鹽酸貝那普利片生物等效性研究

劉 肅，江偉健

（1.廣州市藥品檢驗所，廣東 廣州 510610；2.廣州軍區(qū)廣州總醫(yī)院，廣東 廣州 510060）

鹽酸貝那普利（benazepril hydrochloride），化學名稱：3－［（1－乙氧羰基－3－苯基－（1S）－丙基）氨基］2，3，4，5－四氫－2－氧代－1H－1－（3S）苯并氮雜卓－1－乙酸鹽酸鹽。鹽酸貝那普利（商品名：洛汀新）是世界衛(wèi)生組織推薦的一線抗高血壓藥物，為血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制藥，在體內(nèi)轉(zhuǎn)換成貝那普利拉后生效。原藥抑制血管緊張素轉(zhuǎn)換酶活性的作用僅為后者的千分之一。本品特點為出現(xiàn)作用慢，但維持作用時間長，對心功能指標有良好改善作用，能改善充血性心力衰竭的臨床癥狀及運動能力。

王雪丁等［1－2］建立了靈敏度較高、準確度好的 HPLC方法，用外標法同時測定人血漿中貝那普利及其代謝物濃度，本實驗采用該分析方法，研究了24名健康受試者分別服用受試制劑與參比制劑后的原形與代謝物的藥動學特征，并對原形與代謝產(chǎn)物貝那普利拉的生物等效性進行評價。

1 材料與儀器

1.1 藥品、試劑

受試制劑：貝那普利片（廣州南新制藥有限公司，批號為03107，規(guī)格為10mg／片）；參比制劑：貝那普利片（商品名：洛汀新）（諾華公司，批號為1370628，規(guī)格為10mg／片）；貝那普利化學對照品：由Ranbaxy Laboratories Limited生產(chǎn)，廣州南新制藥有限公司提供，批號：1349122，純度：99.6%，用作標準對照品。貝那普利拉對照品：由Ranbaxy Laboratories Limited生產(chǎn)，廣州南新制藥有限公司提供，批號：1349122，純度：98.45%，用作標準對照品。甲醇、乙腈，色譜純，美國Ficher Scientific產(chǎn)品；其余試劑均為市售分析純?？瞻籽獫{，由廣州市血液中心提供。

1.2 儀器

高效液相色譜儀系統(tǒng)：1525Binary HPLC泵、717Plus自動進樣器、2487Dualλ吸收檢測器、B reeze色譜工作站，美國Waters公司產(chǎn)品；AE－260電子分析天平，梅特勒儀器（上海）有限公司產(chǎn)品；XW－80型旋渦混合器，上海醫(yī)科大學儀器廠產(chǎn)品；C8固相萃取柱，印度Analchem Pvt.Ltd產(chǎn)品。

2 方法

2.1 色譜條件

分析柱：Hypersil BDS C18柱（5μm，4.6mm×300mm）（大連依利特科學儀器有限公司產(chǎn)品）；流動相：0.02mol·L－1磷酸二氫鉀緩沖液－乙腈（7∶3）（調(diào)pH2.6）；流動相用直徑50mm、孔徑0.5μm的微孔膜過濾，使用前超聲脫氣；流量：1～6min，1mL／min；6～7min，1.3mL／min；7～23min，保持1.3mL／min；23～23.5min，1mL／min；柱溫：室溫；紫外檢測波長：237nm。

2.2 給藥及血樣采集

選擇24例年輕成年健康男性志愿者為受試者，年齡（23.4±2.4）歲，身高（172.0±5.1）cm，體重（62.4±6.6）kg，各受試者均簽署知情同意書。所有受試者均經(jīng)體檢證實無胃腸道疾病，心、肝、腎功能正常，且試驗前1個月內(nèi)未服用任何藥物。服藥前12h禁食，試驗期間禁煙酒、禁食含咖啡因的飲料、避免劇烈運動，服藥后禁食4h，統(tǒng)一給予低脂膳食。試驗期間沒有服用其它藥物。24例受試者自身對照，隨機交叉分成A、B兩組。

