一株多重耐藥雞金黃色葡萄球菌的分離鑒定

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一株多重耐藥雞金黃色葡萄球菌的分離鑒定

王 群 （山東省鄒平縣畜牧獸醫(yī)局 256200）

金黃色葡萄球菌(MRSA)是自然界中分布最廣泛的微生物之一，其致病菌常給人類和動(dòng)物造成很大的危害。由于長期使用以致濫用抗生素等抗菌藥物進(jìn)行疾病的預(yù)防和治療，葡萄球菌的耐藥性不斷被強(qiáng)化，耐藥株越來越多，對各種抗生素的敏感性越來越差。為防止金黃色葡萄球菌對抗生素耐藥性所造成的影響，采集當(dāng)?shù)匕l(fā)病雞群分離到的葡萄球菌進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，確定敏感藥物，為其診治提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 病料來源 病例來源于濱州某雞場急性死亡的產(chǎn)蛋雞和同場發(fā)病的雞。

1.1.2 普通培養(yǎng)基 用市售普通營養(yǎng)瓊脂(由普天試劑有限公司生產(chǎn))經(jīng)高壓滅菌制成。

1.1.3 MH瓊脂平板 MH瓊脂由泰安博傲生物有限公司提供。

1 .2 試驗(yàn)方法

1.2.1 細(xì)菌的分離培養(yǎng)與鑒定 無菌取病料接種到5%綿羊血瓊脂培養(yǎng)板中，經(jīng)37℃培養(yǎng)24h，觀察菌落形態(tài)、生長情況和溶血現(xiàn)象。將純培養(yǎng)菌株進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢。依據(jù)菌落形態(tài)和鏡檢情況，將分離純培養(yǎng)的菌株中疑是葡萄球菌屬的菌株做生化反應(yīng)并用標(biāo)準(zhǔn)菌株金黃色葡萄球菌作參照，37℃培養(yǎng)24~72h，觀察其生化特性、培養(yǎng)特性，進(jìn)一步鑒定。

1.2.2 金黃色葡萄球菌溶血型的判定 將分離純化鑒定好的金葡菌分別接種5%綿羊血瓊脂培養(yǎng)板中，37℃培養(yǎng)24h后，觀察溶血型，菌落周圍有1~2mm寬的草綠溶血環(huán)為溶血，菌落周圍形成一個(gè)2~4mm寬，界限分明、完全透明的溶血環(huán)的為溶血，菌落周圍形成一個(gè)約2mm寬不完全透明顏色較淺的溶血環(huán)為溶血，菌落周圍沒有溶血環(huán)的為不溶血。

1.2.3 藥敏試驗(yàn) 對已鑒定溶血型的金黃色葡萄球菌用紙片法進(jìn)行藥物敏感試驗(yàn)。所選抗菌藥有：萬古霉素、慶大霉素、紅霉素、鏈霉素、青霉素G、氨芐青霉素、磺胺、阿莫西林、林可霉素、安滅菌、卡那霉素、先鋒霉素V、硫酸新霉素、恩諾沙星、強(qiáng)力霉素、復(fù)方新諾明、氟哌酸、頭孢氨芐、乙酰螺旋霉素、痢特靈、四環(huán)素等21種，均購北京康農(nóng)興牧科技發(fā)展中心。（1）將待檢菌接種于普通營養(yǎng)瓊脂平板，37℃培養(yǎng)16~18h，挑取菌落懸于3ml生理鹽水中，混勻后與菌液比濁管比濁。調(diào)整濁度與比濁管(0.5麥?zhǔn)蠁挝?相同。（2）用無菌棉拭子蘸取茵液，在管壁上擠壓去掉多余菌液，后用棉拭子涂布整個(gè)MH培養(yǎng)基表面，反復(fù)幾次，保證涂布均勻。（3）待平板上的水分被瓊脂完全吸收后放置藥敏紙片，每個(gè)平板等間距放置5張，每張紙片間距不少于24mm，紙片中心距平皿邊緣不少于15mm。在接種后15min內(nèi)貼完紙片。每種藥敏片設(shè)3個(gè)重復(fù)。（4）將平板倒置，37℃培養(yǎng)20h后取出，用游標(biāo)卡尺測量抑菌圈直徑并記錄，取其平均值，參考NCCLS判斷標(biāo)準(zhǔn)(抑菌圈直徑大于20mm，表現(xiàn)為極敏；抑菌圈直徑在15~20mm，表現(xiàn)為高敏；抑菌圈直徑在10"~14mm，表現(xiàn)為中敏；抑菌圈直徑小于10mm，表現(xiàn)為低敏；無明顯的抑菌圈，表現(xiàn)為耐藥)判斷供試菌株的抑菌效果。

附表 藥敏紙片對雞金黃色葡萄球菌的抑菌效果 （mm）

抗生素抑菌圈直徑抗生素抑菌圈直徑抗生素抑菌圈直徑 萬古霉素12阿莫西林12強(qiáng)力霉素15 慶大霉素9林可霉素20復(fù)方新諾明不明顯 紅霉素不明顯安滅菌8氟哌酸不明顯 鏈霉素不明顯卡那霉素10頭孢氨芐23 青霉素G15先鋒霉素V21乙酰螺旋霉素不明顯 氨芐青霉素14硫酸新霉素21痢特靈15 磺胺不明顯恩諾沙星18四環(huán)素7

2 結(jié)果與分析

從表看出，21種抗菌藥物中，頭孢氨芐、先鋒霉素V、硫酸新霉素3種藥物的抑菌圈直徑大于20mm，對供試菌株表現(xiàn)為極敏；青霉素G、林可霉素、恩諾沙星、強(qiáng)力霉素痢特靈5種藥物，抑菌圈直徑在15~20mm，對供試菌株表現(xiàn)為高敏；萬古霉素、氨芐青霉素、阿莫西林、卡那霉素4種藥物，抑菌圈直徑在10~14mm，對供試菌株表現(xiàn)為中敏；慶大霉素、安滅菌、四環(huán)素3種藥物，抑菌圈直徑小于10mm，對供試菌株表現(xiàn)為低敏；紅霉素、鏈霉素、磺胺、復(fù)方新諾明、氟哌酸、乙酰螺旋霉素6種藥物均無明顯的抑菌圈，對供試菌株表現(xiàn)為耐藥。

（2011–09–16）

S852.61+1

A

1007-1733(2011)12-0041-02