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    棗試管苗的POD同工酶分析

    2011-11-18 05:50:02齊向英陳宗禮苗雨旺等
    湖北農(nóng)業(yè)科學(xué) 2011年16期
    關(guān)鍵詞:同工酶酸棗遷移率

    齊向英 陳宗禮 苗雨旺等

    摘要:采用聚丙烯酰胺垂直板不連續(xù)凝膠電泳技術(shù),對(duì)棗(Ziziphus jujube Mill.)試管苗葉片POD同工酶進(jìn)行了研究。結(jié)果表明,6個(gè)棗品種試管苗共產(chǎn)生了13條酶帶,其中相同遷移率的酶帶為9條;京棗共表現(xiàn)出13條酶帶,駿棗和宿萼酸棗均表現(xiàn)出11條酶帶,狗頭棗、木棗、晉棗均表現(xiàn)出9條酶帶。

    關(guān)鍵詞:棗;試管苗;POD同工酶

    中圖分類號(hào):S665.1;Q943.1;Q554+.6文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A 文章編號(hào):0439-8114(2011)16-3416-02

    Analysis of Peroxidase Isoenzyme of Ziziphus jujube Mill. with Tube Seedlings

    QI Xiang-ying,CHEN Zong-li,MIAO Yu-wang,XI Zeng-jun,ZHAO Yu

    (College of Life Sciences, Yanan University, Shaanxi Engineering & Technological Research Center of Conversation & Utilization of Biological Resources,Yanan 716000, Shaanxi, China)

    Abstract: The peroxidase(POD) isoenzyme in six varieties of Ziziphus jujube Mill. was studied by vertical board polyacrylamide gel electrophoresis technology. The results showed that 13 enzyme belts were produced; 9 lines of them were the same. Jingzao had 13 enzyme belts; Junzao and Sue'suanzao had 11 enzyme belts respectively; Goutouzao,Muzao and Jinzao had 9 enzyme belts respectively.

    Key words: Ziziphus jujube Mill.; tube seedling; peroxidase(POD) isoenzyme

    棗(Ziziphus jujube Mill.)為鼠李科(Rhamnaceae)棗屬(Ziziphus Mill.)植物,為我國(guó)特產(chǎn)樹種[1]。原產(chǎn)地為陜西省黃河沿岸,因其具有抗旱、耐瘠、適應(yīng)性強(qiáng)等特點(diǎn),一直被譽(yù)為鐵桿莊稼。POD同工酶是一類氧化還原酶,能催化很多生化反應(yīng),具有消除過(guò)氧化氫和酚類、胺類毒性的雙重作用[2]。植物體中含有大量的POD同工酶,是活性較高的一種酶。它與呼吸作用、光合作用及生長(zhǎng)素的氧化都有關(guān)系。棗POD同工酶研究已有報(bào)道[3-5],但對(duì)棗試管苗POD同工酶的研究尚未見(jiàn)報(bào)道。近年來(lái),棗通過(guò)試管苗進(jìn)行快繁育種的研究報(bào)道很多[6-8],但有關(guān)試管苗和大田苗生活力與生產(chǎn)能力的比較研究報(bào)道很少。本研究通過(guò)對(duì)棗試管苗POD同工酶進(jìn)行研究,旨在探討棗人工繁育與自然繁育對(duì)棗生活能力的影響差異,以期為生產(chǎn)上針對(duì)試管苗生活力與生產(chǎn)能力的特點(diǎn)制定栽培技術(shù)提供依據(jù)。

    1材料與方法

    供試棗品種分別為狗頭棗、木棗、晉棗、駿棗、宿萼酸棗和京棗,由陜西省紅棗繁育工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室提供各品種的試管繼代苗。試管苗培養(yǎng)按陳宗禮等[7]、齊向英等[8]的方法,將6個(gè)棗品種試管苗分別培養(yǎng)30 d后,取葉片,提取酶液。

    酶液粗提于組培培養(yǎng)室日光燈開啟前,分別稱取棗品種試管苗葉片1 g,加2 mL樣品提取液,在預(yù)冷研缽中研磨,并分3次共用8 mL樣品提取液清洗研缽。粗提酶液于4 ℃、8 000 r/min離心10 min,取上清液,與等體積40%(m/V)蔗糖溶液及1/5體積的溴酚藍(lán)溶液混合,備用。

    聚丙烯酰胺垂直板不連續(xù)凝膠電泳時(shí),按分離膠7.5%(質(zhì)量分?jǐn)?shù),下同)、濃縮膠4.0%[3]、每孔進(jìn)樣30 μL進(jìn)行,電泳電壓濃縮膠120 V、分離膠150 V。

