度上與異型淋巴細(xì)胞有一定的相似性［6］，造成了儀器識(shí)別異型淋巴細(xì)胞的困難。65份儀器提示血小板聚集的標(biāo)本中血涂片有50份未見(jiàn)血小板聚集，可能與血小板衛(wèi)星現(xiàn)象、儀器提示閾值或細(xì)胞碎片等雜質(zhì)有關(guān)，造成儀器識(shí)別錯(cuò)誤。

表3顯示，儀器假陽(yáng)性率為13.00%（39／300），造成假陽(yáng)性較高的可能原因如下：有些標(biāo)本儀器提示有未成熟的粒細(xì)胞，但鏡檢并沒(méi)有發(fā)現(xiàn)。XE－2100血細(xì)胞分析儀采用單獨(dú)通道對(duì)未成熟粒細(xì)胞進(jìn)行測(cè)定，原理是基于未成熟粒細(xì)胞膜上的脂質(zhì)成分較成熟粒細(xì)胞少［7］，與硫化氨基酸結(jié)合的量多于較成熟的細(xì)胞、且對(duì)溶血?jiǎng)┯械挚棺饔?。?dāng)加入溶血?jiǎng)r(shí)，成熟的粒細(xì)胞被溶解，只留下幼稚細(xì)胞得以計(jì)數(shù)。上述鏡檢未檢測(cè)到陽(yáng)性，可能是因?yàn)闄C(jī)體出現(xiàn)了炎性反應(yīng)，使成熟粒細(xì)胞膜成分發(fā)生改變導(dǎo)致儀器的誤報(bào)警［8］。有些標(biāo)本儀器提示有未成熟粒細(xì)胞而顯微鏡結(jié)果為中幼粒細(xì)胞0.005，晚幼粒細(xì)胞0.01等，均未能達(dá)到鏡檢陽(yáng)性的標(biāo)準(zhǔn)，但已接近臨界值。有些標(biāo)本提示單核細(xì)胞增加而顯微鏡結(jié)果為0.10～0.14，均未能達(dá)到鏡檢陽(yáng)性的標(biāo)準(zhǔn)，但已接近臨界值。這種情況與儀器本身設(shè)計(jì)的靈敏度有關(guān)，而且與實(shí)驗(yàn)人員識(shí)別血細(xì)胞的能力有關(guān)，大家可以通過(guò)擴(kuò)大檢測(cè)樣本量和加強(qiáng)檢驗(yàn)人員的培訓(xùn)來(lái)減少人工鏡檢的差異。

表3還顯示，本室設(shè)定的顯微鏡復(fù)檢標(biāo)準(zhǔn)的特異度為81.16%，特異度不是很理想的原因可能與標(biāo)本例數(shù)不足等因素有關(guān)，也可能與實(shí)驗(yàn)室設(shè)置儀器的參數(shù)有關(guān)。例如，該機(jī)設(shè)置提示閾值較低，以增高提示的靈敏度，減少漏掉異常細(xì)胞的機(jī)會(huì)。儀器這樣設(shè)置也同時(shí)會(huì)造成相應(yīng)的特異度較低。

綜上所述，XE－2100全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀尚不能完全代替人工顯微鏡對(duì)各類(lèi)血細(xì)胞（特別是骨髓細(xì)胞、異常細(xì)胞等）的識(shí)別和分類(lèi)檢查，為了保證血液分析儀檢測(cè)結(jié)果的真實(shí)性和提供臨床診斷價(jià)值，面對(duì)儀器報(bào)警信號(hào)，都應(yīng)嚴(yán)格按照復(fù)檢規(guī)則進(jìn)行顯微鏡復(fù)檢。同時(shí)，也要注意提高臨床技術(shù)人員識(shí)別血細(xì)胞的能力，學(xué)會(huì)綜合分析各種干擾因素，為臨床提供全面、準(zhǔn)確可靠的檢驗(yàn)報(bào)告。

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