馬蘭葉中總黃酮的提取

姜顯光，侯冬巖，回瑞華，刁全平

鞍山師范學院化學系，鞍山114005

馬蘭葉中總黃酮的提取

姜顯光*，侯冬巖，回瑞華，刁全平

鞍山師范學院化學系，鞍山114005

本論文以提取馬蘭葉中的總黃酮類化合物為目的，采用纖維素酶輔助熱浸提和熱浸提兩種方法進行提取，利用紫外分光光度法測得馬蘭葉中總黃酮類化合物為分別為17.14 mg/g和14.44 mg/g，纖維素酶輔助熱浸提方法的平均回收率為94.60%，相對標準偏差為5.56%。

馬蘭;總黃酮;熱浸提;纖維素酶;紫外分光光度法.

馬蘭(Kalimeris indica)為菊科多年生草本植物，別名魚鰍串、雞兒腸、田邊菊等，主產于江蘇、浙江、江西等地。馬蘭載于《本草拾遺》，具有清熱利濕、解毒消腫、涼血止血之功效。其資源特別豐富，民間把其作野菜食用，還常用于治肝和護肝，且療效顯著［1］。黃酮類化合物具有降低心肌耗氧量，使冠脈、腦血管流量增加，抗心律、軟化血管、降血糖、血脂等作用，同時它還是一種天然的抗氧化劑，具有清除人體中超氧離子自由基抗衰老，增加機體免疫力的生理活性作用［2］。為更好的開發(fā)利用馬蘭葉，本論文采用纖維素酶輔助熱浸提和熱浸提兩種方法提取馬蘭葉中的總黃酮，為其合理的開發(fā)利用提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 材料

馬蘭葉于2009年9月采自遼寧鞍山，標本存放于鞍山師范學院天然產物分析實驗室(標本編號: 20090901)。

1.2 主要試劑

蘆丁(中國藥品生物制品檢定所，含量92.5%)，NaNO2、Al(NO3)3、NaOH、無水乙醇(均為分析純)，純凈水。

1.3 主要儀器

TU-1201型紫外可見分光光度計(北京撲析通用儀器有限公司);RE52CS型旋轉蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠)。

1.4 提取方法

1.4.1 纖維素酶輔助熱浸提法

將馬蘭葉曬干，粉碎，過篩，稱取10.0 g馬蘭葉，置于索氏提取器中，用石油醚脫色1.5 h，過濾后將濾渣置于錐形瓶中，加入純凈水150 mL和纖維素酶，調pH在4～6之間，55℃水浴1.5 h，過濾，收集濾液，將濾渣置于錐形瓶中，浸提3次，每次用200 mL 60%乙醇在60℃條件下浸提1 h，合并四次濾液，蒸發(fā)溶劑，得黃酮浸膏，用60 mL石油醚分三次洗滌，棄掉石油醚，用800 mL 60%乙醇定容，待測。

1.4.2 熱浸提法

將馬蘭葉曬干，粉碎，過篩，稱取10.0 g馬蘭葉，置于索氏提取器中，用石油醚脫色1.5 h，過濾后將濾渣置于錐形瓶中，加入純凈水150 mL，55℃水浴1.5 h，過濾，收集濾液，將濾渣置于錐形瓶中，浸提3次，每次用200 mL 60%乙醇在60℃條件下浸提1 h，合并四次濾液，蒸發(fā)溶劑，得黃酮浸膏，用60 mL石油醚分三次洗滌，棄掉石油醚，用800 mL 60%乙醇定容，待測。

1.5 吸收波長的確定

移取一定量的標準品溶液、樣品溶液分別置于10 mL容量瓶中，各加60%乙醇2 mL，加5%亞硝酸鈉溶液0.4 mL，搖勻，靜置6 min，加10%硝酸鋁溶液0.4 mL，搖勻，靜置6 min，再加1 mol/L氫氧化鈉溶液4 mL，用60%乙醇定容，搖勻，靜置10 min。以5%亞硝酸鈉溶液0.4 mL、10%硝酸鋁溶液0.4 mL、1 mol/L氫氧化鈉溶液4 mL，用60%乙醇定容，得到的溶液作為參比溶液，在400～800 nm掃描，得到其吸收光譜，最大吸收波長為510 nm。

