促泌素在腎上腺原發(fā)腫瘤中的表達及其臨床意義

王文軍 張帆陳玉娟 梅晶晶

(皖南醫(yī)學(xué)院弋磯山醫(yī)院病理科,安徽蕪湖 241000)

促泌素在腎上腺原發(fā)腫瘤中的表達及其臨床意義

王文軍 張帆＊陳玉娟 梅晶晶

(皖南醫(yī)學(xué)院弋磯山醫(yī)院病理科,安徽蕪湖 241000)

目的 比較促泌素(secretagogin,SCGN)與傳統(tǒng)神經(jīng)內(nèi)分泌標記物在腎上腺原發(fā)腫瘤中的表達差異。方法 收集腎上腺原發(fā)腫瘤手術(shù)標本共37例,其中包括18例皮質(zhì)腺瘤、3例皮質(zhì)腺癌、16例嗜鉻細胞瘤。同時選取5例正常腎上腺組織,5例腎透明細胞癌作為對照。所有標本均使用SCGN、PGP9.5、CD56、NSE、Syn及CgA進行免疫組織化學(xué)SP法染色。結(jié)果 SCGN在全部5例正常腎上腺皮質(zhì)均有表達,而在髓質(zhì)不表達(P<0.01),其中在皮質(zhì)的表達明顯高于 PGP9.5和CgA的表達(P均<0.01);全部18例皮質(zhì)腺瘤均表達 SCGN,且明顯高于 NSE(P<0.05)、PGP9.5和 CgA(P均 <0.01);腎上腺嗜鉻細胞瘤中SCGN的陽性表達率僅為18.8%(3/16),明顯低于其它標記物(P均<0.01)。SCGN在皮質(zhì)腺瘤(18/18)中的表達明顯高于嗜鉻細胞瘤(3/16)(P<0.01),而PGP9.5和CgA在嗜鉻細胞瘤(15/16,16/16)中的表達明顯高于皮質(zhì)腺瘤(3/18,1/18)(P均<0.01);CD56、NSE和Syn在皮質(zhì)腺瘤、皮質(zhì)腺癌和嗜鉻細胞瘤中均有高表達,但兩兩組間比較均無統(tǒng)計學(xué)差異(P均>0.05)。SCGN在全部5例腎透明細胞癌中均不表達。結(jié)論 SCGN對腎上腺皮質(zhì)腺瘤有較高敏感性,其與嗜鉻細胞瘤的標記物CgA和PGP9.5聯(lián)合可在兩者的診斷和鑒別診斷中發(fā)揮重要作用。

促泌素; 腎上腺皮質(zhì)腺瘤; 嗜鉻細胞瘤; 免疫組織化學(xué)

促泌素(secretagogin,SCGN)首先由 Wagner 等[1、2]克隆,目前作為一種新型的神經(jīng)內(nèi)分泌標記物已受到重視。腎上腺原發(fā)腫瘤主要包括皮質(zhì)腺瘤(Adrenal cortical adenoma)和嗜鉻細胞瘤(Pheochromocytoma),兩者有時很難鑒別,而免疫組織化學(xué)標記對其鑒別診斷很有幫助。SCGN能否在腎上腺皮髓質(zhì)腫瘤中表達,且是否具有鑒別診斷意義?本實驗通過對比研究,探討SCGN在腎上腺原發(fā)腫瘤臨床病理診斷中的應(yīng)用價值。

材料和方法

1.材料

收集2002年1月至2008年1月間皖南醫(yī)學(xué)院弋磯山醫(yī)院病理科存檔石蠟包埋組織,均為手術(shù)切除標本。實驗組共37例腎上腺原發(fā)腫瘤標本,包括18例皮質(zhì)腺瘤、3例皮質(zhì)腺癌和16例嗜鉻細胞瘤。另外選取正常腎上腺、腎透明細胞癌各5例作為對照組。所有病例均由兩位高年資病理醫(yī)師根據(jù)WHO2004年新分類標準結(jié)合免疫組織化學(xué)結(jié)果進行病理診斷,術(shù)前均未行任何治療。

