中華補(bǔ)血草多酚提取物對自由基的清除能力

陳炳華，李 均，郭巧茹，陳鶯鶯

(福建師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，福建福州350108)

中華補(bǔ)血草〔Limonium sinense(Girard)Kuntze〕是白花丹科(Plumbaginaceae)多年生泌鹽草本植物，喜生于鹽漬化的低洼濕地上［1］，廣泛分布于福建惠安、晉江、詔安、廈門以及臺灣金門等地的沿海灘涂，野生資源蘊(yùn)藏量大。中華補(bǔ)血草根或全草入藥，根具有健脾補(bǔ)血、活血止血和調(diào)經(jīng)之功效，用于治療感冒、失血和血熱月經(jīng)過多等癥［1－2］。

中華補(bǔ)血草所含的化學(xué)成分十分豐富，含水溶性多糖、鞣質(zhì)及黃酮類等多種活性成分。郭洪祝等［3］從其地上部分分得4種黃酮醇類成分：楊梅素－3－O－β－D－葡萄糖苷、楊梅素－3－O－α－L－鼠李糖苷、槲皮素－3－O－α－L－鼠李糖苷和槲皮素；Lin等［2，4］從中華補(bǔ)血草的地上部分和根部獲得20余種酚性成分，主要有3－黃烷酮、(－)表沒食子酸兒茶素和3－O－沒食子酸酯等。

Chaung等［5］考察了中華補(bǔ)血草根的水提物及葉醇提物的三氯甲烷部分抗大鼠肝損傷的作用，發(fā)現(xiàn)中華補(bǔ)血草具有保肝、降酶作用。Tang等［6］、湯新慧等［7］、Tang等［8］分別研究了中華補(bǔ)血草根提取物(LSE)對小鼠急性肝損傷的防護(hù)作用并探討其藥理機(jī)制，均發(fā)現(xiàn)LSE可顯著對抗人工誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷，其機(jī)制可能與其保護(hù)肝細(xì)胞線粒體、抑制細(xì)胞凋亡有關(guān)；Lin等［4］的研究結(jié)果顯示：從中華補(bǔ)血草根乙醇提取物中分離得到的10種黃酮類化合物均能抑制HSV－1病毒在Vero(綠猴腎細(xì)胞)中的復(fù)制，其中samarangenin B和(－)－epigallocatechin 3－O－gallate的抑制能力最強(qiáng)，比陽性對照無環(huán)鳥昔(acydovir)具有更高的抑制活性；李均等［9］的研究結(jié)果也證實(shí)中華補(bǔ)血草根提取物具有較強(qiáng)的抗氧化活性?？梢?，中華補(bǔ)血草的藥理活性主要有抗病毒、抗腫瘤、抗氧化及對小鼠肝細(xì)胞損傷的保護(hù)作用等，有關(guān)中華補(bǔ)血草不同形態(tài)學(xué)部位(根、根莖、葉和花)自由基清除能力的比較研究目前尚未見報道。

作者采用超聲波輔助浸提－大孔樹脂吸附法分別從中華補(bǔ)血草的根、根莖、葉及花中提取酚性組分，并測定其對DPPH·、·OH和O－·2的清除效果，旨在了解中華補(bǔ)血草全草的抗氧化活性，為該種的進(jìn)一步開發(fā)利用提供依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 材料

供試中華補(bǔ)血草全草采自福建惠安崇武鎮(zhèn)的沙灘濕地，經(jīng)福建師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院劉劍秋教授鑒定。植株洗凈后分成根、根莖、葉及花(含花和花莖等部分)4個部位，分別經(jīng)50℃烘干、粉碎后過60目篩，于4℃保存、備用。

1.2 試劑和儀器

所用試劑：二苯基苦味?；诫?1，1－diphenyl－2-picrylhydrazyl，DPPH·)、羅丹明B(rhodamine B)和Folin－酚均購自美國 Sigma公司；吩嗪硫酸甲酯(phenazin methosulfate，PMS)為美國Fluka公司產(chǎn)品；還原性輔酶Ⅱ鈉鹽(reducedβ－nicotinamide adenine dinucleotide，NADH)購自美國 Roche Diagnostics公司；硝基四氮唑藍(lán)(nitroblue tetrazolium，NBT)購自美國Amresco公司；蘆丁購自中國藥品生物制品檢定所(批號：100080－200306，純度91.7％)；2，6－二叔丁基－4－甲基苯酚(BHT)和單寧酸等均購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