    用醋酸聯(lián)苯胺染色[9]。將膠板輕輕剝離,放入盛有pH值4.7的乙酸緩沖液的大培養(yǎng)皿中,除去濃縮膠,浸泡10 min。倒去乙酸緩沖液,加入配制好的染色液(使用前加體積分?jǐn)?shù)30%的H2O2 1~2滴),在室溫下顯色20 min。染色時(shí)輕輕搖動(dòng)至出現(xiàn)酶帶為止,之后倒去染色液,用去離子水漂洗若干次,至酶帶呈棕色條帶時(shí)止。

    遷移率計(jì)算,POD同工酶遷移率=酶帶的遷移距離/溴酚藍(lán)的遷移距離。

    2結(jié)果與分析

    6個(gè)棗品種試管苗的POD同工酶酶譜圖見(jiàn)圖1,從第一泳道至第六泳道依次為狗頭棗、木棗、晉棗、駿棗、宿萼酸棗和京棗;Rf分析結(jié)果見(jiàn)表1。從圖1、表1中可以看出,6個(gè)棗品種試管苗的POD同工酶共表現(xiàn)出強(qiáng)、中、弱3種不同的帶型。共顯色出13條不同Rf值的酶帶。按遷移率快慢可將其劃分為A(0~0.22)、B(0.27~0.38)、C(0.41~0.69)3個(gè)帶區(qū)。在A區(qū),6個(gè)棗品種出現(xiàn)了1條相同的酶帶,并且都是弱酶帶。在B區(qū),駿棗、宿萼酸棗和京棗表現(xiàn)出了1條相同的酶帶,為弱酶帶;其中京棗表現(xiàn)出另外2條遷移率分別為0.27和0.38的極弱酶帶。在C區(qū),6個(gè)棗品種出現(xiàn)了9條酶帶,其中有8條為相同酶帶;駿棗、宿萼酸棗和京棗還有1條Rf=0.69的相同酶帶,這一區(qū)為這6個(gè)棗品種試管苗酶帶的集中帶區(qū)。它們分別表現(xiàn)出超強(qiáng)酶帶、強(qiáng)酶帶、中酶帶和弱酶帶,而且6個(gè)棗品種試管苗的強(qiáng)酶帶、中酶帶和弱酶帶在這一區(qū)域的寬度基本相同;其中Rf=0.47這一帶型中,宿萼酸棗的酶帶染色較其他5個(gè)品種的酶帶染色淺。

    3討論

    對(duì)棗POD同工酶的研究報(bào)道主要集中在用POD同工酶作為依據(jù)進(jìn)行棗系統(tǒng)的分類上。張惠梅等[3]用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為7%的分離膠和4%的濃縮膠對(duì)河北地區(qū)分布的64個(gè)棗品種進(jìn)行了研究,發(fā)現(xiàn)棗POD同工酶有地區(qū)效應(yīng),遷移率在Rf=0.10~0.75之間,存在不同快慢程度的3個(gè)帶區(qū)、并且存在酶活強(qiáng)弱。蘇冬梅等[4]對(duì)酸棗及17個(gè)棗品種做了POD同工酶分析,結(jié)果表明供試棗品種不但有共同的酶帶區(qū),各品種還存在各自特有的酶帶區(qū),遷移率在Rf=0.014 7~0.691 2之間。於朝廣等[5]對(duì)5個(gè)棗品種的2種酶同工酶進(jìn)行了分析,結(jié)果顯示,POD同工酶共出現(xiàn)了3個(gè)帶區(qū),遷移率在Rf=0.40~0.70之間。李寧等[10]對(duì)22個(gè)棗品種的POD同工酶研究結(jié)果也表明棗POD同工酶存在快慢不同的3個(gè)酶譜區(qū),遷移率在Rf=0.15~0.65之間。馮曉東等[11]對(duì)木棗變異植株POD同工酶研究后發(fā)現(xiàn),木棗POD同工酶存在3個(gè)明顯的酶譜區(qū)。劉世鵬等[12]對(duì)干旱脅迫下棗POD同工酶做了研究,發(fā)現(xiàn)POD同工酶酶譜沒(méi)有發(fā)生變化,仍舊表現(xiàn)出3個(gè)不同的遷移率帶區(qū)。本研究結(jié)果顯示,棗品種試管苗不僅表現(xiàn)出了遷移率快慢不同的3個(gè)帶區(qū),也存在酶活的強(qiáng)弱。

    參考文獻(xiàn):

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    [11] 馮曉東,曹娟云. 木棗葉片再生植株及其變異系過(guò)氧化物酶同工酶分析[J]. 西北植物學(xué)報(bào),2003,23(4):660-662.

    [12] 劉世鵬,曹娟云,陳國(guó)梁,等. 干旱對(duì)組培棗苗過(guò)氧化物酶活性及其同工酶酶譜的影響[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2007,35(5):1269-1271.

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