2.免疫組織化學(xué)染色

上述存檔蠟塊組織均為4%甲醛固定,常規(guī)脫水,石蠟包埋,4μm厚切片。分別進行促泌素(secretagogin,SCGN)、蛋白基因產(chǎn)物 9.5(protein gene production 9.5,PGP9.5)、CD56 即神經(jīng)細胞粘附分子(neural cell adhesion molecule,NCAM)、神經(jīng)元特異性烯醇化酶(neuron specific enolose,NSE)、突觸素(synaptophysin,Syn)及嗜鉻蛋白 A(chromogranin A,CgA)免疫組織化學(xué)SP兩步法染色,DAB顯色。上述抗體相關(guān)信息詳見表1,其中SCGN由浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院來茂德教授惠贈。所用抗體均采用p H6.0的檸檬酸鈉緩沖液高壓修復(fù)。以PBS代替一抗作空白對照,以已知陽性病例作陽性對照。操作嚴格按產(chǎn)品說明書進行。

表1 抗體名稱、性質(zhì)、克隆號、來源、工作濃度及陽性部位Table1 The characteristics of all markers

3 結(jié)果判斷免疫組織化學(xué)染色細胞膜、胞質(zhì)或胞核出現(xiàn)清晰淡黃色至棕褐色顆粒者為陽性表達細胞。結(jié)合染色強度和陽性細胞數(shù)進行分級[3]。兩人雙盲法分別觀察切片,每人選擇10個具有代表性的高倍視野(×400倍),評分后取平均值。染色強度評分標準:不著色為0分,淡黃色為1分,黃褐色為2分,棕褐色為3分。陽性細胞所占整張切片比例評分標準:陽性細胞數(shù)<5%為0分,5%-25%為 1分,26%-50%為 2分,51%-75%為 3分,>75%為 4分。兩種評分相乘,0分為陰性,≥1分為陽性;陽性率按陽性例數(shù)除以總例數(shù)計算。若兩人觀察結(jié)果相差3分則重新評定。

4.統(tǒng)計學(xué)分析

應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計軟件對實驗數(shù)據(jù)進行處理,兩兩間比較采用χ2Fisher精確檢驗,P<0.05差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié) 果

1.SCGN等標記在正常腎上腺組織中的表達所有5例正常腎上腺皮質(zhì)均表達 SCGN(圖 1)和CD56,均不表達 PGP9.5和CgA,后兩者與 SCGN比較均有顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.01)。SCGN在正常腎上腺髓質(zhì)均不表達,而 CgA(圖 2)和 PGP9.5在全部髓質(zhì)均為彌漫陽性表達,各標記陽性率均明顯高于SCGN(P<0.01)。SCGN僅在皮質(zhì)表達,而在髓質(zhì)不表達(P<0.01);相反 PGP9.5和 CgA 僅在髓質(zhì)表達,而在皮質(zhì)不表達(P均<0.01);CD56、NSE和Syn在皮質(zhì)和髓質(zhì)均可表達,但在兩部位間的表達率均無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)(見表2)。

2 SCGN等標記在腎上腺皮質(zhì)腫瘤中的表達SCGN(圖3)和Syn在腎上腺皮質(zhì)腺瘤中均全部表達,分別與 PGP9.5陽性率16.7%(3/18)和 CgA 陽性率5.6%(1/18)比較均有顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.01)。皮質(zhì)腺癌中各標記均有不同程度表達,與SCGN(圖4)比較均無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)(見表3)。

表2 SCGN等標記在正常腎上腺皮質(zhì)、髓質(zhì)中的表達Table 2 Expression of SCGN and the other markers in normal adrenal cortex and medulla

3.SCGN等標記在腎上腺嗜鉻細胞瘤中的表達

SCGN在腎上腺嗜鉻細胞瘤(圖5)中的陽性率僅為18.8%(3/16)且呈灶性弱陽性,相反 CgA(圖6)和Syn均全部表達,余標記陽性率也明顯高于SCGN,均有顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.01)(見表3)。

4.SCGN等標記在腎上腺皮髓質(zhì)腫瘤間的表達差異

SCGN在皮質(zhì)腺瘤中的表達明顯高于嗜鉻細胞瘤(P<0.01),而 PGP9.5和 CgA 在嗜鉻細胞瘤中的表達均明顯高于皮質(zhì)腺瘤(P<0.01)。所有標記在皮質(zhì)腺瘤和皮質(zhì)腺癌之間的表達均無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。除CgA在嗜鉻細胞瘤表達高于皮質(zhì)腺癌有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)外,余標記在嗜鉻細胞瘤與皮質(zhì)腺癌之間的表達均無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。CD56、NSE和Syn在三組腫瘤中均有表達,但兩兩組間比較均無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)(見表3)。

5.SCGN等標記在腎透明細胞癌中的表達

SCGN等所有標記在5例腎透明細胞癌中均無表達(表中未列出)。

表3 SCGN等標記在原發(fā)性腎上腺腫瘤中的表達Table 3 Expression of SCGN and the other markers in primary adrenal tumors

