丙肝抗體假陽性檢測中ELISA法應(yīng)用分析

葛魯偉

（吉林市紅十字中心血站，吉林省 吉林市132001）

酶聯(lián)免疫吸附法，即ELISA法，是臨床常用的酶免疫測定方法，現(xiàn)被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體的檢測中，經(jīng)過臨床證實，此方法能確定絕大部分的抗原抗體陽性或陰性結(jié)果，但是，也會出現(xiàn)不少的假陽性或者假陰性。這樣的情況，對臨床的確診或血液傳播疾病的篩查有很大的影響［1］。丙肝抗體假陽性，就是其中常見的結(jié)果不準確情況。為了更好地避免此種情況的發(fā)生，使酶聯(lián)免疫吸附法對丙肝抗體的檢驗更準確，我站對153例中31例經(jīng)酶聯(lián)免疫吸附法檢測為陽性，但經(jīng)過核酸擴增熒光分析法檢測為陰性的情況，進行綜合分析，報道如下。

1 資料與方法

153例病例為2009年1月—2010年2月進行丙肝抗體檢驗的患者血液標(biāo)本。經(jīng)酶聯(lián)免疫吸附法檢測結(jié)果為弱陽性，為確診是否為陽性，再次經(jīng)過核酸擴增熒光分析法進行檢測。

酶聯(lián)免疫吸附法采用全自動酶聯(lián)免疫檢測儀、自動酶標(biāo)洗板機，核酸擴增熒光分析法采用DA－7600核酸擴增實時熒光基因分析儀。標(biāo)本檢驗嚴格按照說明書進行。

2 結(jié)果

153例丙肝抗體ELISA檢測結(jié)果為弱陽性的標(biāo)本，經(jīng)核酸擴增熒光分析法檢測后，有132例結(jié)果仍為陽性，陽性率為86.27%；有21例標(biāo)本檢驗結(jié)果為陰性，證明，ELISA的假陽性率為13.73%。

3 假陽性結(jié)果分析

經(jīng)過對該21例假陽性結(jié)果的分析，我院總結(jié)其產(chǎn)生假陽性結(jié)果主要因為以下幾點：

3.1 標(biāo)本內(nèi)物質(zhì)干擾

標(biāo)本中含有的物質(zhì)，對酶聯(lián)免疫法的檢測結(jié)果可能起到相應(yīng)的影響。標(biāo)本中含有類風(fēng)濕性因子，尤其是在患有類風(fēng)濕性疾病和患有自身免疫性疾病的患者中，其類風(fēng)濕因子多為IGG，在進行丙肝抗體檢測時，IGG也可能與酶聯(lián)免疫吸附時的固相IGG、酶標(biāo)IGG發(fā)生結(jié)合［2］，進而增加了丙肝檢測的陽性情況，產(chǎn)生弱陽性。

高免疫球蛋白血癥的患者，由于血清中存在濃度相對較高的非特異性IGG［3］，可能會導(dǎo)致其與檢測時的固相表面相吸附，隨后再加入酶標(biāo)抗人IGG時，再與之結(jié)合，產(chǎn)生陽性結(jié)果。

標(biāo)本中如果存在過多的SOD，也可能會干擾檢測結(jié)果，使結(jié)果呈現(xiàn)陽性。有研究表明，ELISA法在檢測丙肝抗體陽性的標(biāo)本時，標(biāo)本S／CO值在1.03～3.30之間，容易出現(xiàn)假陽性［4］。

標(biāo)本在分離時，不能充分分離，或者在采集運送儲存過程中，被細菌污染，產(chǎn)生標(biāo)本溶血或者標(biāo)本凝固不全，都可能產(chǎn)生陽性結(jié)果。

