血府逐瘀湯對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化大鼠血脂及血管活性物質(zhì)的影響

耿兆輝，壽保棟，劉輝，楊永濱，任今今

（1.河北大學(xué)教務(wù)處，河北保定 071002；2.河北醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，河北石家莊 050017；3.河北大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院，河北保定 071000；4.河北大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，河北保定 071000）

血府逐瘀湯對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化大鼠血脂及血管活性物質(zhì)的影響

耿兆輝1，壽保棟2，劉輝3，楊永濱4，任今今4

（1.河北大學(xué)教務(wù)處，河北保定 071002；2.河北醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，河北石家莊 050017；3.河北大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院，河北保定 071000；4.河北大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，河北保定 071000）

通過(guò)觀察血府逐瘀湯對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化（atherosclerosis，AS）大鼠血脂及血管內(nèi)皮活性因子的影響，探討血府逐瘀湯抗動(dòng)脈粥樣硬化的機(jī)制.將40只SD大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組、治療組（血脂康組、血府逐瘀湯高劑量組、血府逐瘀湯低劑量組）.對(duì)照組給予正常飲食；模型組給予高脂飲食；治療組在高脂飲食基礎(chǔ)上分別給予血脂康，血府逐瘀湯高、低劑量.12周后光學(xué)顯微鏡觀察主動(dòng)脈粥樣斑塊形成情況，檢測(cè)血脂及測(cè)定血漿內(nèi)皮素（ET）和血管緊張素Ⅱ（AngⅡ）的含量.研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)：與模型組相比血府逐瘀湯高、低劑量組，血脂康組均能降低血清總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL－C），升高高密度脂蛋白（HDL－C）（P＜0.05），降低ET和AngⅡ（P＜0.05）.表明血府逐瘀湯能調(diào)節(jié)AS大鼠血脂的異常，降低血管內(nèi)皮活性因子水平，改善血管內(nèi)皮病變程度，保護(hù)血管內(nèi)皮，故可有效防治AS.

血府逐瘀湯；動(dòng)脈粥樣硬化；內(nèi)皮素；血管緊張素Ⅱ

血府逐瘀湯為活血化瘀代表方劑，此方在治療心絞痛、血脂異常、動(dòng)脈粥樣硬化等方面有一定的療效［1］.研究表明，該方具有降低血脂、保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞功能、降低血管內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子表達(dá)，抑制血小板黏附聚集、抑制SMC增生及相關(guān)基因的表達(dá)從而具有抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用［2－4］，且效果優(yōu)于其他的活血化瘀方［5］，但其保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞、防治AS的具體作用機(jī)制仍未能闡明.有研究報(bào)道桂枝湯或通心絡(luò)膠囊可以通過(guò)降低血清中內(nèi)皮素（ET）和血管緊張素Ⅱ（AngⅡ）等血管內(nèi)皮活性因子水平來(lái)防治AS［6－7］.但血府逐瘀湯有效防治AS的作用機(jī)制是否亦與其影響血漿中ET、AngⅡ的表達(dá)水平有關(guān)，至今尚未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道.本研究通過(guò)飼喂維生素D3、高脂飼料的方法制作大鼠AS模型，給予血府逐瘀湯干預(yù)后進(jìn)行主動(dòng)脈形態(tài)學(xué)變化觀察、血脂及血管內(nèi)皮活性因子的表達(dá)水平同步檢測(cè)等手段，探討該藥在保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞，有效防治AS方面的可能作用機(jī)制.

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物

雄性SD大鼠40只，體重（190±10）g，由河北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證編號(hào)909047.

1.2 藥品與試劑

維生素D3注射液由上海第九制藥廠生產(chǎn)，血脂康膠囊由北京北大維信生物科技有限公司生產(chǎn)，批號(hào)20081211，購(gòu)自保定市一笑堂藥店；膽固醇（分析純）、膽酸鈉購(gòu)于北京天根試劑公司，丙基硫氧嘧啶為上海復(fù)興制藥廠有限公司生產(chǎn).TC，TG，HDL－C，LDL－C試劑盒購(gòu)自北京中生生物科技股份有限公司.血府逐瘀湯按文獻(xiàn)［8］浸泡、煎煮、去渣濃縮至藥液質(zhì)量濃度為2 g／m L（含生藥），滅菌后4℃冷藏保存?zhèn)溆?高脂飼料所需白糖、豬油均為超市購(gòu)買.ET和AngⅡ試劑盒均購(gòu)自北京福瑞生物工程公司.采用放射免疫分析法檢測(cè)血漿中的ET和AngⅡ.