所用儀器：SynergyHT多功能酶標(biāo)儀(美國Bio－Tek公司)、F－4600型熒光分光光度計(日本日立公司)和Ultra－spec2100 pro紫外可見光光度計(美國Amersham Biosciences公司)等。

1.3 方法

1.3.1 多酚提取物的制備 取上述根、根莖、葉(預(yù)先用石油醚脫脂)和花的粉末樣品適量，以體積分?jǐn)?shù)45％乙醇為提取劑，采用超聲波輔助浸提－大孔樹脂吸附法分別制備多酚提取物，具體操作參照文獻(xiàn)［10］。提取物貯藏于－20℃冰箱中備用。

1.3.2 提取物中各組分的含量測定 總酚含量采用Folin－Ciocalteu試劑比色法［10］進(jìn)行測定，以單寧酸為標(biāo)準(zhǔn)品，根據(jù)單寧酸回歸方程y=3.969 3x+0.018 0 (y為吸光度，x為單寧酸質(zhì)量濃度，R2=0.999 1)計算樣品中多酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)。原花色素含量采用硫酸－香草醛比色法［11］進(jìn)行測定，以兒茶素為標(biāo)準(zhǔn)品，根據(jù)兒茶素回歸方程y=9.484 0x+0.009 5(y為吸光度，x為兒茶素質(zhì)量濃度，R2=0.998 9)計算樣品中原花色素質(zhì)量分?jǐn)?shù)。黃烷醇含量采用DMACA法［12］進(jìn)行測定，以兒茶素為標(biāo)準(zhǔn)品，根據(jù)兒茶素回歸方程y= 64.037 0x+0.023 3(y為吸光度，x為兒茶素質(zhì)量濃度，R2=0.999 8)計算樣品中黃烷醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)。總黃酮含量采用AlCl3顯色法［13］進(jìn)行測定，以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品，根據(jù)蘆丁回歸方程y=3.112 9x－0.012 8(y為吸光度，x為蘆丁質(zhì)量濃度，R2=0.999 8)計算樣品中總黃酮質(zhì)量分?jǐn)?shù)。每個樣品均設(shè)4次重復(fù)。

1.3.3 對自由基清除能力的測定

1.3.3.1 對DPPH·清除能力的測定 DPPH·動力學(xué)曲線的測定采用酶標(biāo)儀法，參照Fukumoto等［14］的方法并略加改進(jìn)。以體積分?jǐn)?shù)80％甲醇為溶劑，將不同部位多酚提取物配制成質(zhì)量濃度0.012 5～0.2 g·L－1的供試樣液。在96孔酶標(biāo)板中加25μL供試樣液和150μmol·L－1DPPH·溶液(用體積分?jǐn)?shù)80％甲醇配制)200μL，對照則加入200μLDPPH·溶液和25μL體積分?jǐn)?shù)80％甲醇，空白則加入200μL體積分?jǐn)?shù)80％甲醇和25μL供試樣液，置于酶標(biāo)儀中振動30 s，37℃保溫60 min，期間每隔2.5 min于520 nm波長下讀取吸光度。以質(zhì)量濃度0.012 5～0.2 g·L－1的BHT和蘆丁作陽性對照。每個樣品設(shè)4次重復(fù)。根據(jù)公式計算DPPH·清除率：DPPH·清除率=〔1－(As－Ab)/Ac〕×100％。式中：Ac為空白的吸光度；Ab為對照的吸光度；As為樣液的吸光度。