單次雙周期給藥，清晨7：30空腹口服藥物40mg，用250mL溫開水送服。第一輪A組服參比制劑，B組服受試制劑。于服藥前0h、服藥后0.16，0.33，0.5，0.67，0.83，1，1.25，1.5，1.75，2，2.5，3，4，6，8，12，24，36，48h時間點依次取血，每次5mL。將血樣品置于肝素化試管中，離心（4000rpm，10min），分離出血漿，－30℃避光保存至測定。第二輪于停藥14d后，A組服受試制劑，B服參比制劑。

2.3 預(yù)處理

取血漿樣本0.9mL于10mL離心管中，加入0.02mol／L磷酸二氫鉀緩沖液（pH 6）1mL酸化，渦旋30s，靜置10min；C8固相萃取小柱先以甲醇3mL、水3mL淋洗，以活化柱子，然后將混勻處理過的血漿樣本移入C8固相萃取小柱，用1mol／L1乙酸3mL、水3mL、甲醇2mL洗滌，最后用2%氨水甲醇2mL洗脫，收集洗脫液；于真空干燥箱干燥后，加甲醇－水（1∶1）200μL溶解，渦旋20s，移入進樣管，進樣量為50μL。

2.4 標準曲線制備

取10mL具塞離心管，分別加入空白血漿0.9mL，再精密加入貝那普利及貝那普利拉溶液適量，使之濃度分別為0.06，0.1，0.25，0.5，1，1.5，2μg／mL，按上述方法處理，記錄色譜圖。分別以已知貝那普利及貝那普利拉濃度為橫坐標，貝那普利及貝那普利拉色譜峰面積為縱坐標，繪得2條標準曲線，直線回歸得相關(guān)系數(shù)、回歸方程。

2.5 精密度實驗

在同日，用正常人空白血漿制成每1.0mL含貝那普利及貝那普利拉低、中、高3個濃度（0.1，0.5，1.5μg）的質(zhì)量控制樣品，每一濃度進5樣本，求得日內(nèi)相對標準差。另于不同工作日，對貝那普利及貝那普利拉0.1，0.5，1.5μg／mL的樣品，以上述方法處理，連續(xù)測定5天，得日間相對標準差。貝那普利拉日內(nèi)RSD≤8.5% ，日間RSD≤6.0%。

2.6 藥動學數(shù)據(jù)處理

采用DAS Ver2.0軟件計算兩者的藥動學參數(shù)。以實測值計算Cmax、Tmax；以末端相血藥濃度的對數(shù)值對時間進行回歸，求得斜率 Ke及t1／2；運用梯形法計算AUC0→t，進而求得試驗制劑的相對生物利用度。

3 結(jié)果

3.1 受試者血漿樣本貝那普利／貝那普利拉濃度測定結(jié)果

試驗過程中，有1例受試者因私人原因退出試驗，其余受試者順利完成試驗。采用上述方法檢測23例受試者血漿中貝那普利／貝那普利拉的濃度。每輪血漿樣品獲得后即進行分析，避免長期凍存。

3.2 藥動學參數(shù)

23名健康受試者口服單劑量40mg貝那普利片后的主要藥動學參數(shù)：對于原藥貝那普利，參比制劑與受試制劑的Cmax分別為（1346.9±442.9）ng／mL及（1302.5±340.6）ng／mL；Tmax分別為（0.4±0.1）h及（0.4±0.2）h；t1／2分別為（0.9±0.7）h及（0.7±0.3）h；AUC0→t分別為（928.7±235.4）ng／mL·h及（919.8±220.7）ng／mL·h；AUC0→∞分別為（978.6±246.8）ng／mL·h及（951.5±223.）ng／mL·h；MRT分別為（0.8±0.1）h及（0.8±0.2）h，受試制劑相對于參比制劑生物利用度F為（103.0±25.9）%。