1.3 主要設(shè)備

H H·W 21型恒溫水浴箱（北京長(zhǎng)風(fēng)儀器儀表公司生產(chǎn)）；M 300半自動(dòng)生化分析儀（荷蘭威圖公司）；BMJ－1型包埋機(jī)（天津天利航空機(jī)電有限公司）；Qpj－1型切片機(jī)（天津天利航空機(jī)電有限公司）；TDL－5－A型低速臺(tái)式離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）；FT－630G型放射免疫分析儀（北京核儀器廠）.

論證會(huì)上，評(píng)審組專家聽(tīng)取了相關(guān)單位匯報(bào)國(guó)際院士谷項(xiàng)目基本情況、《濰坊國(guó)家農(nóng)業(yè)開(kāi)放發(fā)展綜合試驗(yàn)區(qū)國(guó)際院士谷項(xiàng)目籌備方案》、《國(guó)際院士谷項(xiàng)目概念規(guī)劃設(shè)計(jì)方案》，對(duì)國(guó)際院士谷項(xiàng)目方案十分認(rèn)同，給予了高度評(píng)價(jià)，并對(duì)項(xiàng)目規(guī)劃設(shè)計(jì)及功能布局提出了許多優(yōu)化建議。

1.4 動(dòng)物分組及模型復(fù)制

SD大鼠40只常規(guī)觀察1周，隨機(jī)分5組，每組8只，分別為對(duì)照組、模型組、血府逐瘀湯高劑量組、血府逐瘀湯低劑量組、血脂康組.正常對(duì)照組給予普通飼料，其余各組均飼喂高脂飼料（配方中煉制豬油的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%、膽固醇的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%、膽酸的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.35%、丙硫氧嘧啶的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%，基礎(chǔ)飼料的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為93.55%）.飼喂高脂飼料大鼠按70萬(wàn)單位VitD3／kg的總劑量分3天腹腔注射［9］，對(duì)照組給予等體積的生理鹽水腹腔注射.血府逐瘀湯低劑量組給予血府逐瘀湯混懸液12 g（6 mL）／（kg·d）灌胃；血府逐瘀湯高劑量組給予血府逐瘀湯混懸液24 g（12 m L）／（kg·d）灌胃；血脂康組給予血脂康混懸液0.12 g（4 m L）／（kg·d）灌胃；模型組給予每天灌胃蒸餾水（10 m L／（kg·d））.連續(xù)觀察12周.

1.5 標(biāo)本采集制備及指標(biāo)檢測(cè)

1）血脂檢測(cè).實(shí)驗(yàn)于第11周末進(jìn)行.實(shí)驗(yàn)大鼠禁食12 h（不禁水），用1 g／L的戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉.鈍性分離主動(dòng)脈用取血管取血，室溫下放置30 min后3000 r／min離心15 min，取血清上機(jī)檢測(cè)TC，TG，HDL－C，LDL－C，同時(shí)另取血經(jīng)肝素抗凝制備血漿，放射免疫法測(cè)定ET和AngⅡ含量.

2）病理形態(tài)學(xué)觀察.采血結(jié)束后，迅速分離升主動(dòng)脈至髂總動(dòng)脈分叉處并將其剪斷，冷鹽水灌洗除去血管內(nèi)血液，迅速置于質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的中性福爾馬林溶液中，固定24 h以上.取約0.5 cm胸主動(dòng)脈進(jìn)行固定、脫水、透明、包埋，制備橫切面石蠟切片，厚度約3μm，做HE染色觀察主動(dòng)脈的形態(tài)學(xué)改變.

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

所有數(shù)據(jù)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行分析，其中計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差±s）表示，多組間比較采用單因素設(shè)計(jì)的方差分析，組間比較采用q檢驗(yàn).