1.3.3.2 對·OH清除能力的測定 參照 Liang等［15］的方法進(jìn)行測定。用高純水將上述不同部位多酚提取物配制成質(zhì)量濃度0.02～0.2 g·L－1的供試樣液，依次取供試樣液0.1 mL、0.02 mol·L－1HCl－NaAc緩沖液(pH 4.95)1 mL、5.02 mmol·L－1FeSO40.1 mL、20 mmol·L－1KI 0.2 mL、0.1 mmol·L－1羅丹明B 0.6 mL、高純水2.85 mL和43.2 mmol·L－1H2O250μL，快速搖勻，室溫靜置5 min后，在激發(fā)波長358 nm下同步掃描其熒光發(fā)射光譜，記錄波長575 nm處的熒光強(qiáng)度Fs；空白管以0.1 mL高純水代替供試樣液，測得熒光強(qiáng)度F0；對照管分別以0.1 mL和50μL高純水代替供試樣液和H2O2，測得熒光強(qiáng)度F。以質(zhì)量濃度0.02～0.2 g·L－1的蘆丁作陽性對照。每個樣品均設(shè)4次重復(fù)。根據(jù)下述公式計算·OH清除率：·OH清除率=〔(Fs－F0)/(F－F0)〕× 100％。

1.3.3.3 對O－·2清除能力的測定 參考Wang等［16］的方法并略加改進(jìn)。用Tris－HCl緩沖液(pH 8.0)將不同部位多酚提取物配制成質(zhì)量濃度0.025～0.2 g·L－1的供試樣液。反應(yīng)體系總體積為300μL，包括16 mmol·L－1Tris－HCl緩沖液(pH 8.0)100μL、468 μmol·L－1NADH 50μL、300μmol·L－1NBT 50μL、60μmol·L－1PMS 50μL以及50μL供試樣液，其中PMS最后加入體系以引發(fā)反應(yīng)；25℃溫浴反應(yīng)5 min后，用酶標(biāo)儀于560 nm處測定反應(yīng)液的吸光度As；空白管用等體積Tris－HCl緩沖液(pH 8.0)代替PMS，測得吸光度Ab；對照管用等體積Tris－HCl緩沖液(pH 8.0)代替樣液，測得吸光度Ac。以質(zhì)量濃度0.025～0.2 g·L－1的蘆丁作陽性對照。每個樣品均設(shè)4次重復(fù)。根據(jù)下述公式計算O－·2清除率：O－·2清除率=〔1－(As－Ab)/Ac〕×100％。

半數(shù)清除質(zhì)量濃度(ρSC50)的定義為：體系中50％自由基(DPPH·、·OH和O－·2)被清除時陽性對照或樣品的質(zhì)量濃度。

1.4 數(shù)據(jù)分析

采用SPSS 16.0統(tǒng)計分析軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和差異顯著性分析。

2 結(jié)果和分析

2.1 多酚提取物的得率及其組成分析

中華補(bǔ)血草根、根莖、葉和花4個部位的多酚提取物均為粉末狀，外觀呈棕紅色，易溶于水和醇水溶液，各部位多酚提取物的得率及其組成見表1。

由表1可知：中華補(bǔ)血草各部位多酚提取物得率為3.98％～12.42％，其中根多酚提取物的得率(12.42％)最高，顯著高于其他部位(P＜0.05)；根莖和葉多酚提取物的得率不及根多酚提取物得率的50％，且二者差異不顯著(P＞0.05)；而花多酚提取物的得率最低，僅為3.98％。

中華補(bǔ)血草各部位多酚提取物中總酚含量均在質(zhì)量分?jǐn)?shù)51％以上，其中根中的總酚含量最高，達(dá)61.60％，顯著高于其他部位；根莖中的總酚含量也較高；葉和花中的總酚含量相近，二者差異不顯著，但較前2個部位低。各部位多酚提取物中原花色素含量為質(zhì)量分?jǐn)?shù)5.62％～39.47％，不同部位間差異顯著，分別占相應(yīng)部位總酚含量的64.07％、36.71％、31.31％和10.65％。4個部位多酚提取物中黃烷醇含量的差異也達(dá)顯著水平，但其含量均處于較低水平，其中根中黃烷醇含量(12.46％)最高，但僅占總酚含量的20.23％。4個部位多酚提取物中總黃酮含量的差異達(dá)顯著水平；其中花中總黃酮含量最高，質(zhì)量分?jǐn)?shù)達(dá)35.97％，占總酚含量的68.15％；其余3個部位中總黃酮含量均很低，尤其是根中總黃酮含量僅占總酚含量的4.11％。由此可見，中華補(bǔ)血草根多酚提取物主要組成成分是原花色素類，花多酚提取物中主要組成成分為黃酮類。

