血余炭止血包止血效果的實驗研究

朱元元，邱 彥，魯 毅，劉 梅，劉 靜

(解放軍第454醫(yī)院， 江蘇 南京 210002)

血余炭止血包止血效果的實驗研究

朱元元，邱 彥，魯 毅，劉 梅，劉 靜

(解放軍第454醫(yī)院， 江蘇 南京 210002)

目的觀察血余炭止血包的止血作用。方法以兔子為實驗對象，采用試管法測定體外凝血時間；用巴馬小型豬建立其肝臟、脾臟、股動、靜脈創(chuàng)傷出血模型，觀察血余炭止血包的止血效果。結(jié)果體外凝血實驗，與云南白藥組、空白對照組和陰性對照淀粉組比較，血余炭組體外凝血時間明顯縮短(P<0.05，P<0.01)。在巴馬小型豬創(chuàng)傷止血實驗中，與陰性對照淀粉組比較，血余炭止血包能明顯縮短巴馬小型豬肝臟、脾臟創(chuàng)傷出血時間(P<0.01)，并明顯減少出血量(P<0.01)。與云南白藥組和陰性對照淀粉組比較,血余炭組對巴馬小型豬股動、靜脈創(chuàng)傷出血有顯著性止血作用(P<0.05，P<0.01)。組織學(xué)觀察，股動脈創(chuàng)面組織周圍未見明顯病理改變。結(jié)論血余炭止血包有較好的凝血效果，在巴馬小型豬肝臟、脾臟創(chuàng)傷出血模型中能明顯縮短出血時間，減少出血量，止血實驗效果顯著；能有效控制模型中股動、靜脈致命性出血，降低死亡率。

血余炭；止血；出血；動脈；創(chuàng)傷

在常規(guī)戰(zhàn)爭中，大量失血是傷員致殘乃至死亡的重要原因，如越南戰(zhàn)爭中，死于重傷引起的大出血人數(shù)占死亡總?cè)藬?shù)的一半以上[1]。戰(zhàn)傷傷員失血一般分為體內(nèi)出血和體外出血，體內(nèi)出血大部分是因臟器破裂造成，而體外出血則基本多是由于動靜脈損傷引起；失血過多乃是戰(zhàn)場的生命殺手。因此，及時有效地止血是挽救傷員生命、穩(wěn)定傷情、為后續(xù)治療創(chuàng)造條件的關(guān)鍵。近年來，世界各國都十分重視戰(zhàn)傷止血措施的研究，尤其是對適合于野外急救的新型醫(yī)療止血產(chǎn)品的研究已經(jīng)成為了新熱點。目前，用于戰(zhàn)傷的新型止血材料如殼聚糖、纖維蛋白、膠原蛋白、沸石等，雖然可以有效止血，但在生產(chǎn)或使用過程中并不特別理想，如成本高、止血慢、損傷組織等[2,3]。因此，研發(fā)一種止血效果確切、使用方便、易攜帶、安全耐用且價格便宜的止血材料，對戰(zhàn)傷急救止血具有十分重要的意義。

血余炭是用人發(fā)制成的炭化物,呈不規(guī)則的塊狀，烏黑光亮，有多數(shù)細(xì)孔，體輕，質(zhì)脆。其味苦性平,入肝胃經(jīng)，具有止血消瘀、補陰利尿的功效。臨床用于吐血、咯血、衄血、 尿血及崩漏下血和外傷出血諸證[4]。筆者參照沸石的止血原理及其研發(fā)思路，以中藥血余炭為原材料，設(shè)計制備了血余炭止血包。實驗以模擬戰(zhàn)場上創(chuàng)傷致命性出血，如急性創(chuàng)傷所致肝臟、脾臟、股靜動脈出血等動物模型，觀察血余炭止血包的止血效果，為血余炭止血包在戰(zhàn)傷急救方面的應(yīng)用提供實驗基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1藥物及試劑 血余炭止血包(血余炭原料，江蘇張家港綠色中藥飲片有限公司，批號：090327)；云南白藥(云南白藥集團(tuán)股份有限公司，批號：20091036)；淀粉(上海郭冉調(diào)味食品有限公司)；戊巴比妥鈉(Pentobarbital Sodium,德國分裝 RT,批號：WS20080810)；注射用青霉素鈉(華北制藥股份有限公司，批號：D0902204)。