2 結(jié)果

2.1 血脂測(cè)定結(jié)果

實(shí)驗(yàn)后，各組血脂見(jiàn)表1.模型組血清TC，TG，LDL－C含量均較對(duì)照組顯著升高（P＜0.05），HDL－C顯著降低（P＜0.05）.血府逐瘀湯高、低劑量組，血脂康組TG，TC，LDL－C含量較模型組明顯降低（P＜0.05），HDL－C明顯升高（P＜0.05）；血府逐瘀湯高劑量組與血脂康組對(duì)比HDL－C明顯升高（P＜0.05）.

表1 不同組大鼠血脂含量的比較（±s）Tab.1 Lipid content of different comparison group（±s）

表1 不同組大鼠血脂含量的比較（±s）Tab.1 Lipid content of different comparison group（±s）

＊表示與對(duì)照組比較P＜0.05；＊＊表示與對(duì)照組比較P＜0.01；△表示與模型組比較P＜0.05；△△表示與模型組比較P＜0.05；＃表示與血脂康組比較P＜0.05.

組別劑量／（g·kg－1）n c（TG）／（mmol·L－1）c（TC）／（mmol·L－1）c（HDL－C）／（mmol·L－1）c（LDL－C）／（mmol·L－1）對(duì)照組—8 0.84±0.34 2.11±0.18 1.46±0.27 0.37±0.18模型組—8 1.27±0.34＊＊ 2.81±0.36＊＊1.04±0.28＊＊ 0.73±0.08＊＊血府逐瘀湯高劑量2.0 8 0.82±0.15 2.16±0.20 1.50±0.33＊△△＃ 0.46±0.18＊△血府逐瘀湯低劑量1.0 8 0.92±0.13 2.20±0.20 1.36±0.24＊△ 0.48±0.21＊△血脂康組0.3 8 0.86±0.12 2.17±0.14 1.35±1.03＊△ 0.42±0.23＊△

2.2 ET和AngⅡ測(cè)定結(jié)果

模型組與正常組相比血漿ET和AngⅡ含量均顯著升高（P＜0.01）；血府逐瘀湯高、低劑量組，血脂康組和模型組相比血漿ET和AngⅡ含量均顯著降低（P＜0.05），結(jié)果見(jiàn)表2.

表2 不同組大鼠血漿中ET和AngⅡ含量的比較（±s）Tab.2 Different groups in rat plasma levels of ET and AngⅡcomparison of（±s）

表2 不同組大鼠血漿中ET和AngⅡ含量的比較（±s）Tab.2 Different groups in rat plasma levels of ET and AngⅡcomparison of（±s）

＊表示與對(duì)照組比較P＜0.05；＊＊表示與對(duì)照組比較P＜0.01；△表示與模型組比較P＜0.05；△△表示與模型組比較P＜0.01；＃表示與血脂康組比較P＜0.05.

組別劑量／（g·kg－1）nρ（ET）／（pg·m L－1）ρ（AngⅡ）／（pg·m L－1）對(duì)照組—8 98.84±17.67 91.25±21.43模型組—8 127.16±20.44＊＊132.45±30.74＊＊血府逐瘀湯高劑量2.0 8 102.20±19.18△△95.47±24.29△△血府逐瘀湯低劑量1.0 8 114.08a±16.77＊△＃108.71±26.71＊△＃血脂康組0.3 8 98.14±18.30△△94.28±25.16△△

2.3 病理形態(tài)學(xué)特征

對(duì)照組（圖1 a）主動(dòng)脈壁各層結(jié)構(gòu)正常，內(nèi)膜下未見(jiàn)有脂質(zhì)沉積，彈力纖維分布均勻；模型組（圖1 b）主動(dòng)脈壁內(nèi)膜增厚，內(nèi)彈力板斷裂，內(nèi)膜下可見(jiàn)由一層由平滑肌細(xì)胞、膠原纖維等構(gòu)成的纖維組織帽，其下方有脂質(zhì)沉積、不定形的壞死物質(zhì)內(nèi)有膽固醇結(jié)晶鈣鹽沉積，周邊可見(jiàn)少許炎細(xì)胞，中膜有不同程度的萎縮，證明AS造模成功；血脂康組（圖1 c）主動(dòng)脈內(nèi)膜稍有增厚，未見(jiàn)到有泡沫細(xì)胞，中膜平滑肌細(xì)胞排列較規(guī)整；血府逐瘀湯低劑量組（圖1 d）內(nèi)膜稍有增厚，內(nèi)膜下可見(jiàn)數(shù)量不等的泡沫細(xì)胞，符合AS癥的早期改變；血府逐瘀湯高劑量組（圖1 e）主動(dòng)脈內(nèi)膜增厚不明顯，內(nèi)膜未見(jiàn)有泡沫細(xì)胞，中膜平滑肌細(xì)胞排列較規(guī)整.