討 論

SCGN基因定位于6p22.1-22.3,包含六個并行的EF手型鈣結(jié)合結(jié)構(gòu)域,屬于鈣結(jié)合蛋白感受器家族。近年的研究顯示SCGN在正常神經(jīng)內(nèi)分泌細胞和相應(yīng)腫瘤中均有表達,為一種新型的神經(jīng)內(nèi)分泌標記物[4-7]。目前僅有一種稱為突觸小體相關(guān)蛋白-25(25kDa synaptosome-associated protein,SNAP-25)的SCGN結(jié)合蛋白被鑒定出來。SCGN的作用機制一方面與其較低的Ca2+親和力以及在Ca2+誘導(dǎo)下的構(gòu)型改變有關(guān),另一方面其與SNAP-25結(jié)合后可以通過Ca2+信號引發(fā)神經(jīng)內(nèi)分泌細胞胞吐作用,參與此類細胞的生長和分化[8]。

傳統(tǒng)觀點認為腎上腺皮質(zhì)起源于中胚層,不屬于神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng),而髓質(zhì)起源于外胚層具有神經(jīng)內(nèi)分泌功能。但資料顯示腎上腺皮質(zhì)亦有一定的神經(jīng)內(nèi)分泌分化[9],且有臨床資料作證[10]。這對傳統(tǒng)腎上腺皮質(zhì)發(fā)生學(xué)提出挑戰(zhàn),但到目前為止,包括正常及異常腎上腺皮質(zhì)與神經(jīng)內(nèi)分泌分化的關(guān)系仍不肯定。本實驗顯示SCGN僅在正常腎上腺皮質(zhì)表達,而在髓質(zhì)不表達,其表達區(qū)域與 PGP9.5和CgA正好相反,以上三種標記在皮質(zhì)與髓質(zhì)間的差異表達均有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01);CD56、NSE和Syn在正常腎上腺皮質(zhì)和髓質(zhì)均有不同程度的表達,但三者在皮質(zhì)與髓質(zhì)間的表達均無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。一方面證實正常腎上腺皮質(zhì)可伴有神經(jīng)內(nèi)分泌分化,同時提示SCGN可作為正常腎上腺皮質(zhì)特異的免疫組化標記物。

嗜鉻細胞瘤屬神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤是不爭的事實,可表達 CgA、Syn、NSE、PGP9.5 和 CD56,其中 CgA是特異性和敏感性兼優(yōu)的免疫組化標記物[11-14],本研究也充分證實了這一點。本實驗尚顯示皮質(zhì)腺瘤和皮質(zhì)腺癌也可表達 Syn、NSE和 CD56,同時PGP9.5和CgA在個別標本呈小灶性弱陽性,與相關(guān)研究結(jié)果相似[15-18],證實腎上腺皮質(zhì)腫瘤也可伴有神經(jīng)內(nèi)分泌分化[19-21]。相關(guān)實驗證實神經(jīng)內(nèi)分泌標記物SCGNmRNA及其蛋白在腎上腺皮質(zhì)腺瘤和嗜鉻細胞瘤中均有不同程度表達[2、6、22]。本實驗SCGN在18例腎上腺皮質(zhì)腺瘤中均全部表達,在3例皮質(zhì)腺癌中有2例表達,而在16例腎上腺嗜鉻細胞瘤中僅有3例且均為小灶性弱表達,提示SCGN對皮質(zhì)腫瘤有較高敏感性和特異性,其與診斷嗜鉻細胞瘤的金標準CgA聯(lián)合可在兩者的鑒別中發(fā)揮重要作用。

腎上腺和腎臟腫瘤常因相互累犯,造成原發(fā)部位和腫瘤類型不能通過普通病理形態(tài)學(xué)特點進行確診,而免疫組織化學(xué)標記可有助于進一步明確診斷。Kim等[23]研究顯示SCGN在腎透明細胞癌中升高,來茂德等[6]免疫組織化學(xué)法顯示SCGN在3/5例腎透明細胞癌中陽性表達,而本實驗SCGN等標記在全部5例腎透明細胞癌中均無表達,故SCGN在腎透明細胞癌和腎上腺腫瘤中是否具有鑒別診斷價值有待進一步大樣本的研究。