表1 中華補(bǔ)血草不同部位多酚提取物的得率及其組成分析(±SD)1)Table 1 Analyses of yield and constituents in polyphenol extracts from different parts of Limonium sinense(Girard)Kuntze(±SD)1)

表1 中華補(bǔ)血草不同部位多酚提取物的得率及其組成分析(±SD)1)Table 1 Analyses of yield and constituents in polyphenol extracts from different parts of Limonium sinense(Girard)Kuntze(±SD)1)

1)同列中不同的小寫字母表示經(jīng)鄧肯氏新復(fù)極差檢驗(yàn)差異顯著(P＜0.05)Differentsmall letters in the same column indicate the significantdifferenceby Duncan’s new multiple range test(P＜0.05).

部位Part 得率/％ Yield多酚提取物中不同成分的含量/％ Content of different composition in polyphenol extracts總酚Total phenols 原花色素Proanthocyanidin 黃烷醇Flavanol 總黃酮Total flavonoids根Root 12.42±0.53a 61.60±0.73a 39.47±1.85a 12.46±0.23a 2.53±0.23d根莖Rhizome 5.98±0.46b 56.68±0.58b 20.81±0.86b 9.93±0.13b 3.29±0.10c葉Leaf 5.27±0.22b 51.87±0.63c 16.24±1.14c 7.41±0.07c 7.20±0.57b花Flower 3.98±0.38c 52.78±0.83c 5.62±0.27d 3.69±0.08d 35.97±0.17a

2.2 對DPPH·清除能力的比較

2.2.1 對DPPH·的反應(yīng)動力學(xué)分析 DPPH·是一種穩(wěn)定的有機(jī)自由基，廣泛用于評估天然活性物質(zhì)對自由基的清除能力。實(shí)際操作中，依據(jù)自由基清除劑的不同類型(快速、中速和慢速)［17］，可采用固定反應(yīng)時間法和動力學(xué)監(jiān)測法進(jìn)行測定，后者得到的結(jié)果能夠真實(shí)地反映樣品對DPPH·的清除能力［18］。為此，在研究過程中首先考察了中華補(bǔ)血草不同部位多酚提取物對DPPH·的反應(yīng)動力學(xué)，以獲得其達(dá)到平衡時所需的時間。不同部位多酚提取物(0.1 g·L－1)與DPPH·的反應(yīng)動力學(xué)曲線見圖1。由圖1可見：各部位多酚提取物與DPPH·的反應(yīng)動力學(xué)曲線相近，均表現(xiàn)為起始時體系中吸光度迅速降低，20～30 min吸光度降幅趨緩，30 min后吸光度趨于穩(wěn)定，說明反應(yīng)初期多酚提取物能迅速與 DPPH·結(jié)合生成 DPPHPheO，大量的DPPH·被消耗，表現(xiàn)出吸光度的迅速下降。這一結(jié)果與葡萄(Vitis vinifera L.)籽原花青素清除DPPH·的反應(yīng)動力學(xué)相似［17］。而在60min的反應(yīng)時間內(nèi)，空白管的吸光度則基本穩(wěn)定。因此，據(jù)此推斷，中華補(bǔ)血草不同部位總酚提取物與DPPH·反應(yīng)的時間應(yīng)設(shè)定為30 min。

2.2.2 對DPPH·的清除能力 中華補(bǔ)血草不同部位多酚提取物對DPPH·的清除率見表2。由表2可知：隨著質(zhì)量濃度的提高，中華補(bǔ)血草不同部位多酚提取物對DPPH·的清除率均逐漸增大。當(dāng)質(zhì)量濃度為0.1 g·L－1時，根、根莖和葉的多酚提取物對DPPH·的清除率均在92％以上；質(zhì)量濃度0.025、0.05和0.1 g·L－1的根、根莖和葉多酚提取物對DPPH·的清除率差異不顯著(P＞0.05)，但均顯著高于花多酚提取物(P＜0.05)，表明中華補(bǔ)血草根、根莖和葉多酚提取物對DPPH·具有較強(qiáng)的清除作用。

圖1 中華補(bǔ)血草不同部位多酚提取物(0.1 g·L－1)與DPPH·的反應(yīng)動力學(xué)曲線Fig.1 Reaction kinetic curves of polyphenol extracts(0.1 g·L－1) from different parts of Limonium sinense(Girard)Kuntze w ith DPPH·

