多西他賽脂質(zhì)體制備工藝研究

池王胄

（上海新先鋒藥業(yè)有限公司，上海 201203）

多西他賽脂質(zhì)體制備工藝研究

池王胄

（上海新先鋒藥業(yè)有限公司，上海 201203）

現(xiàn)階段，研究抗腫瘤藥物脂質(zhì)體制劑項(xiàng)目是國內(nèi)外新型給藥系統(tǒng)的一大熱點(diǎn)，本文研究一種具備較好穩(wěn)定性的多西他賽脂質(zhì)體的制備方法，并考察其理化性質(zhì)及體外釋放特性。

多西他賽；脂質(zhì)體；制備工藝

1 材料與儀器

1.1 藥品試劑

試驗(yàn)用藥品及試劑包括：含量為99.48%的多西他賽；PC含量為97.5%z的注射用蛋黃卵磷脂；德國LipoidGmbH公司生產(chǎn)的二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-PEG 2000；規(guī)格為20mg/0.5mL的多西他賽注射液；美國天地公司生產(chǎn)的乙腈；美國Gibco公司所生產(chǎn)的RPMI1640；小牛血清；美國Sigma公司生產(chǎn)的噻唑藍(lán)；其余試劑為市場銷售分析純。

1.2 儀器

試驗(yàn)用儀器包括：美國沃特斯公司所生產(chǎn)的沃特斯高效液相色譜儀；英國馬爾文儀器有限分司所產(chǎn)的Nano ZS 90納米激光粒度電位測定儀；瑞士布琦公司所產(chǎn)的旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀；意大利GEA Niro Soavi公司所生產(chǎn)的高壓均質(zhì)機(jī)；上海東富龍所產(chǎn)的Lyo0.4真空冷凍干燥機(jī)；上海和杰科技公司所產(chǎn)的Biomax-10超濾膜Millipore超濾管；上海綠鳥科技公司所產(chǎn)的透析袋，截留相對分子質(zhì)量為14 000；以及JEM-1010透射電子顯微鏡和ZRS-8G智能溶出儀。

2 試驗(yàn)方法

2.1 建立多西他賽含量的測定方法

本文利用HPLC法測量多西他賽和脂質(zhì)體中多西他賽的含量，脂質(zhì)體凍干粉針再添加蒸餾水進(jìn)行重建為脂質(zhì)體膠體溶液，再將其精密移取適量，用甲醇破乳、定容。色譜的條件為：色譜柱250mm×4.6mm，5μm，為LichrospherC18；流動相為60∶40的乙腈-水，流速1mL/min；柱溫30℃；進(jìn)樣量20μL；檢測波長229nm。經(jīng)方法學(xué)考察證明：處于本色譜條件下，多西他賽的測定不會受到輔料的干擾；多西他賽峰面積和藥物質(zhì)量濃度的回歸方程如下所示：

式中：A：多西他賽峰面積；c：藥物質(zhì)量濃度

線性范圍：0.025～5μg/mL

2.2 制備注射用西他賽脂質(zhì)體

先把2g多西他賽和30g注射用蛋黃卵磷脂，還有2.4g DSPE-PEG 2000共同放入茄形瓶，然后將乙醇添加進(jìn)去充分溶解脂質(zhì)。接著將茄形瓶放在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上，溫度調(diào)至40℃，使溶劑減壓蒸發(fā)，從而類脂溶液就結(jié)成一層非常均勻的薄膜狀。把茄形瓶由蒸發(fā)儀中取下后置于干燥箱中，干燥箱為真空，過夜除盡溶劑。再取用pH值為5.5、10mmol/L的磷酸鹽緩沖液（該緩沖液中溶有9%的蔗糖）以及直徑3mm左右的玻璃珠適量，在氮?dú)獾谋Ｗo(hù)作用下旋轉(zhuǎn)洗膜，水化液轉(zhuǎn)至高壓均質(zhì)機(jī)中，以100MPa壓力進(jìn)行5次均質(zhì)，獲取半透明的脂質(zhì)體膠體深液，過濾膜后將濾液分裝于西林瓶。然后進(jìn)行凍干，凍干條件如下：-45℃的預(yù)凍溫度，再進(jìn)行4h保溫；第1次干燥溫度為-30℃，進(jìn)行30h的保溫；第二次的干燥溫度為25℃，再進(jìn)行10h保溫，即可獲取注射用多西他賽脂質(zhì)體，置于4℃環(huán)境保存以備后用。

