• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    不結(jié)球白菜根尖體細(xì)胞染色體制片及其二倍體和四倍體有絲分裂過程觀察

    2011-12-31 13:31:24鄭金雙張蜀寧孫成振王雅美
    關(guān)鍵詞:四倍體二倍體結(jié)球

    鄭金雙,張蜀寧,孫成振,王雅美

    不結(jié)球白菜(Brassica campestris ssp.chinensis Makino)又稱小白菜,北方稱油菜,為中國(guó)南方栽培面積最大、最大眾化的蔬菜作物。目前在蔬菜作物生產(chǎn)應(yīng)用中,多倍體僅見西瓜〔Citrullus lanatus(Thunb.) Mansf.〕[1]和不結(jié)球白菜[2],其遺傳性狀穩(wěn)定性、營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)以及農(nóng)藝性狀均優(yōu)于二倍體。對(duì)不結(jié)球白菜的生理代謝[3]、基因表達(dá)[4-5]等方面的研究已有報(bào)道,但細(xì)胞學(xué)方面的研究較為薄弱,主要原因在于其體細(xì)胞染色體小、制片難度大。目前僅見二倍體不結(jié)球白菜核型[6]及未減數(shù)2n配子的相關(guān)研究報(bào)道[7],關(guān)于二倍體不結(jié)球白菜及其同源四倍體細(xì)胞有絲分裂的觀察未見報(bào)道。

    在十字花科(Cruciferae)植物的體細(xì)胞染色體制片過程中,常用的預(yù)處理劑是8-羥基喹啉[8]。目前用于植物體細(xì)胞染色體制片的預(yù)處理劑有多種,因而,也有研究者將不同的預(yù)處理劑用于十字花科植物體細(xì)胞染色體的研究,并獲得了不同的預(yù)處理效果[9-11]。為了更有效地研究不結(jié)球白菜體細(xì)胞染色體形態(tài),作者以二倍體不結(jié)球白菜根尖為實(shí)驗(yàn)材料,對(duì)其體細(xì)胞染色體制片條件進(jìn)行了摸索;在此基礎(chǔ)上,對(duì)二倍體及四倍體不結(jié)球白菜根尖體細(xì)胞的有絲分裂過程進(jìn)行了觀察,以期為不結(jié)球白菜及十字花科等小染色體植物的遺傳進(jìn)化、變異與基因定位研究提供必要的細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

    1 材料和方法

    1.1 材料

    供試的二倍體不結(jié)球白菜品種‘10P15’及同源四倍體不結(jié)球白菜品種‘10P11’種子由南京農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝學(xué)院白菜課題組提供。

    1.2 方法

    1.2.1 染色體制片條件篩選 種子于25℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)催芽,待大部分根的長(zhǎng)度約1.5 cm時(shí)于4℃冰箱中過夜,取出后置于25℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)1~2 h,分別在根長(zhǎng)小于0.5 cm、0.5~1.0 cm、1.0~2.0 cm及大于2.0 cm時(shí)取根尖,根尖長(zhǎng)度1~2 mm,每個(gè)長(zhǎng)度等級(jí)的根各取10條,重復(fù)取樣3次,用20 mg·L-1放線菌酮溶液預(yù)處理2.0 h。

    取長(zhǎng)1.0~2.0 cm根的根尖,每處理50~80條,分別用2種方法進(jìn)行預(yù)處理。方法一:將根尖置于蒸餾水中,于4℃冰箱中用冰水混合物分別冰凍處理21、22、23和24 h;方法二:將根尖置于7種預(yù)處理劑中分別預(yù)處理,以0.5 h為1個(gè)時(shí)間梯度。其中,在2 mmol·L-18-羥基喹啉溶液或2 mmol·L-18-羥基喹啉與質(zhì)量濃度0.2 g·L-1秋水仙素等體積混合液中分別預(yù)處理1.5~3.5 h;在質(zhì)量濃度0.2 g·L-1秋水仙素溶液中分別預(yù)處理1.5~3.0 h;在飽和對(duì)二氯苯溶液中分別預(yù)處理1.0~3.0 h;在質(zhì)量濃度20或40 mg·L-1放線菌酮溶液或質(zhì)量濃度40 mg·L-1放線菌酮與2mmol·L-18-羥基喹啉等體積混合液中分別預(yù)處理2.0~3.5 h。

    經(jīng)上述預(yù)處理的根尖用卡諾固定液〔V(無水乙醇)∶V(冰乙酸)=3∶1〕固定24 h,用0.075 mol·L-1KCl前低滲30min,然后用1 mol·L-1HCl于60℃解離約8 min,用蒸餾水后低滲10 min,卡寶染液染色約7 min,烤片及壓片后,分別選10張具有代表性的制片,用Zeiss AX41顯微鏡于40倍鏡下觀察并在100倍鏡下拍照;選10個(gè)視野統(tǒng)計(jì)細(xì)胞總數(shù)和中期分裂相數(shù),并計(jì)算中期分裂相占細(xì)胞總數(shù)的百分率。

