甲基丁香酚微乳的制備及質(zhì)量評價

白 波，宋曉平，吳明明，付明哲

（西北農(nóng)林科技大學動物醫(yī)學院，陜西 楊凌712100）

甲基丁香酚（methyleugenol）屬苯丙素類化合物，主要存在于肉豆蔻、香茅和細辛等植物中，可作為桔小實蠅等農(nóng)業(yè)害蟲的引誘劑，是潛在的植物源殺蟲劑［1］。但甲基丁香酚不溶于水，目前尚缺乏適宜的藥物制劑。微乳（microemulsion）是由表面活性劑、助表面活性劑、油相及水相在一定比例自發(fā)形成的一種透明、低粘度、各向同性且熱力學穩(wěn)定的油水混合系統(tǒng)［2］。微乳粒徑小而均勻，可以提高脂溶性藥物的溶解度，并能提高藥物的生物利用度，是理想的新型藥物載體［3］。本試驗采用偽三元相圖法，進行甲基丁香酚微乳配方篩選、制備和穩(wěn)定性試驗，旨在為進一步開發(fā)利用提供科學依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 主要試劑和儀器 甲基丁香酚，齊爾普醫(yī)藥化工有限公司；油酸乙酯（EO），阿拉丁試劑有限公司；聚乙二醇400（PEG400）、吐溫－80（Tween－80），天津市博迪化工有限公司；辛酸葵酸甘油三酯（GTCC）、聚氧乙烯醚（40）氫化蓖麻油（RH40）、聚氧乙烯醚（35）蓖麻油（EL35），北京鳳禮精求商貿(mào)有限責任公司；JEM1230型透射電子顯微鏡，日本日立電子公司；Zetasizer Nano ZS型激光粒度分析儀，英國Malvern Instrument公司。

1.2 甲基丁香酚溶解性考察 量取EO、GTCC、霍霍巴油、液體石蠟、乙醇、異丙醇、1，2－丙二醇、丙三醇、PEG400、Tween－80、RH40、EL35 等 輔 料 各 1 mL，分別加甲基丁香酚1mL混合，3 500r/min離心1min［4］，未見分層為完全溶解。不能完全溶解時，繼續(xù)加輔料2～9mL或10～99mL。在1mL～不到10mL輔料中完全溶解為易溶，10mL～不到30mL輔料中完全溶解為溶解，30mL～不到100 mL輔料中完全溶解為略溶［5］。

1.3 空白微乳處方的篩選

1.3.1 油相的篩選 以Tween－80為表面活性劑、乙醇為助表面活性劑（表面活性劑與助表面活性劑的質(zhì)量比Km＝2∶1），混合表面活性劑（表面活性劑與助表面活性劑的合稱）與油相按9∶1、8∶2、7∶3、6∶4、5∶5、4∶6、3∶7、2∶8、1∶9混合，在室溫磁力攪拌下用蒸餾水滴定，觀察體系的變化，記錄臨界加水量［6－7］，用 Origin7.5軟件繪制偽三元相圖，選出微乳形成區(qū)域較大的油相。

1.3.2 表面活性劑的篩選 以“1.3.1”篩選出的油為油相，乙醇為助表面活性劑，Km＝2∶1，選擇“1.2”中對甲基丁香酚“易溶”和“溶解”的表面活性劑，按照“1.3.1”中的方法繪制偽三元相圖，選出微乳形成區(qū)域較大的表面活性劑。

1.3.3 助表面活性劑的篩選 以“1.3.1”篩選出的油為油相，“1.3.2”篩選出的表面活性劑為表面活性劑，Km＝2∶1，選擇“1.2”中對甲基丁香酚“易溶”和“溶解”的助表面活性劑，按照“1.3.1”中的方法繪制偽三元相圖，選出微乳形成區(qū)域較大的助表面活性劑。

1.4 甲基丁香酚微乳的制備及質(zhì)量評價

1.4.1 制備方法 根據(jù)“1.3”選出的輔料，以 Km＝2∶1、混合表面活性劑與油相的比例為9∶1，分別稱取表面活性劑24g、助表面活性劑12g，攪拌混勻，再加入油相4g，攪拌混勻，然后加入甲基丁香酚5g，充分攪拌溶解，再逐滴滴加蒸餾水，邊滴加邊攪拌，直至體系澄清。

1.4.2 質(zhì)量評價 （1）類型鑒定：取甲基丁香酚微乳2份，分別加入亞甲藍和蘇丹紅染料，如果亞甲藍的擴散速度快于蘇丹紅的擴散速度，則為O/W型微乳，反之為 W/O型。（2）形態(tài)觀察：甲基丁香酚微乳用去離子水稀釋，取1滴稀釋液滴在覆有支持膜的銅網(wǎng)上，自然晾干，再滴加2%磷鎢酸溶液于銅網(wǎng)上負染15min，自然晾干后在電子顯微鏡觀察。（3）粒徑及分布：取一定量5%甲基丁香酚微乳溶液，以激光粒度分析儀測定粒徑大小及分布。