圖1 各組組織病理學(xué)改變（HE染色，40×10）Fig.1 Morphological changes of the groups（HE stain，40×10）

3 討論

目前，在我國(guó)各種疾病的發(fā)病率和死亡率中，心血管系統(tǒng)疾病占第1位，AS是心血管系統(tǒng)疾病的病變基礎(chǔ).它是由于動(dòng)脈內(nèi)膜的脂質(zhì)沉積、內(nèi)膜灶性纖維化、粥樣斑塊的形成，導(dǎo)致管壁變硬、管腔狹窄.雖然目前AS的確切機(jī)制不是很清楚，但大量基礎(chǔ)研究和流行病學(xué)調(diào)查表明高脂血癥為AS形成的重要因素之一［10］，如果伴隨血管內(nèi)皮細(xì)胞受損、通透性增強(qiáng)、壞死和脫失，過(guò)多的脂質(zhì)沉積在內(nèi)膜上，最終將導(dǎo)致血管的硬化［11］.目前西藥降血脂和抗動(dòng)脈粥樣硬化為主的治療方法，取得了一定的療效，但價(jià)格昂貴且持久服藥易產(chǎn)生較多的副作用.因此尋找經(jīng)濟(jì)實(shí)惠、副作用小的降脂及抗動(dòng)脈粥樣硬化的中藥，成為目前我國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)抗AS研究的重要課題.AS在傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中認(rèn)為屬于“血瘀”“癥結(jié)”“痹癥”的范疇，在治療中，《素問(wèn)·至真要大論》中認(rèn)為此類疾病應(yīng)采用“結(jié)者散之，留著攻之”，即用活血化瘀的方法治療.

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果中顯示模型組血清TC，TG，LDL－C含量均較對(duì)照組升高（P＜0.05），HDL－C降低（P＜0.05）出現(xiàn)了脂質(zhì)代謝紊亂；各治療組（血府逐瘀湯高、低劑量組，血脂康組）均能降低TG，TC，LDL－C，（P＜0.05），升高HDL－C（P＜0.05），且血府逐瘀湯高劑量組調(diào)節(jié)血脂的作用更明顯，升高HDL－C優(yōu)于血脂康組和低劑量組.這與以往的研究結(jié)果［12］基本相同，提示了血府逐瘀湯可以通過(guò)調(diào)節(jié)血脂代謝起到抗AS的作用.

血管內(nèi)皮細(xì)胞覆蓋血管內(nèi)表面，不僅維護(hù)著血管的完整性，保持血管壁正常結(jié)構(gòu)與通透性，維持正常的物質(zhì)交換；而且是一個(gè)十分活躍的代謝與內(nèi)分泌器官，有合成和釋放多種活性物質(zhì)的功能，對(duì)于AS的發(fā)生至關(guān)重要.ET是由血管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生的重要循環(huán)激素，正常時(shí)它維持了機(jī)體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定，但在某些疾病過(guò)程中會(huì)明顯增多，能促進(jìn)血小板聚集和平滑肌細(xì)胞增殖，容易造成嚴(yán)重的組織損傷并且促進(jìn)病情發(fā)展［13］.ET包括3個(gè)異構(gòu)體（ET－1，ET－2，ET－3）能夠與平滑肌和血管的靶細(xì)胞受體結(jié)合，促進(jìn)平滑肌和血管的的收縮還能導(dǎo)致疼痛的發(fā)生［14］，導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞的損傷而促進(jìn)AS的發(fā)生.

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示各治療組ET含量均顯著降低（P＜0.05），且血府逐瘀湯高劑量組和血脂康組作用強(qiáng)于血府逐瘀湯低劑量組，提示血府逐瘀湯可以通過(guò)降低ET表達(dá)水平，起到保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞，抗AS的作用.

