益母草滴丸中水蘇堿的含量測(cè)定

彭麗麗，肖蘇萍

（1.北京勃然制藥有限公司，北京 102204；2.中國(guó)藥材公司，北京 100195）

益母草滴丸中水蘇堿的含量測(cè)定

彭麗麗1*，肖蘇萍2

（1.北京勃然制藥有限公司，北京 102204；2.中國(guó)藥材公司，北京 100195）

目的：建立益母草滴丸的含量測(cè)定方法。方法：采用HPLC測(cè)定鹽酸水蘇堿的含量，Waters Spherisorb SCX陽(yáng)離子交換樹脂柱（4.6mm×250mm，5μm）；流動(dòng)相：15mmol·L－1磷酸二氫鉀溶液（含有0.04%三乙胺和0.15%磷酸）；柱溫：室溫；檢測(cè)波長(zhǎng)：192nm。結(jié)果：鹽酸水蘇堿在0.0214～0.428 mg·mL－1線性關(guān)系良好（r＝0.9999），平均回收率為100.42%，RSD＝1.02%。結(jié)論：建立的含量測(cè)定方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可用于益母草滴丸質(zhì)量控制。

益母草滴丸；水蘇堿；高效液相色譜法；含量測(cè)定

益母草滴丸是益母草經(jīng)過(guò)提取制成的滴丸，是在衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)收載的益母草顆粒標(biāo)準(zhǔn)（WS3-B-1404-93）中的處方和工藝不變的情況下改變劑型而得。具有活血調(diào)經(jīng)功能，用于經(jīng)閉、痛經(jīng)及產(chǎn)后瘀血腹痛。益母草是最常用的中藥之一，為唇形科植物益母草的干燥地上部分。益母草主要化學(xué)成分為益母草堿、水蘇堿、益母草啶、益母草寧等［1-3］。其有效成分是以水蘇堿和益母草堿為代表的總生物堿，其中水蘇堿具有興奮子宮的作用，且含量較高，易于測(cè)定［4］，常作為質(zhì)控指標(biāo)。因此，本實(shí)驗(yàn)選擇君藥益母草中的水蘇堿（以鹽酸水蘇堿計(jì)）作為益母草滴丸質(zhì)量控制指標(biāo)。

1 儀器與試藥

Agilent1100高效液相色譜儀；鹽酸水蘇堿對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110712-200408）；益母草滴丸（北京勃然制藥有限公司，批號(hào)：050402，050405，050406，050407），磷酸二氫鉀為分析純，水為重雙蒸餾水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

Waters Spherisorb SCX陽(yáng)離子交換樹脂柱（4.6mm×250mm，5μm）；流動(dòng)相：15mmol·L－1磷酸二氫鉀溶液（含有0.04%三乙胺和0.15%磷酸）；柱溫：室溫；檢測(cè)波長(zhǎng)：192nm；流速：1.0mL·min－1；理論板數(shù)以鹽酸水蘇堿峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取鹽酸水蘇堿對(duì)照品適量，加流動(dòng)相制成 0.1 mg·mL－1的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備

取本品1 g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加乙醇50mL，稱定重量，超聲（250 W，40 kHz）處理30min，放冷，用乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液25mL，過(guò)氧化鋁－活性炭柱（堿性氧化鋁5 g，濕法裝柱，上覆層析用40～60目活性炭2 g，乙醇預(yù)洗），收集乙醇洗脫液100mL，蒸干，殘?jiān)恿鲃?dòng)相適量使溶解，轉(zhuǎn)移至10mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，以微孔濾膜（0.45μm）濾過(guò)，即得。

2.4 方法專屬性試驗(yàn)

按處方組成，取缺益母草藥材的益母草滴丸陰性樣品1.0g，精密稱定，然后按供試品制備項(xiàng)下的方法制備陰性對(duì)照溶液，分別吸取陰性對(duì)照溶液與供試品溶液各10μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖與峰面積，見(jiàn)圖1～3。結(jié)果表明，陰性對(duì)照品的圖譜中鹽酸水蘇堿位置上無(wú)峰出現(xiàn)，表明陰性無(wú)干擾。

圖1 鹽酸水蘇堿對(duì)照品HPLC圖

2.5 線性關(guān)系的考察

圖2 益母草滴丸樣品HPLC圖

圖3 益母草滴丸陰性樣品HPLC圖

精密稱取鹽酸水蘇堿對(duì)照品10.7 mg，置25mL容量瓶中，加水使溶解，并稀釋至刻度，搖勻，制成0.428 mg·mL－1的鹽酸水蘇堿溶液。精密量取對(duì)照品溶液5.0，2.5，1.0，0.5mL，分別置于10mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，質(zhì)量濃度分別為0.214，0.107，0.0428，0.0214mg·mL－1，上述色譜條件下，分別進(jìn)樣10μL，記錄峰面積；以濃度（C）為橫坐標(biāo)，峰面積（A）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為Y＝2072X－1.4499，r＝0.9999。試驗(yàn)結(jié)果表明鹽酸水蘇堿的濃度在0.0214～0.428 mg·mL－1與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.6 精密度試驗(yàn)