1.6 蘆丁標準溶液的配置

精密稱取蘆丁標準品0.0200 g，加適量60%乙醇溶解，置于100 mL容量瓶中，用60%乙醇定容，搖勻，備用。

1.7 標準曲線的繪制

準確吸取蘆丁標準品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL于10 mL容量瓶中，分別加60%乙醇2 mL，加5%亞硝酸鈉溶液0.4 mL，搖勻，靜置6 min，加10%硝酸鋁溶液0.4 mL，搖勻，靜置6 min，再加1 mol/L氫氧化鈉溶液4 mL，用60%乙醇定容，搖勻，靜置10 min。于510 nm測其吸光度。

以濃度(C)為橫坐標、吸光度(A)為縱坐標，繪制標準曲線，得其線性回歸方程為:A=0.0114C +0.0373，相關系數r=0.9992，對照品在10～60 μg/mL范圍內呈良好線性關系。可按標準曲線法進行定量分析。

2 實驗結果

2.1 方法精密度實驗

根據前面確定的測試條件，按1.4.1提取方法制備5個不同濃度的樣品溶液，在510 nm波長下測定吸光度9次，計算出濃度和平均值，求得其標準偏差及變異系數，結果列于表1。

2.2 加樣回收率實驗

稱取三份馬蘭葉樣品，在樣品中分別加入蘆丁標準品5 mg，再將樣品和標準品的混合物按1.4.1方法進行提取，結果見表2。

表2 方法回收率Table 2 Recovery of the method

2.3 穩(wěn)定性實驗

用于繪制吸收曲線相同的方法配制樣品進行穩(wěn)定性實驗，結果表明:樣品放置1 h，其吸光度值不變。

2.4 樣品分析

按1.4.1和1.4.2的實驗步驟，分別提取馬蘭葉中的黃酮，按1.5方法顯色，在510 nm測吸光度，通過線性回歸方程計算，得馬蘭葉中黃酮類化合物的含量為17.14 mg/g和14.44 mg/g。

3 結論與討論

本實驗以測得馬蘭葉中的總黃酮為指標，采用纖維素酶輔助熱浸提法和熱浸提兩種方法提取馬蘭葉中的總黃酮，利用紫外分光光度法檢測，測得黃酮含量分別為17.14 mg/g和14.44 mg/g，從結果可以看出，用纖維素酶處理后，黃酮的提取率提高了近20%。主要是利用酶反應所具有的高度專一性等特點，選擇相應的酶，將細胞壁的組成成分水解或降解，破壞細胞壁結構，使有效成分充分暴露出來，溶解、混懸或膠溶于溶劑中，從而達到提取細胞內有效成分的目的［3］。

本實驗按1.4.1提取方法，做了加樣回收率實驗和儀器精密度實驗，回收率為 91.09% ～ 100.99%，相對標準偏差為5.56%，儀器精密度實驗的相對標準偏差小于0.76%。

1 Lin BB(林彬彬)，Wang g(王剛)，liu JS(劉勁松)，et al.Studies on the chemical vonstituents of Kalimeris indica (L.)Sch-Bip.J Anhui Trad Chin Med Coll(安徽中醫(yī)學院學報)，2008，27(6):48-49.

2Hou DY(侯冬巖)，Hui RH(回瑞華)，Yang M(楊梅)，et al.Determination of total flavonoids and the antioxidation effect in NanguoPear.Food Sci(食品科學)，2005，26:193-196.

3 Wang Y(王邕)，Li HB(黎海彬)，Bai XF(白先放)，et al.Study on enzyme-solvent extraction process for flavonoid from grosvenor momordica.Food Sci＆Technol(食品科技)，2006，31(7):125-127.

Extraction of Total Flavonoids from Kalimeris indica Leaves

JIANG Xian-guang*，HOU Dong-yan，HUI Rui-hua，DIAO Quan-ping
Department of Chemistry，Anshan Normal University，Anshan，114005，China

To extract the total flavonoids in the Kalimeris indica leaves，the solvent extraction with cellulose enzyme as auxiliary agent and the traditional solvent extraction were compared.In the two extracts，contents of total flavonoids were 17.14 mg/g and 14.44 mg/g respectively by ultraviolet spectrophotometry.The average recovery of solvent extraction with cellulose enzyme as auxiliary agent was 94.60%，with RSD=5.56%.

Kalimeris indica;flavonoids;hot water extraction;cellulose enzyme;UV

1001-6880(2011)05-0967-03

2010-06-08 接受日期:2010-10-12

*通訊作者 E-mail:happyjxg@tom.com

TS201.2

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