    1.2.2 體細(xì)胞染色體有絲分裂過程觀察 按上述條件催芽,待二倍體和四倍體不結(jié)球白菜根的長(zhǎng)度為1.0~2.0 cm時(shí)分別取長(zhǎng)度1~2 mm根尖,根據(jù)篩選出的制片條件,用質(zhì)量濃度20 mg·L-1放線菌酮溶液預(yù)處理2.5~3.0 h,換卡諾固定液固定24 h后,用0.075 mol·L-1KCl前低滲30min,然后用1 mol·L-1HCl于60℃解離約8 min,蒸餾水后低滲10 min,卡寶染液染色約7min,烤片及壓片后,用Zeiss AX41顯微鏡于40倍鏡下觀察并在100倍鏡下拍照。

    2 結(jié)果和分析

    2.1 不結(jié)球白菜體細(xì)胞染色體制片條件分析

    在不結(jié)球白菜根尖體細(xì)胞染色體制片過程中,分別選取長(zhǎng)度小于0.5 cm、0.5~1.0 cm、1.0~2.0 cm和大于2.0 cm的根取根尖,獲得的分裂相數(shù)目有明顯差異。取樣時(shí)根長(zhǎng)度為1.0~2.0 cm,獲得的分裂相數(shù)目相對(duì)較多,占細(xì)胞總數(shù)的64.75%,為根長(zhǎng)小于0.5 cm和大于2.0 cm處理組的1.38和98.11倍。因而,根長(zhǎng)度為1.0~2.0 cm對(duì)不結(jié)球白菜根尖體細(xì)胞染色體制片較為適宜。這一結(jié)果與張紅梅等[12]的研究結(jié)果一致。

    采用冰凍方法進(jìn)行預(yù)處理,不同處理時(shí)間對(duì)分裂相的數(shù)量有明顯影響。冰凍時(shí)間為22~23 h,獲得的分裂相數(shù)量相對(duì)較多,占細(xì)胞總數(shù)的30.20%,分別是冰凍處理21和24 h的1.52和1.55倍。

    圖1 用不同預(yù)處理劑預(yù)處理后二倍體不結(jié)球白菜根尖中期染色體形態(tài)Fig.1 Chromosome morphology of metaphase in root-tip of diploid of non-heading Chinese cabbage(Brassica campestris ssp.chinensis Makino)pretreated by different pretreatment agents

    采用7種不同預(yù)處理劑對(duì)二倍體不結(jié)球白菜根尖細(xì)胞進(jìn)行不同時(shí)間的預(yù)處理,對(duì)分裂相的數(shù)量及染色體形態(tài)有明顯的影響,各處理組中期染色體形態(tài)見圖1,中期分裂相百分率的統(tǒng)計(jì)結(jié)果見表1。用2 mmol·L-18-羥基喹啉預(yù)處理3.0~3.5 h,獲得的中期分裂相適合染色體核型分析;預(yù)處理3.0 h,獲得的的中期分裂相數(shù)目較多,占細(xì)胞總數(shù)的46.82%。用質(zhì)量濃度0.2 g·L-1秋水仙素預(yù)處理2.5 h,獲得的中期分裂相適合染色體核型分析;預(yù)處理1.5 h,獲得的中期分裂相適合染色體分帶研究;而預(yù)處理2.5 h,獲得的中期分裂相數(shù)目較多,占細(xì)胞總數(shù)的57.32%。用飽和對(duì)二氯苯預(yù)處理1.5~2.0 h,獲得的中期分裂相適合染色體核型分析;預(yù)處理1.0 h,獲得的中期分裂相數(shù)目較多,占細(xì)胞總數(shù)的40.84%。用20 mg·L-1放線菌酮溶液預(yù)處理2.5~3.0 h,獲得的中期分裂相適宜于染色體核型分析;預(yù)處理2.0 h,獲得的中期分裂相則適宜于染色體分帶研究;而預(yù)處理3.5 h,獲得的中期分裂相數(shù)目較多,占細(xì)胞總數(shù)的53.65%。用40 mg·L-1放線菌酮溶液進(jìn)行預(yù)處理,易導(dǎo)致染色體加倍,不利于分析。用40 mg·L-1放線菌酮與2 mmol·L-18-羥基喹啉等體積混合液預(yù)處理3 h,獲得的中期分裂相適宜于染色體核型分析;預(yù)處理1.5~2.5 h,獲得的中期分裂相適宜于染色體分帶研究;而預(yù)處理2.0 h,獲得的中期分裂相數(shù)目較多,占細(xì)胞總數(shù)的65.40%。用2 mmol·L-18-羥基喹啉與0.2 g·L-1秋水仙素等體積混合溶液預(yù)處理2.5 h,獲得的中期分裂相適宜于染色體核型分析;預(yù)處理1.5~2.0 h,獲得的中期分裂相適宜于染色體分帶研究;而預(yù)處理2.5 h,獲得的中期分裂相數(shù)目較多,占細(xì)胞總數(shù)的43.18%。