相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)腎素－血管緊張素系統(tǒng)（RAS）參與了AS發(fā)病的過(guò)程［15－16］.AngⅡ是RAS系統(tǒng)中主要的活性肽產(chǎn)物，AS動(dòng)脈壁的內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、巨噬細(xì)胞均可以分泌AngⅡ，AngⅡ可以趨化巨噬細(xì)胞吞噬脂質(zhì)，氧化修飾低密度脂蛋白，同時(shí)AngⅡ可以引起細(xì)小血管收縮，血壓升高繼發(fā)性地引起AS.近年來(lái)發(fā)現(xiàn)AngⅡ還能通過(guò)產(chǎn)生氧自由基和影響纖溶功能，誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)及細(xì)胞凋亡等多方面參與AS的形成.

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示各治療組AngⅡ含量均顯著降低（P＜0.05），且血府逐瘀湯高劑量組和血脂康組作用強(qiáng)于血府逐瘀湯低劑量組，提示血府逐瘀湯可以通過(guò)降低AngⅡ的表達(dá)，起到抗AS的作用.

血府逐瘀湯是東漢末年由張仲景所創(chuàng)，收載于《傷寒雜病論》.處方由鱉甲膠、阿膠、蜂房（炒）、鼠婦蟲(chóng)、蜣螂、柴胡、黃芩、半夏（制）、黨參、干姜、白芍等23味藥物組成.其功效為活血化瘀，軟堅(jiān)散結(jié).現(xiàn)代藥理研究表明，本方藥物及配伍組合有保護(hù)血管內(nèi)皮的功能［2，17］，在防治AS方面有一定的療效［8］，但是機(jī)制不是十分清楚.本實(shí)驗(yàn)在光學(xué)顯微鏡下觀察血管壁的病理形態(tài)學(xué)變化證實(shí)模型成功.實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，血府逐瘀湯可影響血脂和血漿中ET和AngⅡ的表達(dá)，提示血府逐瘀湯有效防治AS的可能機(jī)制與其調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝，降低血漿中ET和AngⅡ表達(dá)水平，改善血管內(nèi)皮代謝，減輕病變程度有關(guān).這可能是其抗AS的分子機(jī)制之一.

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Effect of Xuefu Zhuyu Decoction on the Expression of Blood－lipid and Vasoactive Substances in the Rats with Atherosclerosis

GENG Zhao－h(huán)ui1，SHOU Bao－dong2，LIU Hui3，YANG Yong－bin4，REN Jin－jin4
（1.Office of Academic Affairs，Hebei University，Baoding 071002，China；2.College of Basic Medical Scicnce，Hebei Medical University，Shijiazhuang 050017，China；3.School of Public Health，Hebei University，Baoding 071000，China；4.College of Basic Medical Science，Hebei University，Baoding 071000，China）

To investigate the effect of Xuefu Zhuyu decoction on the expression of blood－lipid and vasoactive substances in the rats with atherosclerosis.Forty SD rats were randomly divided into control group，model group and treatment group（Xuezhikang group，Xuefu Zhuyu high－dose group，and Xuefu Zhuyu low dose group）.The control group was fed with normal diet，model group a high－fat diet，treatment groups the high fat diet mixed with Xuezhikang，High dose and low dose Xuefu Zhuyu decoction respectively.Themorphological changes of atheromatous plaque were observed 12 weeks later.The blood level of total cholesterol，triglyceride，low density lipoprotein，high－density lipoprotein，and endothelin（ET）angiotensinⅡ（AngⅡ）were tested at the same time.Compared with the model group，all the treatment groups could reduce the serum levels of total cholesterol，triglycerides，low density lipoprotein，ET and AngⅡ（P＜0.05），and increase high－density lipoprotein（P＜0.05）.It was found that Xuefu Zhuyu decoction could effectively regulate the serum level of lipidemia of AS rats，reduce the activity of vascular endothelial factors，and protecting the endothelium，and then prevent and cure atherosclerosis effectively.

Xuefu Zhuyu decoction；atherosclerosis；endothelins；angiotensin

R 543.5

A

1000－1565（2011）03－0304－05

2010－09－12

河北省衛(wèi)生廳醫(yī)學(xué)科學(xué)研究重點(diǎn)課題計(jì)劃（08166）；河北省科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目（102761101）；河北省中醫(yī)藥管理局科學(xué)技術(shù)研究課題（2008071）

耿兆輝（1973－），男，山東德州人，河北大學(xué)講師，主要從事醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)及教育管理研究.E－mail：gengzhaohui＠hbu.edu.cn

趙藏賞）