取濃度為0.107 mg·mL－1的鹽酸水蘇堿對(duì)照品溶液，在上述色譜條件下重復(fù)進(jìn)樣5次，每次10μL，記錄鹽酸水蘇堿色譜圖與峰面積，計(jì)算RSD＝0.26%，結(jié)果表明精密度良好。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批號(hào)的益母草滴丸（批號(hào)：050402），按2.3方法分別制備5份供試品液，精密吸取供試品液各10μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖與峰面積，計(jì)算RSD＝0.45%，結(jié)果表明重現(xiàn)性良好。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一批號(hào)的益母草滴丸（批號(hào)：0504027），按2.3方法制備5份供試品液，分別于0，2，4，6，8，12，24 h精密吸取供試品液各10μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖與峰面積，計(jì)算RSD＝0.52%，表明樣品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.9 加樣回收率試驗(yàn)

取已知含量為9.399 mg·g－1的益母草滴丸（批號(hào)：050402）共5份，精密稱定，置具塞錐形瓶中，再精密稱取鹽酸水蘇堿對(duì)照品5份，分別加入上述供試品中，然后按上述色譜條件操作測(cè)定，記錄色譜圖，考察本方法的加樣回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 鹽酸水蘇堿加樣回收率試驗(yàn)

2.10 樣品含量測(cè)定

按上述方法對(duì)050405，050406，0504073批樣品進(jìn)行含量測(cè)定，每批測(cè)定2次，記錄色譜圖與峰面積，計(jì)算鹽酸水蘇堿含量分別為8.75，9.39，9.24 mg·g－1。

3 討論

3.1 流速的選擇

曾試用了0.8，0.9，1.0mL·min－1共 3種流速進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果流速為1.0mL·min－1時(shí)鹽酸水蘇堿色譜峰與其他成分的峰能較好地分離，峰形較好。故采用1.0mL·min－1的常規(guī)流速。

3.2 提取條件的考察

對(duì)提取方法、提取溶劑、提取時(shí)間等進(jìn)行了比較實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明，樣品1.0 g采用乙醇50mL、超聲30min即可提取完全。同時(shí)在氧化鋁上層覆活性炭進(jìn)行脫色，經(jīng)過(guò)優(yōu)選采用2 g即可；經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)優(yōu)選了洗脫體積，發(fā)現(xiàn)采用100mL即可洗脫完全，最終確定了該除雜方法。

3.3 流動(dòng)相選擇

益母草滴丸由益母草提取浸膏加入輔料滴制而成，由于鹽酸水蘇堿的紫外吸收為末端吸收，且其極性較大，故很難以反相HPLC進(jìn)行測(cè)定，有文獻(xiàn)［5］采用強(qiáng)陽(yáng)離子交換柱獲得了較好的分離。在參考文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上［5］，試用了流動(dòng)相：15mmol·L－1磷酸二氫鉀溶液（含有0.04%三乙胺和0.15%磷酸）、0.05%三乙胺和0.025 mol·L－1的磷酸二氫鉀（用磷酸調(diào)至pH 2），結(jié)果使用15mmol·L－1磷酸二氫鉀溶液（含有0.04%三乙胺和0.15%磷酸）作為流動(dòng)相峰形較好，也較穩(wěn)定，鹽酸水蘇堿色譜峰與其他成分較好地分離，故選此為流動(dòng)相。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明該方法操作簡(jiǎn)便、可行，重復(fù)性好，可用于控制產(chǎn)品質(zhì)量。

［1］唐盈，王曉強(qiáng).四種含益母草中成藥中水蘇堿的含量測(cè)定［J］.藥物分析雜志，1989，16（3）：21-23.

［2］晁志，周秀佳.益母草類中藥的研究概況和進(jìn)展［J］.中草藥，1998，29（6）：414-417.

［3］張嫻，彭國(guó)平.益母草屬化學(xué)成分研究進(jìn)展［J］.天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā)，2003，15（2）：162-166.

［4］劉莉，李慧金.益母草提取工藝優(yōu)選［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2003，9（2）：3-5.

［5］姜舜堯.益母草藥材中水蘇堿成分的高效液相色譜法分析［J］.藥物分析雜志，2001，21（4）：243-245.

Determination of Stachydrine in Yimucao Dripping Pills

PENG Li-li1，XIAO Su-ping2
（1.Beijing boran pharmacy Co.，LTD.，Beijing 102204，China，2.China National Corp.of Traditional＆Herbal Medicine，Beijing 100195，China）

Objective：To establish a method for the determination of yimucao dripping pills.Methods：HPLC was adopted with Waters Spherisorb SCX Cation Exchange Resin column（4.6mm×250mm，5μm）；The mobile phase was 15mmol·L-1monopotassium phosphate solution（with 0.04% triethylamine and 0.15%phosphoric acid，column temperature was room temperature，the detection wavelength was 192nm.Results：The linear range of stachydrine was 0.0214～0.428 mg·mL-1（r＝0.9999）.The average recovery was 100.42%and RSD was 1.02%.Conclusion：Themethod is simple，accurate.It has good reproducibility and can be used for quality control of yimucao dripping pills.

Yimucao dripping pills；Stachydrine；HPLC；Determination

*彭麗麗，E-mail：peng＿lili＠163.com

2010-11-05）