    表1 用不同預(yù)處理劑預(yù)處理后二倍體不結(jié)球白菜根尖中期分裂相的百分率Table1 Percentage of sp lit phase of metaphase in root-tip of dip loid of non-heading Chinese cabbage(Brassica campestris ssp.chinensis Makino)pretreated by different pretreatment agents

    2.2 二倍體和四倍體不結(jié)球白菜體細(xì)胞有絲分裂過程觀察

    二倍體和四倍體不結(jié)球白菜根尖體細(xì)胞有絲分裂過程的觀察結(jié)果見圖2。由圖2可見:二倍體和四倍體不結(jié)球白菜體細(xì)胞有絲分裂行為相似。在間期(圖2-1,13),染色質(zhì)沒有高度螺旋化形成染色體,而是以染色質(zhì)的形式進(jìn)行DNA單鏈復(fù)制;在前期,染色體螺旋化縮短變粗(圖2-2~4,14~16);在中期,染色體著絲點(diǎn)排列在赤道板上,紡錘絲附著在著絲點(diǎn)上,染色體濃縮變粗(圖2-5,6,17,18),顯示出不結(jié)球白菜特有的染色體數(shù)目和形態(tài);在后期,著絲點(diǎn)一分為二,每條染色體的2條姊妹染色單體分開并移向兩極,同一細(xì)胞內(nèi)的各條染色體都以基本相同的速率同步移向兩極(圖2-7~9,19~21);在末期,染色體到達(dá)細(xì)胞兩極(圖2-10,11,22),1個(gè)母細(xì)胞分裂成2個(gè)子細(xì)胞(圖2-12,23),染色體解螺旋,進(jìn)入下一次有絲分裂。

    由圖2還可見:四倍體不結(jié)球白菜體細(xì)胞在分裂過程中還會(huì)出現(xiàn)一些異?,F(xiàn)象。體細(xì)胞染色體配對(duì)成二價(jià)體及多價(jià)體(圖2-24中箭頭所示),同一細(xì)胞中2條或3條染色體部分配對(duì)成二價(jià)體或三價(jià)體;有些細(xì)胞有絲分裂后期出現(xiàn)染色體橋(圖2-25),并產(chǎn)生落后染色體(圖2-26);正常的有絲分裂過程中,后期染色體會(huì)分向兩極,而當(dāng)染色體異常分裂時(shí),后期染色體會(huì)被不均等的拉向二極、三極甚至四極(圖2-27~29);四倍體染色體數(shù)目為2n=40,但個(gè)別細(xì)胞中會(huì)出現(xiàn)著絲粒未分裂的現(xiàn)象,即內(nèi)源有絲分裂(圖2-30)。

    3 討論和結(jié)論

    對(duì)植物體細(xì)胞的染色體計(jì)數(shù)、核型分析、外源染色體鑒定(染色體分帶和染色體原位雜交等)、染色體的分組和分離,都需要有一定數(shù)量處于有絲分裂中期的細(xì)胞才易于進(jìn)行[13]。理論上,任何時(shí)間取樣都可以從正常生長(zhǎng)的根尖分生組織部位獲得中期分裂相[14]。但如果分裂相很少,就會(huì)阻礙進(jìn)一步的核型分析、分帶研究以及原位雜交等相關(guān)研究。李懋學(xué)等[15]認(rèn)為:對(duì)小染色體植物進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖儨靥幚砜稍黾臃至严?,預(yù)處理是染色體制備的關(guān)鍵步驟之一。本研究結(jié)果表明:選取長(zhǎng)度1.0~2.0 cm根的根尖,分裂相數(shù)目較多。采用冰凍預(yù)處理22~23 h,也能獲得一定量的分裂相,但均少于采用不同預(yù)處理劑獲得的分裂相數(shù)量。用2 mmol·L-18-羥基喹啉進(jìn)行預(yù)處理,染色體長(zhǎng)度較短,只適用于核型分析及計(jì)數(shù);用質(zhì)量濃度0.2 g·L-1秋水仙素、質(zhì)量濃度40 mg·L-1放線菌酮與2 mmol·L-18-羥基喹啉等體積混合溶液以及2 mmol·L-18-羥基喹啉與0.2 g·L-1秋水仙素等體積混合溶液進(jìn)行預(yù)處理,染色體相對(duì)較長(zhǎng),僅適用于染色體計(jì)數(shù)和核型分析;用飽和對(duì)二氯苯或質(zhì)量濃度20 mg·L-1放線菌酮進(jìn)行預(yù)處理,染色體較長(zhǎng),著絲點(diǎn)及隨體也最清晰,其中用質(zhì)量濃度20 mg·L-1放線菌酮進(jìn)行預(yù)處理,獲得的分裂相數(shù)目較多。根據(jù)比較結(jié)果,在進(jìn)行不結(jié)球白菜體細(xì)胞染色體有絲分裂觀察研究時(shí),取樣時(shí)根長(zhǎng)以1.0~2.0 cm為宜,最適宜的預(yù)處理方法是用質(zhì)量濃度20 mg·L-1放線菌酮浸泡2.0~3.0 h。