1.2實驗動物 健康成年新西蘭大白兔，體重2.0～2.5 kg, 雌雄兼用(普通級，由上海第二軍醫(yī)大學(xué)實驗動物中心提供，實驗動物質(zhì)量合格證號:SCXK(滬)2007-0003)；巴馬小型豬，體重22～30 kg，雌雄兼用(普通級，由上海市南匯區(qū)老港鎮(zhèn)華新特種養(yǎng)殖場提供，動物質(zhì)量合格證號：SCXK(滬)2007-0013)。

1.3儀器 電子秒表(上海金雀表業(yè)有限公司，JD-2型)；電子天平(上海精天電子儀器有限公司，JA2003A)；醫(yī)用紗布，手術(shù)器械。

1.4方法

1.4.1體外凝血時間的測定[5]取試管32支，按實驗藥物分為4組：空白組、淀粉組、陽性對照云南白藥組和血余炭(原料)組，每組8支試管，空白組不加任何藥物，其他組分別加入不同藥物各100 mg。選取健康新西蘭大白兔8只，雌雄各半。動物適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后進(jìn)行試驗，將兔子固定后心臟取血，每只8 ml。取血后迅速注入試管，每支2 ml，立即搖勻，同時計時開始，每隔15 s 輕輕傾斜試管1次，觀察有無凝血出現(xiàn)，直至試管內(nèi)血液不再流動為止，即血液完全凝固時間(s)。

1.4.2對巴馬小型豬肝臟、脾臟創(chuàng)傷止血效果的研究[6]選用健康巴馬小型豬18只，雌雄各半，隨機(jī)分3組，每組6只，即陰性對照淀粉組、陽性對照云南白藥組、血余炭組。巴馬小型豬圈養(yǎng)1周后，用戊巴比妥鈉耳緣靜脈麻醉(30 mg/kg)；仰位固定在手術(shù)臺上，消毒、沿腹腔正中線縱向逐層打開腹腔，輕輕拉出肝臟，周圍用紗布固定以防止其回縮入腹腔，充分暴露肝臟，用手術(shù)刀在肝臟上作長約2 cm，深度為1.5 cm 切口創(chuàng)面，造成肝臟創(chuàng)傷出血模型。模型建立后，立即用止血包(每個出血創(chuàng)面均使用10 g受試材料：陰性對照淀粉、陽性對照云南白藥、藥物血余炭，制做成的止血包)覆蓋住出血部位進(jìn)行止血，輕壓，同時開始計時，2 min后每隔30 s觀察出血部位，至5 s不見滲血時停止計時，即得出血時間。按壓出血部位過程中，創(chuàng)面出血被吸附在止血包里，止血包按壓前先用電子天平稱重，記錄重量，止血后再稱止血包的濕重，用止血后的重量減去止血前的重量，即可代表出血的量。以同樣的方法建立脾臟出血模型，觀察各組動物的止血情況。