3.2 檢驗過程操作因素

標(biāo)本在進行檢驗時，如果加樣時間過長，就可能使加樣后在恒溫箱的等待時間相對過長，使得檢測結(jié)果為陽性。

洗板是酶聯(lián)免疫吸附法中的重要部分，在自動洗板儀進行洗板時，如果洗板針被堵塞，抽吸不充分［5］，或者洗板機內(nèi)洗液量不足，也會引起假陽性。如果使用手工的洗板，洗板次數(shù)若太少，就可能造成殘留，使得出現(xiàn)陽性結(jié)果。

快速檢驗雖然能避免結(jié)果的假陽性，但是，如果檢驗速度過快，也可能導(dǎo)致假陽性結(jié)果，這主要是因為，血液在未完全凝固時，如進行強行的離心，可能導(dǎo)致血清中仍有纖維蛋白原的存在，使得在檢測時形成纖維蛋白塊，造成陽性結(jié)果出現(xiàn)。

3.3 其他

標(biāo)本的檢測試劑，也會對標(biāo)本的結(jié)果產(chǎn)生影響，使結(jié)果顯示為陽性或者陰性。因此，實驗室在選擇試劑時，需選擇高質(zhì)量的試劑，且不同試劑不可混用。

4 討論

丙型肝炎，是我國較為常見的一種肝炎疾病，其發(fā)病率僅次于乙型肝炎。很多患者在被丙型肝炎病毒感染后，都可能轉(zhuǎn)為慢性丙型肝炎。此病的臨床治療較為困難，且易轉(zhuǎn)為肝硬化或者肝癌。

通過酶聯(lián)免疫吸附法對丙型肝炎的抗HCV進行檢測，是臨床常用的檢測方法，尤其用于急性或者慢性的丙型肝炎患者進行檢測，可取得很好的效果。這種方法，是利用酶的高催化作用和放大作用，與標(biāo)本內(nèi)的特異性抗原－抗體反應(yīng)結(jié)合，以顯色的結(jié)果做判斷，進而檢測免疫結(jié)果的技術(shù)。此方法有很高的敏感性，而且操作簡單，價格低廉，且有較高的特異性。

如何避免這種假陽性結(jié)果的出現(xiàn)，使ELISA檢測結(jié)果準確率更高，需要涉及此環(huán)節(jié)的人員都必須進行注意。從采集標(biāo)本，到標(biāo)本的運輸，再到標(biāo)本進行檢測，都需要醫(yī)護人員的高度重視。在檢測前，充分了解患者的情況，在患者患有會影響檢測結(jié)果的疾病時，在檢驗申請單上進行標(biāo)注，以幫助實驗室檢驗人員對結(jié)果進行準確的判定。標(biāo)本運輸儲存時，不要劇烈震蕩，并使運送時間要盡量縮短，確保血液能在最短時間內(nèi)被檢測，以免出現(xiàn)長時間的常溫儲存干擾檢驗結(jié)果。在檢測時，嚴格按照檢測程序進行檢測，不可操之過急，更不能馬虎大意，操作要做到快中有穩(wěn)。同時，實驗室需每日進行質(zhì)控，檢驗前確保檢驗儀器的正常有效。如果檢驗結(jié)果在發(fā)生弱陽性等情況時，及時進行復(fù)檢。

［1］張志梅.ELISA法檢測丙肝抗體出現(xiàn)假陽性的分析［J］.中國社區(qū)醫(yī)師：醫(yī)學(xué)專業(yè)半月刊，2009，11（24）：187.

［2］陳景芬.酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測丙型肝炎病毒抗體影響因素分析［J］.檢驗醫(yī)學(xué)與臨床，2008，5（13）：821.

［3］楊志棟，和殿峰.ELISA法測丙肝抗體假陽性分析［J］.中國中醫(yī)藥現(xiàn)代遠程教育，2010，08（17）：263.

［4］劉艷輝.MEIA法與ELISA法檢測丙型肝炎病毒抗體結(jié)果比較［J］.傳染病信息，2009，22（4）：233－234.

［5］周東升，孫宏勛，盧亞敏，等.ELISA法檢測丙型肝炎抗體［J］.臨床合理用藥雜志，2009，2（19）：125.