表2 中華補(bǔ)血草不同部位多酚提取物對DPPH·的清除率(±SD)1)Table 2 Scavenging rate of polyphenol extracts from different parts of Limonium sinense(Girard)Kuntze to DPPH·(±SD)1)

表2 中華補(bǔ)血草不同部位多酚提取物對DPPH·的清除率(±SD)1)Table 2 Scavenging rate of polyphenol extracts from different parts of Limonium sinense(Girard)Kuntze to DPPH·(±SD)1)

部位Part不同質(zhì)量濃度多酚提取物對DPPH·的清除率/％ Scavenging rate of polyphenol extracts with different concentrations to DPPH· 0.012 5 g·L－1 0.025 g·L－1 0.05 g·L－1 0.1 g·L－1 0.2 g·L－1根Root 27.78±0.57a 39.53±2.83a 63.80±2.77a 93.86±0.39a 93.83±0.12a根莖Rhizome 26.11±2.04a 39.27±1.81a 62.63±1.11a 92.06±0.91a 93.70±0.22a葉Leaf 22.53±2.31b 38.42±0.87a 62.18±0.70a 92.88±0.38a 92.37±1.30a花Flower 21.93±0.74b 31.68±2.66b 53.39±2.19b 83.83±0.67b 93.61±0.09a

1)同列中不同的小寫字母表示經(jīng)鄧肯氏新復(fù)極差檢驗(yàn)差異顯著(P＜0.05)Differentsmall letters in the same column indicate the significantdifference by Duncan’s new multiple range test(P＜0.05).

2.3 對·OH清除能力的比較

羥自由基·OH是氧化能力最強(qiáng)、同時也是對機(jī)體造成損傷最大的一類自由基。中華補(bǔ)血草不同部位多酚提取物對·OH的清除率見表3。表3結(jié)果表明：隨質(zhì)量濃度的提高，各部位多酚提取物對·OH的清除率表現(xiàn)出先快速增大而后增幅減緩的趨勢。當(dāng)質(zhì)量濃度為0.02和0.04 g·L－1時，花多酚提取物對·OH的清除率均顯著高于其他部位(P＜0.05)；當(dāng)質(zhì)量濃度為0.08、0.1和0.2 g·L－1時，根、葉和花的多酚提取物對·OH的清除率顯著高于根莖的多酚提取物，但三者間差異不顯著?？傮w上看，花的多酚提取物對·OH的清除率最大，而根莖的多酚提取物對·OH的清除率最小。

2.4 對清除能力的比較

表3 中華補(bǔ)血草不同部位多酚提取物對·OH的清除率(±SD)1)Table 3 Scavenging rate of polyphenol extracts from different parts of Limonium sinense(Girard)Kuntze to·OH(±SD)1)

表3 中華補(bǔ)血草不同部位多酚提取物對·OH的清除率(±SD)1)Table 3 Scavenging rate of polyphenol extracts from different parts of Limonium sinense(Girard)Kuntze to·OH(±SD)1)

1)同列中不同的小寫字母表示經(jīng)鄧肯氏新復(fù)極差檢驗(yàn)差異顯著(P＜0.05)Differentsmall letters in the same column indicate the significantdifference by Duncan’s new multiple range test(P＜0.05).

部位Part不同質(zhì)量濃度多酚提取物對·OH的清除率/％ Scavenging rate of polyphenol extractswith different concentrations to·OH 0.02 g·L－1 0.04 g·L－1 0.08 g·L－1 0.1 g·L－1 0.2 g·L－1根Root 13.40±2.92b 27.12±2.54b 58.38±2.05a 65.87±4.40a 71.01±1.02a根莖Rhizome 14.21±1.24b 28.10±2.57b 46.22±2.80b 53.14±1.77b 63.53±2.07b葉Leaf 13.45±1.64b 21.83±3.83c 56.01±2.21a 65.23±0.34a 70.53±4.89a花Flower 27.02±1.37a 43.01±2.41a 62.02±3.86a 68.27±3.96a 69.71±3.04a