1.4.3對巴馬小型豬股靜脈、動脈創(chuàng)傷止血效果的研究 ① 實驗動物分組同1.4.2。參考文獻(xiàn)[7～9]方法并加以改進(jìn)，巴馬小型豬圈養(yǎng)1周后開始進(jìn)行實驗，建立血管創(chuàng)傷模型。戊巴比妥鈉耳緣靜脈麻醉(30 mg/kg)；仰位固定在手術(shù)臺上，消毒、充分暴露并游離股靜脈約5 cm，用動脈夾夾住近心端股靜脈，另一端用線繩提拉住，在股靜脈中間部位采用醫(yī)用動脈導(dǎo)管穿刺鞘(F6型號，直徑0.3 cm)穿刺暴露好的股靜脈，模型建立后，放開動脈夾后血液從穿刺孔噴出，立即對出血創(chuàng)面按壓止血包(每個出血創(chuàng)面均使用40 g受試材料：陰性對照淀粉、陽性對照云南白藥、藥物血余炭，制做成的止血包)進(jìn)行止血，按壓2 min后，觀察記錄各組動物創(chuàng)面的止血效果。② 以同樣的方法在后肢另一側(cè)建立股動脈出血模型[10,11]，按壓同時開始計時，按壓2 min后每隔30 s觀察一次出血部位，至5 s不見滲血時停止計時，即出血時間。觀察記錄各組動物創(chuàng)面的止血效果。按壓出血部位過程中，動脈創(chuàng)面出血被吸附在止血包里，止血包按壓前先用電子天平稱重，記錄重量，止血后再稱止血包的濕重，用止血后的重量減去止血前的重量，即可代表出血的量。③ 觀察結(jié)束后逐層縫合腹膜、肌肉、皮膚，并在縫合表面灑青霉素鈉干粉以防止感染，實驗過程注意無菌操作。若未能控制股動脈出血不再應(yīng)用其他干預(yù)措施，記錄24 h內(nèi)動物死亡數(shù)，并及時取下股動脈創(chuàng)面組織；存活實驗動物，術(shù)后自由飲水、飲食，于手術(shù)后24 h麻醉觀察股動脈創(chuàng)面，取下股動脈創(chuàng)面組織，用10%中性甲醛固定，石蠟包埋，做組織切片，HE染色觀察創(chuàng)面組織病理變化情況。

2 結(jié)果

2.1體外凝血時間測定 與空白組比較，淀粉組凝血時間雖然有縮短，但無顯著性差異(P>0.05)，血余炭組和云南白藥組均有明顯縮短凝血時間(P<0.01)。與陰性藥淀粉組比，血余炭組體外凝血時間有非常明顯縮短(P<0.01)；與陽性藥云南白藥比較，止血材料血余炭組體外凝血效果較好，有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；試驗結(jié)果說明血余炭有較好的體外凝血效果。結(jié)果見表1。

表1 對新西蘭大白兔體外凝血時間的影響

1)P<0.01，與空白組比較；2)P<0.01，與淀粉組比較；2)P<0.05，與云南白藥組比較。

2.2對肝臟、脾臟創(chuàng)傷止血效果的影響 由表2可知，與陰性對照淀粉組比較，陽性對照云南白藥和血余炭止血包能明顯縮短巴馬小型豬肝臟、脾臟創(chuàng)傷出血的出血時間(P<0.01)，出血量也明顯減少(P<0.05,P<0.01)。從試驗結(jié)果看，血余炭止血包對巴馬小型豬肝臟、脾臟創(chuàng)傷止血效果要好于傳統(tǒng)止血藥云南白藥，但無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。試驗結(jié)果表明，血余炭止血包對巴馬小型豬肝臟、脾臟創(chuàng)傷出血具有較明顯的止血作用。

表2 對巴馬小型豬肝臟、脾臟創(chuàng)傷止血效果的影響

1)P<0.05，2)P<0.01，與淀粉組比較。

2.3對巴馬小型豬股靜脈創(chuàng)傷止血效果的影響 在巴馬小型豬股靜脈創(chuàng)傷止血試驗中，陰性對照淀粉按壓2 min后均不能有效止血，有明顯的滲血；陽性對照云南白藥按壓2 min后其中有一只動物傷口處有滲血，止血有效率83.3%；血余炭止血包按壓2 min后均可以有效止血。與淀粉對照組比較，陽性對照云南白藥和血余炭止血包對巴馬小型豬股靜脈創(chuàng)傷出血的止血作用有顯著性差異(P<0.05，P<0.01)。見表3。

表3 對巴馬小型豬股靜脈創(chuàng)傷止血效果的影響(n=6)