    同源四倍體不結(jié)球白菜有絲分裂行為與二倍體相似,但在四倍體的體細(xì)胞有絲分裂過程中存在異?,F(xiàn)象,如細(xì)胞分裂異常、內(nèi)源有絲分裂等;此外還偶見染色體數(shù)目異常,2n=24~67,多集中于2n=36~44,占細(xì)胞總數(shù)的12%,小于2n=36的占3%,大于2n=44的占0.4%,這種異常現(xiàn)象可能是體細(xì)胞分裂異常及內(nèi)源有絲分裂造成的。張紅梅等[16]認(rèn)為:四倍體有絲分裂異常可能是由于染色體加倍打破了二倍體中各種固有的平衡,造成內(nèi)源激素不協(xié)調(diào)和生理生化過程不正常等。一般認(rèn)為,端粒融合和染色體結(jié)構(gòu)異染色質(zhì)是促使體細(xì)胞染色體配對(duì)的主要原因[17]。Stebbins[18]認(rèn)為:同源四倍體染色體加倍造成特定基因位點(diǎn)純合,隱性基因控制性狀,以及不正常分離。而四倍體不結(jié)球白菜體細(xì)胞有絲分裂產(chǎn)生異?,F(xiàn)象的具體原因尚有待進(jìn)一步研究。

    [1]馮 午,劉春清.培育多倍體西瓜的初步報(bào)告[J].北京大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版,1962(2):303-308.

    [2]劉惠吉,曹壽椿,王 華,等.南農(nóng)矮腳黃四倍體不結(jié)球白菜新品種的選育[J].南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),1990,13(2):33-40.

    [3]Desclos M,Dubousset L,Etienne P,et al.A proteomic pr of iling approach to reveal a novel role of Brassica napus drought22 kD/ water-soluble chlorophyll-binding protein in young leaves during nitrogen remobilization induced by stressful conditions[J].Plant Physiology,2008,147:1830-1844.

    [4]Clau?K,von Roepenack-Lahaye E,B?ttcher C,et al.Overexpression of sinapine esterase BnSCE3 in oilseed rape seeds triggers global changes in seed metabolism[J].Plant Physiology,2011,155:1127-1145.

    [5]榮子龍,侯喜林,史公軍,等.不結(jié)球白菜晚抽薹BcFLC1基因克隆及表達(dá)分析[J].南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2010,38(6):23-27.

    [6]王業(yè)進(jìn),曹壽椿.不結(jié)球白菜核型的初步研究[J].南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),1988,11(3):133-135.

    [7]于旭紅,陳芳莉,張蜀寧,等.普通白菜未減數(shù)雄配子形成的細(xì)胞學(xué)機(jī)制[J].西北植物學(xué)報(bào),2010,30(9):1799-1803.

    [8]程雨貴,吳江生,華玉偉,等.蘿卜與甘藍(lán)屬間雜種基因組原位雜交分析[J].遺傳,2006,28(7):858-864.

    [9]張渝華,馬國(guó)昌.十字花科2個(gè)種的染色體數(shù)目[J].武漢植物學(xué)研究,2001,19(4):345-346.

    [10]崔 翠,何鳳發(fā).山葵的核型分析研究[J].西南大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版,2008,30(4):135-138.

    [11]任洪巖,庹忠云,吾買爾夏提·塔漢,等.新疆8種十字花科植物的染色體數(shù)目[J].新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2008,31(6):8-11.

    [12]張紅梅,張蜀寧,孔艷娥,等.青花菜染色體制片技術(shù)及核型分析[J].南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2009,32(4):33-36.

    [13]王耀勇,王秋英,王長(zhǎng)有,等.羥基脲(HU)-氟樂靈雙阻斷法誘導(dǎo)油菜根尖細(xì)胞有絲分裂中期同步化的研究[J].西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2010,19(11):75-78.

    [14]李懋學(xué).對(duì)二氯苯在植物染色體預(yù)處理中的應(yīng)用[J].遺傳,1980,2(6):30-32.