表4 中華補(bǔ)血草不同部位多酚提取物對O－· 2的清除率(±SD)1)Table 4 Scavenging rate of polyphenol extracts from different parts of Limonium sinense(Girard)Kuntze to O－· 2(±SD)1)

表4 中華補(bǔ)血草不同部位多酚提取物對O－· 2的清除率(±SD)1)Table 4 Scavenging rate of polyphenol extracts from different parts of Limonium sinense(Girard)Kuntze to O－· 2(±SD)1)

1)同列中不同的小寫字母表示經(jīng)鄧肯氏新復(fù)極差檢驗(yàn)差異顯著(P＜0.05)Differentsmall letters in the same column indicate the significantdifferenceby Duncan’s new multiple range test(P＜0.05).

部位Part不同質(zhì)量濃度多酚提取物對O－· 2的清除率/％ Scavenging rate of polyphenol extracts with different concentrations to O－· 2 0.025 g·L－1 0.05 g·L－1 0.1 g·L－1 0.2 g·L－1根Root 14.05±1.90b 33.19±1.92a 51.83±1.23b 71.62±1.92b根莖Rhizome 10.99±0.68bc 23.33±2.29b 43.40±2.65c 68.09±2.34c葉Leaf 9.94±1.74c 25.62±2.84b 46.39±1.53c 70.73±1.78bc花Flower 18.21±13.17a 36.70±2.60a 59.66±3.73a 76.39±0.97a

2.5 不同部位多酚提取物清除自由基的ρSC50比較

為更好地說明中華補(bǔ)血草不同部位多酚提取物對自由基清除能力的強(qiáng)弱，采用半數(shù)清除質(zhì)量濃度(ρSC50)這一指標(biāo)進(jìn)行比較分析，ρSC50越低，表明其清除自由基的能力越強(qiáng)［13－14］。中華補(bǔ)血草不同部位多酚提取物清除自由基的ρSC50見表5。

表5 中華補(bǔ)血草不同部位多酚提取物和陽性對照對自由基的半數(shù)清除質(zhì)量濃度(ρSC 50)(±SD)1)Table5 Half scavenging concentration(ρSC50)of polyphenol extracts from different parts of Limonium sinense(Girard)Kuntze and positive controls to radicals(±SD)1)

表5 中華補(bǔ)血草不同部位多酚提取物和陽性對照對自由基的半數(shù)清除質(zhì)量濃度(ρSC 50)(±SD)1)Table5 Half scavenging concentration(ρSC50)of polyphenol extracts from different parts of Limonium sinense(Girard)Kuntze and positive controls to radicals(±SD)1)

1)同列中不同的小寫字母表示經(jīng)鄧肯氏新復(fù)極差檢驗(yàn)差異顯著(P＜0.05）Different small letters in the same column indicate the significant difference by Duncan’snewmultiple range test(P＜0.05).

樣品Sample ρSC50/μg·L－1 DPPH· ·OH O－· 2蘆丁Rutin 67.40±4.45b 69.83±2.65c 78.03±1.76d BHT 74.25±2.51a － －根Root 38.52±1.62e 71.77±2.65c 92.75±3.30c根莖Rhizome 40.03±1.57de 90.35±1.22a 123.25±2.22a葉Leaf 41.82±0.56d 79.91±1.11b 112.25±4.99b花Flower 50.11±1.39c 53.51±3.19d 74.00±2.83d

表5的數(shù)據(jù)表明：在中華補(bǔ)血草不同部位的多酚提取物中，以根多酚提取物清除DPPH·的ρSC50值最低，為38.52μg·L－1，說明根多酚提取物對DPPH·的清除能力最強(qiáng)，其次為根莖和葉，而花多酚提取物的ρSC50值顯著高于其他部位(P＜0.05)，說明花多酚提取物對DPPH·的清除能力略差。依據(jù)ρSC50值，4個部位多酚提取物對DPPH·的清除能力由強(qiáng)至弱依次為根、根莖、葉、花。與陽性對照蘆丁和BHT相比，中華補(bǔ)血草不同部位多酚提取物清除DPPH·的ρSC50值均顯著小于蘆丁和BHT。