總之,本研究證實包括SCGN在內(nèi)的神經(jīng)內(nèi)分泌標記物均可用于腎上腺原發(fā)腫瘤的臨床病理診斷。尤其是SCGN、PGP9.5和CgA可主要用于腎上腺皮質(zhì)腺瘤和嗜鉻細胞瘤的鑒別診斷,即若SCGN陽性、PGP9.5和 CgA陰性,多考慮為皮質(zhì)腺瘤;若 SCGN陰性,PGP9.5和 CgA 陽性,則考慮為嗜鉻細胞瘤。限于CD56、NSE和Syn在兩者中均高表達,故鑒別意義不大。而SCGN在腎上腺正常皮髓質(zhì)及其原發(fā)腫瘤中表達差異的機制值得進一步探討。

[1]Wagner L,Templ E,Reining G,et al.Culture of human insulinoma cells:development of a neuroendocrine tumour cell-and human pancreatic islet cell-specific monoclonal antibody.Endocrinol,1998,156(3):469-476

[2]Wagner L ,Oliyarnyk O,Gartner W,et al.Cloning and expression of secretagogin,a novel neuroendocrine and pancreatic islet of Langerhans-specific Ca+-binding protein.Biol Chem,2000,275(32):24740-24751

[3]于萍,步宏,王華,等.免疫組化結(jié)果的圖像分析與人工計數(shù)方法的對比研究.生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)雜志,2003,20(2):288-290

[4]Zhan X,Evans CO,Oyesiku NM,et al.Proteomics and transcriptomics analyses of secretagogin downregulation in human non-functional pituitary adenomas.Pituitary,2003,6(4):189-202

[5]Birkenkamp-Demtr?der K,Wagner L,Brandt-Srensen F,et al.Secretagogin is a novel marker for neuroendocrine differentiation.Neuroendocrinology,2005,82(2):121-138

[6]Lai MD,Lu BJ,Xing XM,et al.Secretagogin is a novel neuroendocrine marker,has a distinct expression pattern from chromogranin A.Virchows Arch,2006,449(4):402-409

[7]Adolf K,Wagner L,Bergh A,et al.Secretagogin is a new neuroendocrine marker in the human prostate.Prostate,2007,67(5):472-484

[8]Rogstam A,Linse S,Lindgvist A,et al.Binding of calcium ions and SNAP-25 to the hexa EF-hand protein secretagogin.Biochem,2007,401(1):353-363

[9]Ehrhart-Bornstein M,Hilbers U.Neuroendocrine properties of adrenocortical cell.Horm Metab Res,1998,30(6-7):436-439

[10]Schr?der S,Padberg BC,Achilles E,et al.Immunohistochemistry in adrenocortical tumors:a clinicomorphological study of 72 neoplasms.Virchows Arch,1992,420(1):65-70

[11]王曉潔,李響,魏兵,等.嗜鉻細胞瘤組織芯片免疫組化標記的診斷價值分析.臨床與實驗病理學(xué)雜志,2005,21(2):164-168

[12]Campana D,Nori F,Piscitelli L,et al.Chromogranin A:is it a useful marker of neuroendocrine tumors?Clin Oncol,2007,25(15):1967-1973

[13]Bílek R,Safarík L,CiprováV,et al. Chromogranin A,a member of neuroendocrine secretory proteins as a selective marker for laboratory diagnosis of pheochromocytoma. Physiol Res,2008,57(suppl.1):S171-S179

[14]Papewalis C,Kouatchoua C,Wuttke M,et al.Chromogranin A as potential tumor antigen in pheochromocytoma.Horm Metab Res,2009,41(9):707-709

[15]李青,宋建華,樊代明.腎上腺腫瘤鑒別診斷的免疫組織化學(xué)研究.診斷病理學(xué)雜志,2001,8(6):345-347

[16]馮超,李漢忠,嚴維剛,等.嗜鉻素A和突觸素在腎上腺腫瘤中的表達及其臨床意義.中華腫瘤雜志,2005,27(8):486-488

[17]Khorram-Manesh A,Ahlman H,Jansson S,et al.N-cadherin expression in adrenal tumors:upregulation in malignant pheochromocytoma and downregulation in adrenocortical carcinoma.Endocr Pathol,2002,13(2):99-110

[18]潘敏鴻,張新華,馬恒輝,等.腎上腺嗜酸細胞型皮質(zhì)癌臨床病理觀察.診斷病理學(xué)雜志,2007,14(6):423-426

[19]Haak HR,Fleuren GJ.Neuroendocrine differentiation of adrenocortical tumors.Cancer,1995,75(3):860-864

[20]王杰,宿飛,程繼義.腎上腺皮質(zhì)腺瘤的神經(jīng)內(nèi)分泌分化.中華國際醫(yī)學(xué)雜志,2001,1(6-7):488-491