    [15]李懋學(xué),張贊平.作物染色體及其研究技術(shù)[M].北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社,1996:1-20.

    [16]張紅梅,張蜀寧,于旭紅,等.同源四倍體青花菜的核型分析[J].西北植物學(xué)報(bào),2010,30(1):63-67.

    [17]Novak F J.Chromosomal characteristics of long-term callus culture of Allium sativum L.[J].Cytologia,1981,46(2):371-379.

    [18]Stebbins G L.Chromosomal Evolution in Higher Plants[M].London:Edward Arnold,1971:126-128.

    猜你喜歡
    四倍體二倍體結(jié)球
    小果型西瓜四倍體誘變及其鑒定分析
    四倍體泡桐育苗高效管理技術(shù)綜述
    染色體加倍對(duì)黃毛草莓葉片形態(tài)的影響
    二倍體太子參叢生芽誘導(dǎo)研究
    不同春化和授粉前處理對(duì)不結(jié)球白菜抽薹及種子產(chǎn)量的影響
    四倍體巴戟天根的結(jié)構(gòu)與其蒽醌類化合物的關(guān)系
    中成藥(2016年4期)2016-05-17 06:07:54
    不結(jié)球白菜根腫病抗性鑒定方法的研究
    結(jié)球生菜的趨避栽培模式試驗(yàn)
    上海蔬菜(2015年2期)2015-12-26 05:03:37
    “寒富”蘋果與其同源四倍體耐鹽差異研究
    保護(hù)地結(jié)球生菜為啥不結(jié)球
    亚洲精品久久午夜乱码| 国产av国产精品国产| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 男女边摸边吃奶| 亚洲七黄色美女视频| 99国产综合亚洲精品| 免费高清在线观看日韩| 久久中文字幕一级| 午夜福利免费观看在线| 日本黄色日本黄色录像| 交换朋友夫妻互换小说| 男女免费视频国产| 十八禁人妻一区二区| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 国产日韩欧美在线精品| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 超碰成人久久| 99国产精品99久久久久| 高清在线国产一区| 最黄视频免费看| 欧美中文综合在线视频| 色综合欧美亚洲国产小说| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 一级片'在线观看视频| 制服人妻中文乱码| 啦啦啦视频在线资源免费观看| a级毛片黄视频| 纯流量卡能插随身wifi吗| 午夜福利一区二区在线看| 免费看a级黄色片| 欧美在线黄色| 大型黄色视频在线免费观看| 成人av一区二区三区在线看| 手机成人av网站| 国产精品一区二区在线不卡| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 色播在线永久视频| 国产精品久久久久成人av| 欧美久久黑人一区二区| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 精品欧美一区二区三区在线| 国产精品免费大片| 亚洲欧洲日产国产| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 国产亚洲欧美精品永久| 亚洲成国产人片在线观看| 日韩大片免费观看网站| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 亚洲综合色网址| 国产成人av教育| 国产精品电影一区二区三区 | 丰满迷人的少妇在线观看| 99香蕉大伊视频| 国产欧美日韩一区二区精品| 日本vs欧美在线观看视频| 国产精品久久电影中文字幕 | 999精品在线视频| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 18禁观看日本| 99久久人妻综合| 精品人妻1区二区| 久热这里只有精品99| 日韩欧美一区视频在线观看| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 他把我摸到了高潮在线观看 | 大码成人一级视频| bbb黄色大片| 午夜成年电影在线免费观看| 国产99久久九九免费精品| 亚洲精品成人av观看孕妇| 国产高清激情床上av| 亚洲精品中文字幕一二三四区 | 少妇粗大呻吟视频| 在线观看人妻少妇| 久久婷婷成人综合色麻豆| 亚洲专区中文字幕在线| 黄色 视频免费看| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 成人永久免费在线观看视频 | tube8黄色片| 久久久久久人人人人人| 伦理电影免费视频| 一区在线观看完整版| 99riav亚洲国产免费| 欧美日韩成人在线一区二区| 在线看a的网站| 国产精品.久久久| 十八禁网站免费在线| 色94色欧美一区二区| 大香蕉久久成人网| 午夜久久久在线观看| 香蕉久久夜色| 一级黄色大片毛片| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 亚洲,欧美精品.| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 飞空精品影院首页| 在线观看免费高清a一片| 久久久精品区二区三区| 女同久久另类99精品国产91| av电影中文网址| 欧美日韩精品网址| 日本五十路高清| 日本精品一区二区三区蜜桃| 亚洲中文av在线| 露出奶头的视频| 国产成人av教育| 一级毛片精品| 在线观看免费视频日本深夜| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 男人舔女人的私密视频| 成人特级黄色片久久久久久久 | 99re6热这里在线精品视频| 亚洲国产欧美一区二区综合| 久久精品亚洲av国产电影网| 一夜夜www| 久久精品91无色码中文字幕| 色尼玛亚洲综合影院| 五月天丁香电影| 国产xxxxx性猛交| 久久久久久久精品吃奶| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 久久热在线av| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 欧美 日韩 精品 国产| 国产在线免费精品| 久久这里只有精品19| 91精品国产国语对白视频| 久久久久久久国产电影| 性高湖久久久久久久久免费观看| 一夜夜www| 欧美黄色淫秽网站| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 成人亚洲精品一区在线观看| 欧美乱妇无乱码| 久久午夜综合久久蜜桃| 久热爱精品视频在线9| 国产高清激情床上av| 69av精品久久久久久 | 人妻 亚洲 视频| 男女边摸边吃奶| 大码成人一级视频| 99久久99久久久精品蜜桃| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 国产又色又爽无遮挡免费看| 在线看a的网站| 久久久久视频综合| 老司机深夜福利视频在线观看| 无遮挡黄片免费观看| 亚洲七黄色美女视频| 欧美中文综合在线视频| 变态另类成人亚洲欧美熟女 | 99久久人妻综合| 捣出白浆h1v1| 国产精品久久久久久人妻精品电影 | 在线观看免费视频网站a站| 欧美激情极品国产一区二区三区| 久久免费观看电影| 精品久久蜜臀av无| 亚洲欧美一区二区三区久久| 男人舔女人的私密视频| 99国产综合亚洲精品| 亚洲国产欧美在线一区| 一本大道久久a久久精品| 国产日韩欧美亚洲二区| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 精品国产一区二区久久| 搡老乐熟女国产| 9热在线视频观看99| 日韩视频在线欧美| 交换朋友夫妻互换小说| 一级毛片电影观看| 一级黄色大片毛片| 亚洲男人天堂网一区| 亚洲av国产av综合av卡| 成人影院久久| 亚洲五月色婷婷综合| 亚洲成人免费电影在线观看| 男女床上黄色一级片免费看| 精品熟女少妇八av免费久了| 色播在线永久视频| 波多野结衣av一区二区av| 免费高清在线观看日韩| 亚洲伊人久久精品综合| 窝窝影院91人妻| 99国产极品粉嫩在线观看| 亚洲精品美女久久av网站| 午夜福利在线观看吧| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 天堂动漫精品| 操出白浆在线播放| 黑人欧美特级aaaaaa片| 欧美亚洲日本最大视频资源| 国产欧美亚洲国产| 亚洲人成电影免费在线| 精品少妇内射三级| av天堂在线播放| 天天添夜夜摸| 免费在线观看黄色视频的| 丁香六月欧美| 悠悠久久av| 国产成人精品在线电影| 亚洲免费av在线视频| 美女福利国产在线| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 国产成人精品无人区| 国产男女内射视频| 亚洲五月色婷婷综合| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 后天国语完整版免费观看| 国产精品一区二区免费欧美| 激情视频va一区二区三区| 欧美黑人精品巨大| 国产精品偷伦视频观看了| 丰满迷人的少妇在线观看| 欧美 日韩 精品 国产| av有码第一页| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 考比视频在线观看| a在线观看视频网站| 最新美女视频免费是黄的| 色综合婷婷激情| 成人国产一区最新在线观看| 性高湖久久久久久久久免费观看| 视频区图区小说| 精品久久蜜臀av无| 国产一区二区 视频在线| 757午夜福利合集在线观看| 久久久欧美国产精品| 后天国语完整版免费观看| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| avwww免费| 久久午夜亚洲精品久久| 一区二区三区国产精品乱码| 水蜜桃什么品种好| 欧美性长视频在线观看| 色视频在线一区二区三区| 国产精品亚洲av一区麻豆| 18在线观看网站| 亚洲性夜色夜夜综合| 免费在线观看完整版高清| 精品亚洲成国产av| 午夜激情av网站| 午夜日韩欧美国产| 国产人伦9x9x在线观看| 免费不卡黄色视频| 国产精品偷伦视频观看了| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 亚洲男人天堂网一区| 精品一区二区三卡| 男人舔女人的私密视频| 久久国产精品影院| 日韩免费高清中文字幕av| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| av又黄又爽大尺度在线免费看| 一区在线观看完整版| 亚洲黑人精品在线| 女性生殖器流出的白浆| 久久天堂一区二区三区四区| 色在线成人网| 另类精品久久| 老司机在亚洲福利影院| 在线观看舔阴道视频| 国产在线精品亚洲第一网站| 国产精品亚洲av一区麻豆| 操出白浆在线播放| 日韩大码丰满熟妇| 一夜夜www| 午夜福利免费观看在线| 国产精品免费一区二区三区在线 | 美女主播在线视频| 视频在线观看一区二区三区| 免费观看av网站的网址| 视频区欧美日本亚洲| a级片在线免费高清观看视频| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 好男人电影高清在线观看| 午夜两性在线视频| 下体分泌物呈黄色| 无限看片的www在线观看| 黄色毛片三级朝国网站| 久久国产精品人妻蜜桃| 高清av免费在线| e午夜精品久久久久久久| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 色精品久久人妻99蜜桃| 51午夜福利影视在线观看| 国产男女超爽视频在线观看| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 日韩欧美一区二区三区在线观看 | 国产片内射在线| 国产亚洲欧美精品永久| 久久精品国产99精品国产亚洲性色 | 亚洲精品乱久久久久久| 老司机午夜十八禁免费视频| 