1)P<0.05，2)P<0.01，與淀粉組比較。

2.4對巴馬小型豬股動脈創(chuàng)傷止血效果的影響 巴馬小型豬股動脈創(chuàng)傷止血試驗結(jié)果顯示，與淀粉對照組比較，云南白藥組和血余炭組均能顯著縮短巴馬小型豬股動脈出血時間(P<0.01)，并減少出血量(P<0.05，P<0.01)。血余炭組對巴馬小型豬股動脈創(chuàng)傷止血效果要明顯好于云南白藥組，出血時間有顯著縮短(P<0.05)，出血量也明顯減少(P<0.05)。受試止血材料血余炭止血包按壓大約5 min后可均可有效止血；陰性對照淀粉組不采取其他措施，24 h內(nèi)其中有2只巴馬小型豬因失血過多造成休克性死亡。結(jié)果見表4。

表4 對巴馬小型豬股動脈創(chuàng)傷止血效果的影響

1)P<0.05，2)P<0.01，與淀粉組比較；3P<0.05，與云南白藥組比較。

試驗表明，血余炭止血包對巴馬小型豬股動、靜脈致命性出血模型均有顯著的止血效果，降低死亡率。

2.5股動脈止血部位的病理觀察 組織切片HE染色后，于顯微鏡下觀察可見，受試止血材料淀粉組、云南白藥組和血余炭組，各組血管創(chuàng)面及附近均未發(fā)現(xiàn)有血管壁的不規(guī)則增厚、潰瘍、壞死或動脈瘤形成等改變，各組病理檢驗無明顯異常改變，但各組均有血管腔面的血栓附著，其相應(yīng)的顯微鏡下主要表現(xiàn)為新鮮血栓形成。病理觀察結(jié)果見圖1。

A?淀粉組(HE×200)；B?淀粉組(HE×200)

C?云南白藥組(HE×200)；D?云南白藥組(HE×200)

E?血余炭組(HE×200)；F?血余炭組(HE×200)

圖1股動脈止血部位病理切片典型圖

A-淀粉組股動脈血管創(chuàng)面,未發(fā)現(xiàn)有血管壁的不規(guī)則增厚、潰瘍、壞死或動脈瘤形成等改變；B-淀粉組股動脈血管腔面有血栓附著； C-云南白藥組股動脈血管創(chuàng)面,未發(fā)現(xiàn)有血管壁的不規(guī)則增厚、潰瘍、壞死或動脈瘤形成等改變；D-云南白藥組股動脈血管腔面有新鮮的血栓形成； E-血余炭組股動脈血管創(chuàng)面,未發(fā)現(xiàn)有血管壁的不規(guī)則增厚、潰瘍、壞死或動脈瘤形成等改變， F-血余炭組股動脈血管腔面有血栓附著。

3 討論

目前國內(nèi)外對各種戰(zhàn)場創(chuàng)傷快速止血材料的研究十分重視, 并已經(jīng)開發(fā)出多種創(chuàng)面止血材料如纖維蛋白膠、膠原蛋白、殼聚糖、多微孔類無機(jī)材料-沸石(zeolite)等，但各種止血材料都有各自的特點，同時也存在一定的局限性。為了適應(yīng)未來高技術(shù)戰(zhàn)爭條件下軍事行動的流動性和快速性，以及部隊疏散部署等特點，各個國家都認(rèn)識到單兵自救互救能力的重要性，并致力于研究和開發(fā)創(chuàng)傷快速止血藥物或敷料。中藥血余炭系人發(fā)制成的炭化物，歷代常用的止血中藥，人發(fā)來源十分廣泛，且毒副作用小，容易制取。血余炭主要化學(xué)成分為鈣、銅等金屬的氧化物或鹽類。經(jīng)藥理研究表明血余炭具有明顯的凝血、血管栓塞以及抗菌作用，臨床多用于各種出血癥、帶狀皰疹以及燒燙傷的治療[12]。