[21]Kazantseva IA,Poliakova GA,Gurevich L G,et al.Adrenocortical tumors with neuroendocrine differentiation.Arkh Patol,2002,64(5):8-13

[22]林萬潤,劉雯,馬金龍,等.Secretagogin在神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤組織的表達.中國現(xiàn)代普通外科進展,2009,12(6):481-484

[23]Kim DS,Choi YP,Kang S,et al.Panel of candidate biomarkers for renal cell carcinoma.Proteome Res,2010,64(5):8-13

圖 版 說 明

圖1 SCGN在正常腎上腺皮質(zhì)表達,而在髓質(zhì)不表達。SP兩步法 ×40

圖2 CgA在正常腎上腺皮質(zhì)不表達,而在髓質(zhì)強陽性表達。SP兩步法 ×40

圖3 SCGN在腎上腺皮質(zhì)腺瘤中彌漫強陽性表達。SP兩步法 ×100

圖4 SCGN在腎上腺皮質(zhì)腺癌中彌漫強陽性表達。SP兩步法 ×100

圖5 SCGN在腎上腺嗜鉻細胞瘤中不表達,而在其殘留的皮質(zhì)表達。SP兩步法 ×100

圖6 CgA在腎上腺嗜鉻細胞瘤中強陽性表達。SP兩步法×100

EXPLANATION OF FIGURES

Fig.1 The positive expression of SCGN protein in normal adrenal cortex,but not in medulla. SP method ×40

Fig.2 The positive expression of CgA protein in normal adrenal medulla,but not in cortex.SP method ×40

Fig.3 The diffusely positive expression of SCGN protein in adrenal cortical adenoma.SP method ×100

Fig.4 The diffusely positive expression of SCGN protein in adrenal cortical adenocarcinoma. SP method ×100

Fig.5 The negative expression of SCGN protein in adrenal pheochromocytoma,but positive among normal adrenal cortex. SP method ×100

Fig.6 The strongly positive expression of CgA protein in adrenal pheochromocytoma. SP method ×100

Expression and significance of secretagogin in primary adrenal tumors

Wang Wenjun,Zhang Fan＊,Chen Yujuan,Mei Jingjing

(Department ofPathology,Yijishan Hospital of Wannan Medical College,W uhu241000,China)

Objective To investigate the expression of secretagogin(SCGN)and traditional neuroendocrine markers and to explore the significance of SCGN in primary adrenal tumors.Methods Thirty-seven samples of primary adrenal tumors were collected,including 18 cases of adrenal cortical adenoma,3 adrenal cortical adenocarcinoma and 16 pheochromocytoma.At the same time,5 cases of normal adrenal and 5 cases of clear cell carcinoma in kidney were selected as controls.All specimens were detected by immunohistochemistry. Using the specific antibody for SCGN and 5 conventional neuroendocrine markers PGP9.5,CD56,NSE,Syn and CgA.Results SCGN staining was positive in all 5 cases of normal adrenal cortex,but not in medulla(P<0.01),more frequently than PGP9.5 and CgA(P<0.01). SCGN showed positive staining in all 18 cases of adrenal cortical adenoma,which was obviously higher than those of NSE(P<0.05),PGP9.5 and CgA(P<0.01). The positive rate of SCGN in pheochromocytoma was only 18.8%(3/16)less than those of the other markers(P<0.01). The positive rate of SCGN was significantly different between adrenal cortical adenoma(18/18)and pheochromocytoma(3/16)(P<0.01).Also,significant differences were seen in the positive rates of PGP9.5 and CgA between pheochromocytoma(15/16,16/16)and adrenal cortical adenoma(3/18,1/18)(P<0.01).Although the positive rates of CD56,NSE and Syn were higher in all primary adrenal tumors,there was no significant difference in pairwise comparison(P>0.05). All 5 cases of clear cell carcinoma in kidney did not express SCGN.Conclusion SCGN is a novel marker that may be useful in the diagnosis of adrenal cortical adenoma.A combination of SCGN,PGP9.5 and CgA could serve as diagnostic markers for distinguishing adrenal cortical adenoma from pheochromocytoma.

Secretagogin; Adrenal cortical adenoma; Pheochromocytoma; Immunohistochemistry

R736.6

A

10.3870/zgzzhx.2011.02.014

2010-10-10

2011-02-27

王文軍,男(1976年),漢族,主治醫(yī)師。

＊通訊作者(To whom correspondence should be addressed)