1.5 甲基丁香酚微乳的穩(wěn)定性考察

1.5.1 離心穩(wěn)定性試驗 取甲基丁香酚微乳適量于離心管內(nèi)，4 000r/min離心30min，觀察是否分層［8］。

1.5.2 熱貯和冷藏試驗 取甲基丁香酚微乳適量，置安瓿瓶中密封，共測試15個樣品，每批5份，分別在54℃的恒溫箱中、4℃和－20℃的冰箱中貯存15 d，于0、5、10、15d觀察微乳外觀變化情況［9］。

1.5.3 長期穩(wěn)定性試驗 取甲基丁香酚微乳適量，置安瓿瓶中密封，共測試5個樣品，于常溫下放置6個月，分別于1、2、3、4、5、6個月后觀察有無渾濁、沉淀及相分離現(xiàn)象［10］。

2 結果

2.1 甲基丁香酚溶解性考察 甲基丁香酚在油相EO、GTCC和霍霍巴油中易溶，在液體石蠟中略溶；在表面活性劑Tween－80、RH40和EL35中易溶；在助表面活性劑乙醇、異丙醇和PEG400中易溶，在1，2－丙二醇、丙三醇中略溶。

2.2 空白微乳處方的篩選

2.2.1 油相的篩選 油相EO形成微乳區(qū)域最大，其次為GTCC（圖1），而霍霍巴油不能形成微乳。因此，選擇EO為油相制備微乳。

圖1 不同油相對微乳形成區(qū)域的影響

2.2.2 表面活性劑的篩選 不同表面活性劑形成微乳區(qū)域大小依次為EL35＞RH40＞Tween－80（圖2）。由于EL35形成的微乳不穩(wěn)定，因此，選擇RH40為表面活性劑制備微乳。

圖2 不同表面活性劑對微乳形成區(qū)域的影響

2.2.3 助表面活性劑的篩選 不同助表面活性劑形成微乳區(qū)域大小依次為PEG400＞異丙醇＞乙醇（圖3）。其中PEG400易出現(xiàn)混濁，因此，選擇異丙醇為助表面活性劑制備微乳。

圖3 不同助表面活性劑對微乳形成區(qū)域的影響

2.3 甲基丁香酚微乳的制備及質(zhì)量評價 制備的5%甲基丁香酚微乳澄清、透明，亞甲藍擴散速度明顯快于蘇丹紅，表明所制備的微乳為O/W型。在透射電鏡下觀察，甲基丁香酚微乳呈球形（圖4），激光粒度分析測定的平均粒徑為18.2nm，粒徑較均一，多分散系數(shù)PDI為0.018（圖5）。

圖4 甲基丁香酚微乳的透射電鏡照片（100 000×）

2.4 甲基丁香酚微乳的穩(wěn)定性 經(jīng)離心穩(wěn)定性試驗、熱貯和冷藏試驗及長期穩(wěn)定性試驗，所制備的甲基丁香酚微乳仍澄清透明而均一，無分層現(xiàn)象。

圖5 甲基丁香酚微乳的粒度分析

3 討論

偽三元相圖中微乳區(qū)域的大小是微乳處方篩選的主要依據(jù)，但在實際篩選時，尚須結合微乳形成后的穩(wěn)定性來綜合判定［10］。本試驗發(fā)現(xiàn)，表面活性劑EL35比RH40形成的微乳區(qū)域大，助表面活性劑PEG400比異丙醇形成的微乳區(qū)域大，但EL35和PEG400所形成的微乳靜置一段時間后易出現(xiàn)混濁而不穩(wěn)定，故選擇RH40為表面活性劑，異丙醇為助表面活性劑。據(jù)此優(yōu)選出空白微乳體系RH40－異丙醇－油酸乙酯－水，其所形成的微乳區(qū)域較大，且具有良好的穩(wěn)定性。制備的載藥微乳均需進行質(zhì)量評價［11］，本試驗以6∶3∶1的RH40、異丙醇和油酸乙酯制備的5%甲基丁香酚微乳在高速離心、熱貯、冷藏條件下及常溫長期保存時均未出現(xiàn)分層現(xiàn)象，平 均粒徑18.2nm，PDI為0.018，表明該載藥微乳的分散性和穩(wěn)定性良好。

微乳具有提高難溶性藥物的溶解度和生物利用度等特點［12］。Chong－Kook Kim 等［13］將聯(lián)苯雙酯（BDD）制成微乳，顯著提高了BDD的溶解度，其最大血藥濃度Cmax提高了9.8倍。焦成美等［14］將地西泮（DZ）制成微乳，與市售DZ注射液相比，生物利用度也顯著提高。我們前期研究發(fā)現(xiàn)，甲基丁香酚對動物螨具有顯著殺滅活性，將其制成微乳不僅可進一步提高生物利用度，而且還將為獸醫(yī)臨床應用提供一種新的殺螨劑。

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