本試驗通過對新西蘭大白兔體外凝血，巴馬小型豬肝臟、脾臟、致命性股動、靜脈創(chuàng)傷止血實驗的觀察，證明了血余炭止血包具有較好的止血效果，能夠快速、有效的止血；通過動物實驗?zāi)Ｐ蛠砟M戰(zhàn)傷出血，結(jié)果發(fā)現(xiàn)使用血余炭止血包進(jìn)行急救止血效果十分顯著，為血余炭止血包在戰(zhàn)傷急救方面的應(yīng)用提供了可靠的實驗依據(jù)。傳統(tǒng)的止血方法如加壓、敷料填塞和止血帶等，都是通過壓力止血，止血帶止血還會造成遠(yuǎn)端組織缺血和代謝異常導(dǎo)致嚴(yán)重的并發(fā)癥等[13]。血余炭止血包作為一種外用急救止血材料，具有止血效果確切，價格低廉、攜帶輕便、使用簡便、安全耐用等許多優(yōu)點，極其適用于單兵裝備的戰(zhàn)場自救；對大血管創(chuàng)傷出血可以有效止血，符合戰(zhàn)場重傷急救“保命、延時”需要，并且兼有輕便、不發(fā)熱，便于清創(chuàng)的特點，應(yīng)極力推廣并應(yīng)用于戰(zhàn)傷救治；用來解決野外戰(zhàn)場中缺乏必要醫(yī)療設(shè)施的條件下，對動脈創(chuàng)傷止血急救等瓶頸問題，為人類生命急救創(chuàng)造必要的條件。

血余經(jīng)炮制成炭藥后止血作用明顯增強，與其所含大量炭素、鞣質(zhì)、Ca2+及微量元素等主要止血成分的增強或增加緊密相關(guān)?，F(xiàn)代研究認(rèn)為，中藥炒炭的止血作用比較復(fù)雜，是一個多成分、多環(huán)節(jié)、多靶點的綜合作用，炒炭后增強或產(chǎn)生了止血作用。對于血余其炭化后各成分的具體作用及其作用機(jī)理，尚需進(jìn)一步深入研究。

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2011-05-11

[修回日期]2011-06-10

Experimentalstudyonhemostasiseffectofcarbonizedhair

ZHU Yuan-yuan, QIU Yan, LU Yi, LIU Mei, LIU Jing

(No. 454 Hospital of PLA, Nanjing 210002, China)

ObjectiveTo observe the hemostasis effect of carbonized hair.MethodsThe coagulation time was measured in vitro with blood collected from rabbits in the presence of blank, starch, carbonized hair or Yunnan White Drug-Powder respectively. Bama miniature pigs traumatic model was established and animal haemostatic experiment was performed．Hemostatic effect was observed in liver, spleen and femoral arteriovenous fistula hemorrhagic model of Bama miniature pigs.ResultsThe coagulation time of rabbit blood was markedly shorter by addition of carbonized hair compared to Yunnan White Drug-Powder, starch and blank (P<0.05，P<0.01).Compare with the starch group, carbonized hair could significantly shorten the bleeding time and decrease the volume of bleeding (P<0.01), in the liver and spleen of hemorrhagic model of Bama miniature pigs. Compared with the Yunnan White Drug-Powder and the starch, carbonized hair could more effectively stop the femoral arteriovenous fistula bleeding in the model of Bama miniature pigs (P<0.05，P<0.01). Histologic study revealed there was no significant pathological change around the femoral artery.ConclutionCarbonized hair could effectively inhibit blood coagulation in vitro, decrease bleeding volume and bleeding time in the liver and spleen of hemorrhagic model of Bama miniature pigs. Carbonized hair dressing could also effectively control hemorrhage in femoral arteriovenous fistula model with lethal vascular injury.

carbonized hair; hemostasis; bleeding; artery; wound

南京軍區(qū)醫(yī)學(xué)科研基金(09Z014).

朱元元(1966-)，女，本科，主任護(hù)師.Tel:(0501)865005.

邱 彥.Tel：(0501)865138，E-mail:qiuyan2189@163.com.

R973+.1

A

1006-0111(2011)06-0431-04