午夜精品久久久久久毛片777| 超色免费av| 中亚洲国语对白在线视频| 大型av网站在线播放| 一夜夜www| 18禁美女被吸乳视频| 极品教师在线免费播放| 亚洲av电影在线进入| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 天堂动漫精品| 一本一本久久a久久精品综合妖精| 少妇被粗大的猛进出69影院| 99re在线观看精品视频| 夫妻午夜视频| 欧美中文综合在线视频| 久久久国产一区二区| 午夜激情久久久久久久| 婷婷丁香在线五月| 午夜激情久久久久久久| 亚洲综合色网址| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 精品少妇内射三级| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 国产99久久九九免费精品| 亚洲 欧美一区二区三区| 窝窝影院91人妻| 黄色毛片三级朝国网站| 久久国产亚洲av麻豆专区| 午夜免费鲁丝| 久久青草综合色| 中文字幕精品免费在线观看视频| 国产精品免费一区二区三区在线 | 又紧又爽又黄一区二区| 免费在线观看日本一区| 黄色怎么调成土黄色| 中文字幕av电影在线播放| 成人精品一区二区免费| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 美国免费a级毛片| 老司机亚洲免费影院| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 亚洲精品一二三| 国产精品亚洲av一区麻豆| 国产精品亚洲一级av第二区| 99在线人妻在线中文字幕 | 色播在线永久视频| 国产亚洲av高清不卡| 一边摸一边做爽爽视频免费| 999精品在线视频| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 91成人精品电影| 男女无遮挡免费网站观看| 日韩欧美一区二区三区在线观看 | 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 成人永久免费在线观看视频 | 91国产中文字幕| 女同久久另类99精品国产91| 国产亚洲精品一区二区www | 久久天堂一区二区三区四区| 国产av又大| 国产97色在线日韩免费| 一二三四在线观看免费中文在| 国产欧美亚洲国产| 成年女人毛片免费观看观看9 | 欧美人与性动交α欧美软件| 国产欧美日韩一区二区三| 一区二区三区精品91| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 日韩精品免费视频一区二区三区| 美女主播在线视频| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 亚洲人成伊人成综合网2020| av免费在线观看网站| 国产精品九九99| 国产成人啪精品午夜网站| 国产视频一区二区在线看| 亚洲性夜色夜夜综合| 国产高清videossex| 99国产极品粉嫩在线观看| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 三上悠亚av全集在线观看| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 久久国产精品人妻蜜桃| 欧美av亚洲av综合av国产av| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 女性被躁到高潮视频| 国产三级黄色录像| 一级毛片电影观看| 91字幕亚洲| 又大又爽又粗| 黑人操中国人逼视频| 高清视频免费观看一区二区| 精品午夜福利视频在线观看一区 | 国产精品一区二区在线观看99| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 自线自在国产av| 中国美女看黄片| 一本综合久久免费| 欧美黄色片欧美黄色片| 女人精品久久久久毛片| 天堂俺去俺来也www色官网| 欧美激情高清一区二区三区| 国产成人av激情在线播放| 国产xxxxx性猛交| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 久久久久网色| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 免费av中文字幕在线| 变态另类成人亚洲欧美熟女 | 在线av久久热| 999久久久精品免费观看国产| 性色av乱码一区二区三区2| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 国产又色又爽无遮挡免费看| 国产一区二区在线观看av| 丰满饥渴人妻一区二区三| 69av精品久久久久久 | 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 亚洲专区中文字幕在线| 亚洲精品自拍成人| 搡老熟女国产l中国老女人| 宅男免费午夜| 成人三级做爰电影| 91字幕亚洲| 国产av又大| 又紧又爽又黄一区二区| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 男男h啪啪无遮挡| av欧美777| 99久久精品国产亚洲精品| 久久婷婷成人综合色麻豆| 日韩欧美三级三区| 两性夫妻黄色片| 一本综合久久免费| 一个人免费在线观看的高清视频| 亚洲精品av麻豆狂野| 国产精品免费一区二区三区在线 | 男女边摸边吃奶| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 在线观看人妻少妇| 欧美日韩福利视频一区二区| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 在线观看免费高清a一片| 国产精品免费一区二区三区在线 | 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 999久久久国产精品视频| 两性夫妻黄色片| 麻豆乱淫一区二区| 久久99一区二区三区| 丰满少妇做爰视频| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 