對于代謝物貝那普利拉，參比制劑與受試制劑的Cmax分別為（799.5±181.6）ng／mL及（783.7±240.5）ng／mL；Tmax分別為（1.3±0.3）h及（1.2±0.4）h；t1／2分別為（4.1±1.6）h及（4.2±1.3）h；AUC0→t分別為（3621.8±940.0）ng／mL·h及（3503.7±1055.0）ng／mL·h；AUC0→∞分別為（4034.6±1059.6）ng／mL·h及（3846.1±1111.1）ng／mL·h；MRT分別為（4.3±0.9）h及（4.4±1.1）h；受試制劑相對于參比制劑的AUC0→t的比值為（97.6±19.6）%。

試驗制劑的相對生物利用度為（102.99±25.88）%。方差分析結(jié)果顯示，主要藥動學參數(shù)在2種制劑之間差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。

3.3 生物等效性分析

2000年版中華人民共和國藥典未要求對除Cmax、AUC0－t、AUC0→∞外的其它參數(shù)如 Tmax等進行統(tǒng)計分析。受試制劑與參比制劑的Cmax、AUC0－t、AUC0→∞經(jīng)對數(shù)轉(zhuǎn)換后等效界法雙向單側(cè)t檢驗進行生物等效性評價，等效標準Cmax為70%～143%，AUC0－t、AUC0→∞為80%～125%。

生物等效性檢驗顯示，對于原藥貝那普利，受試制劑與參比制劑各參數(shù)的90%可信限Cmax為88%～111.9%；AUC0－t為90.7%～110.0%；AUC0→∞為89.6%～107.6%，對于代謝物貝那普利拉，受試制劑與參比制劑各參數(shù)的90%可信限Cmax為 90.8% ～105.0%；AUC0－t為 90.3% ～104.4%；AUC0→∞為90.0%～104.9%，提示這兩種制劑生物等效。

4 討論

對于貝那普利，受試制劑相對于參比制劑的人體生物利用度為（103.0±25.9）%（n＝23），經(jīng)方差分析，顯示本試驗23例健康男性受試者交叉口服兩種鹽酸貝那普利片所得原藥主要藥代動力學參數(shù)之間無顯著性差異（P＞0.05）；但因貝那普利是前體藥物，需經(jīng)肝臟水解為二元酸貝那普利拉才能發(fā)揮強而持久的降壓作用，所以還需考察兩種制劑的活性代謝物貝那普利拉的藥動學參數(shù)。結(jié)果表明該代謝物的主要藥代動力學參數(shù)之間亦無顯著性差異（P＞0.05），受試制劑相對于參比制劑的AUC0→t的比值為（97.6±19.6）%。方差分析顯示，無論是原藥還是代謝物，受試制劑與參比制劑的Cmax、AUC0－t、AUC0→∞均無顯著性差異。提示受試制劑與參比制劑具有生物等效性。

參考有關(guān)文獻，確定試驗過程中受試者取血時間為服藥前（0h）、服藥后0.16，0.33，0.5，0.67，0.83，1，1.25，1.5，1.75，2，2.5，3，4，6，8，12，24，36，48h，實際測定結(jié)果反映36h貝那普利拉血藥濃度已低于檢測限，而12h絕大部分血漿樣本的濃度已低于相應(yīng)峰濃度的1／10，兩種制劑的平均t1／2分別為（4.2±1.3）h（受試制劑）及（4.1±1.6）h（參比制劑），采 血 點 24h 已 接 近 5 個t1／2，且 AUC0－t／AUC0→∞＞80%，表明取血時間和檢測限滿足生物利用度試驗的要求。

本試驗期間，受試者均未發(fā)生藥物不良反應(yīng)，除一名受試者因個人原因退出實驗，其余受試者試驗后體檢未見異常。

［1］王雪丁，黃麗惠，曾桂雄，等.HPLC法同時測定健康人血漿中貝那普利及其代謝物貝那普利拉的濃度［J］.中國臨床藥理學雜志，2005，21（4）.

［2］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典［S］.二部.2000，附XIX B：193－197.