2.3 外觀性狀

注射用多西他賽脂質(zhì)體外觀為白色完整塊狀，色澤均一且外形飽滿。取用一瓶多西他賽凍干脂質(zhì)體，加入5mL水后室溫環(huán)境搖勻，即可獲得半透明的藍(lán)色乳光狀膠體。

2.4 測定多西他賽脂質(zhì)體的載藥量及包封率

因?yàn)槎辔魉惖娜芩暂^差，因此將其進(jìn)行水合重建時，在未經(jīng)包封的情況下，多西他賽呈藥物晶體的形式析出，將物晶體進(jìn)行過濾去除，水中所殘留的即為包裹多西他賽脂質(zhì)體及未少量未包裹的游離藥物。取用一瓶凍干脂質(zhì)體，將5mL水加入其中進(jìn)行水合重建，再用5%的葡萄糖進(jìn)行稀釋，直至濃度為0.5mg/mL，即臨床給藥濃度，過濾后取用續(xù)濾液4mL，放入超濾管后進(jìn)行超濾處理，設(shè)定轉(zhuǎn)速3000r/min，離心轉(zhuǎn)20min，將下清液收集起來直接HPLC進(jìn)樣。同時要取利用過濾膜過濾前的脂體混懸液2mL以及濾液2mL，將二者分別放在規(guī)格為10mL的量瓶中，利用甲醇定容，通過超聲促使其完全揮發(fā)，再分取20μL進(jìn)樣，其濃度計(jì)算方法為將所得峰面積代入標(biāo)準(zhǔn)曲線，則包封率可表達(dá)為下式：

式中：A：過濾膜前脂體混懸液；B：濾液；C：下清液

2.5 體外釋放度對釋放行為的影響

透析袋經(jīng)過預(yù)處理后，置于釋放介質(zhì)中過夜浸泡。將凍干脂質(zhì)體蒸餾水復(fù)溶后，采用5%的葡萄糖稀釋，直至DTX質(zhì)量濃度達(dá)0.5mg/mL。將1mL置于透析袋中，扎緊兩端，后綁在溶出儀小漿上，置于小杯，該小杯內(nèi)盛放100mL的1mol/L水楊酸鈉-pH 7.4 PBS，然后做體外釋放實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)介質(zhì)溫度為（37±0.5）℃，轉(zhuǎn)速100r/min。根據(jù)設(shè)定好的時間間隔取5mL釋放介質(zhì)進(jìn)行濃度的測定，并補(bǔ)充釋放介質(zhì)5mL，HPLC測定DTX在釋放介質(zhì)中的深度，并算出藥物累積釋放百分比。

3 試驗(yàn)結(jié)果[1-4]

3.1 測定多西他賽脂質(zhì)體包封率和載藥量

經(jīng)測定，多西他賽凍干脂質(zhì)體重建后其包封率為99.89%，誤差為±0.06；總脂質(zhì)按照投藥量來計(jì)算，其載藥量為5.7%，誤差為±0.01。

3.2 考察脂質(zhì)體形態(tài)

通過透射電鏡對重建后的脂質(zhì)體進(jìn)行觀察，觀察結(jié)果顯示其大小與粒徑測定儀的檢測結(jié)果接近，并且多數(shù)粒子圓整結(jié)構(gòu)為球形、近球性，并且可以看到非常清晰的、類似指紋環(huán)狀的螺旋結(jié)構(gòu)。

3.3 多西他賽脂質(zhì)體體外釋放度

在未加入血漿時，注射液與脂質(zhì)體的體外釋放行為相接近，在8h以內(nèi)，釋放時間越長釋放量會隨之增加，擬合釋放度數(shù)據(jù)，與Higuchi方程相符，釋放方程為別表達(dá)如下，其中脂質(zhì)體釋放方程式為：

注射液釋放方程式為：

而在8h以后，無論是脂質(zhì)體還是注射液，釋放均達(dá)到一定的平臺期，時間變化對釋放量的影響不再明顯。脂質(zhì)體與注射液在加入血漿后，其釋放量均有明顯降低，在8h以內(nèi)二者的釋放行為差異顯著，脂質(zhì)體1h內(nèi)的釋放為0，而注射液在0.5h內(nèi)釋放為0。擬合釋放數(shù)據(jù)，與Higuchi方程相符，其方程表達(dá)式分別如下，其中脂質(zhì)體：

注射液：

在8～24h以內(nèi)，二者的釋放行為差異不明顯。

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R979.1

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1671-8194（2011）23-0232-02