精品一区二区三区av网在线观看 | 成人手机av| 亚洲av片天天在线观看| 日本黄色日本黄色录像| av天堂久久9| 男女无遮挡免费网站观看| 亚洲伊人久久精品综合| 亚洲中文日韩欧美视频| 国产在线观看jvid| 亚洲成a人片在线一区二区| 嫩草影视91久久| 一进一出抽搐动态| 飞空精品影院首页| 国产av又大| 超碰97精品在线观看| 黄色a级毛片大全视频| 欧美精品高潮呻吟av久久| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 男女边摸边吃奶| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 天天操日日干夜夜撸| 一区二区三区乱码不卡18| 亚洲人成77777在线视频| 精品高清国产在线一区| 国产在线视频一区二区| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 精品乱码久久久久久99久播| 亚洲精品国产色婷婷电影| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 人妻久久中文字幕网| 国产xxxxx性猛交| 日韩中文字幕视频在线看片| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 成年人黄色毛片网站| 精品一区二区三区视频在线观看免费 | 久久午夜综合久久蜜桃| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 啪啪无遮挡十八禁网站| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 国产在视频线精品| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 成人永久免费在线观看视频 | 一本久久精品| 久久国产精品大桥未久av| 色播在线永久视频| 成人亚洲精品一区在线观看| 一区二区三区国产精品乱码| 久久精品人人爽人人爽视色| 一本色道久久久久久精品综合| 欧美性长视频在线观看| 丁香欧美五月| 1024视频免费在线观看| 麻豆成人av在线观看| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 一区二区三区激情视频| 成人黄色视频免费在线看| 中文字幕制服av| 黄色片一级片一级黄色片| 亚洲精品在线观看二区| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 乱人伦中国视频| 成年女人毛片免费观看观看9 | 一级a爱视频在线免费观看| 又大又爽又粗| 国产视频一区二区在线看| 国产精品成人在线| 丝袜在线中文字幕| 精品国产一区二区久久| 99国产极品粉嫩在线观看| 成人国语在线视频| 一个人免费看片子| 国产男女内射视频| 亚洲成人国产一区在线观看| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 热re99久久国产66热| 极品教师在线免费播放| 免费日韩欧美在线观看| 黄色视频,在线免费观看| 国产精品久久久久成人av| 国产男女超爽视频在线观看| 一本综合久久免费| cao死你这个sao货| 国产精品98久久久久久宅男小说| 亚洲五月婷婷丁香| 国产高清视频在线播放一区| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 精品人妻1区二区| 亚洲avbb在线观看| 国产一卡二卡三卡精品| 一级毛片女人18水好多| 国产精品.久久久| 9191精品国产免费久久| 男女下面插进去视频免费观看| 又紧又爽又黄一区二区| 一区二区三区精品91| 成人国产一区最新在线观看| 久久久久国产一级毛片高清牌| 久热这里只有精品99| 国产人伦9x9x在线观看| 亚洲精品一二三| 国产在线精品亚洲第一网站| 精品人妻在线不人妻| 黄色a级毛片大全视频| videosex国产| netflix在线观看网站| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 精品熟女少妇八av免费久了| 变态另类成人亚洲欧美熟女 | 99re6热这里在线精品视频| 日日夜夜操网爽| 老司机影院毛片| 欧美国产精品va在线观看不卡| 五月开心婷婷网| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 一区二区三区精品91| 国产深夜福利视频在线观看| 大片电影免费在线观看免费| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 色综合婷婷激情| 一级片免费观看大全| 在线观看www视频免费| 女警被强在线播放| 日韩视频在线欧美| 欧美大码av| 视频区欧美日本亚洲| 欧美精品啪啪一区二区三区| 亚洲精品自拍成人| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 亚洲国产av影院在线观看| 国产亚洲精品第一综合不卡| 777米奇影视久久| 久久中文看片网| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 老司机福利观看| 深夜精品福利| 真人做人爱边吃奶动态| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 高清欧美精品videossex| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| av欧美777| 日本av手机在线免费观看| 欧美激情高清一区二区三区| 黄色成人免费大全| 后天国语完整版免费观看| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 极品人妻少妇av视频| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 99国产综合亚洲精品| 久久国产精品影院| 热99re8久久精品国产| 久久亚洲精品不卡| 午夜免费鲁丝| 黄色视频,在线免费观看| 午夜激情av网站| 久9热在线精品视频| 97在线人人人人妻| 欧美中文综合在线视频|