對一定質(zhì)量濃度范圍內(nèi)中華補(bǔ)血草不同部位多酚提取物對·OH的清除率曲線進(jìn)行非線性擬合，從擬合方程中求得ρSC50(表5)。由表5可知：中華補(bǔ)血草根、根莖、葉和花多酚提取物清除·OH的ρSC50值分別為71.77、90.35、79.91和53.51μg·L－1，差異達(dá)到顯著水平。4個部位多酚提取物對·OH的清除能力由強(qiáng)至弱依次為花、根、葉、根莖。與陽性對照蘆丁清除·OH的ρSC50(69.83μg·L－1)相比，中華補(bǔ)血草花多酚提取物對·OH的清除能力顯著強(qiáng)于蘆丁，根多酚提取物對·OH的清除能力則與蘆丁相當(dāng)，而其他部位多酚提取物對·OH的清除能力則比蘆丁弱。

3 討論和結(jié)論

中華補(bǔ)血草根、根莖、葉和花多酚提取物對不同的自由基表現(xiàn)出不同的清除能力。不同部位多酚提取物對有機(jī)自由基DPPH·均表現(xiàn)出很強(qiáng)的清除能力，其中根、根莖和葉多酚提取物的清除效果較為接近，依據(jù)半數(shù)清除質(zhì)量濃度(ρSC50)高低，4個部位多酚提取物對DPPH·的清除能力由強(qiáng)至弱依次排序?yàn)楦?、根莖、葉、花，且均顯著強(qiáng)于蘆丁和BHT的清除能力(P＜0.05)。中華補(bǔ)血草不同部位多酚提取物對2種活性氧自由基(·OH和)的清除率均隨著質(zhì)量濃度的提高而增大。由ρSC50可見：中華補(bǔ)血草4個部位多酚提取物對·OH和的清除能力由強(qiáng)至弱依次為花、根、葉、根莖，其中，花多酚提取物的清除活性比陽性對照蘆丁略強(qiáng)?？梢?，中華補(bǔ)血草不同部位多酚提取物是一種天然的自由基清除劑，能有效地清除有機(jī)自由基和活性氧自由基。

中華補(bǔ)血草根、根莖、葉和花的多酚提取物中總酚(以單寧酸計)質(zhì)量分?jǐn)?shù)均在51％以上，說明多酚類成分是中華補(bǔ)血草多酚提取物的主要組分。植物多酚是一類廣泛存在于植物各器官的重要次生代謝產(chǎn)物，結(jié)構(gòu)上的酚羥基使其具有較強(qiáng)的自由基清除活性和抗氧化活性［19］，但植物多酚對自由基清除活性的強(qiáng)弱與其特殊結(jié)構(gòu)密切相關(guān)。在類型多樣的多酚成分中，原花色素類和黃酮類是自由基清除活性較強(qiáng)的類型，這點(diǎn)已得到不少研究結(jié)果的證實(shí)。中華補(bǔ)血草多酚提取物中，原花色素占總酚的比例較大，尤其是在根多酚提取物中高達(dá)64.07％。根多酚提取物對DPPH·具有很強(qiáng)的清除能力，對·OH和O－·2活性氧自由基也具有較強(qiáng)的清除作用。李均等［9］的研究結(jié)果表明：中華補(bǔ)血草根提取物對大豆卵磷脂脂質(zhì)體氧化有顯著抑制作用，對CD－POV和MDA的96 h抑制率分別達(dá)79.03％和93.36％，比槲皮素略低，說明中華補(bǔ)血草根提取物也具有較強(qiáng)的抗脂質(zhì)過氧化作用。經(jīng)Sephadex LH－20純化后中華補(bǔ)血草根多酚提取物主要組成成分為低聚原花色素，可見，原花色素是根多酚提取物具有自由基清除能力的主要作用者(待發(fā)表)。有關(guān)中華補(bǔ)血草根多酚提取物中原花色素的具體化學(xué)結(jié)構(gòu)及其表征有待進(jìn)一步研究。

本文研究結(jié)果表明：中華補(bǔ)血草花的多酚提取物對·OH和O－·2均有很強(qiáng)的清除能力，ρSC50值分別為53.51和74.00μg·L－1?；ǘ喾犹崛∥镆渣S酮類成分為主，占總酚含量的68.15％?？梢?，花多酚提取物對自由基的清除作用與其中所含的大量黃酮類成分有關(guān)。

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