紫甘薯葉總貢酮對(duì)四氯化碳致小鼠慢性肝損作的保護(hù)作

呂曉玲，陶東川，馬天嬌，劉迎旺，溫 娟，張新偉

(天津科技大學(xué)食品工程與生物技術(shù)學(xué)院，天津300457)

紫甘薯葉總貢酮對(duì)四氯化碳致小鼠慢性肝損作的保護(hù)作

呂曉玲，陶東川*，馬天嬌，劉迎旺，溫 娟，張新偉

(天津科技大學(xué)食品工程與生物技術(shù)學(xué)院，天津300457)

通過(guò)腹腔注射7%的CCl4制備慢性肝損傷小鼠模型，分別用3種不同濃度的紫甘薯葉總黃酮(FPSPL)進(jìn)行治療，檢測(cè)小鼠肝臟指數(shù)(LI)，血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)活性，白蛋白(ALB)和總蛋白(TP)含量，肝組織勻漿超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量，研究了FPSPL對(duì)小鼠慢性肝損傷的保護(hù)作用。結(jié)果表明，F(xiàn)PSPL能顯著降低小鼠LI，降低血清ALT和AST活性，提高血清ALB和TP含量，提高肝組織SOD活性，降低MDA含量。FPSPL對(duì)四氯化碳導(dǎo)致的小鼠慢性肝損傷具有保護(hù)作用。

紫甘薯葉總黃酮，CCl4，慢性肝損傷

旋花科草本植物紫甘薯是近年開(kāi)發(fā)出的一類(lèi)特色的甘薯品種，莖葉中黃酮、多糖等活性成分含量較高。FPSPL是從紫甘薯葉中提取、純化出來(lái)的總黃酮。文獻(xiàn)報(bào)道，總黃酮具有抗氧化［1］、抗衰老［2］、降血糖［3］、護(hù)肝［4］等功效。實(shí)驗(yàn)從護(hù)肝的角度，探討了FPSPL對(duì)CCl4導(dǎo)致的小鼠慢性肝損傷的影響，為紫甘薯葉保健品的開(kāi)發(fā)利用提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

FPSPL 乙醇提取，AB－8大孔吸附樹(shù)脂純化，總黃酮含量72.3%;聯(lián)苯雙酯滴丸 北京協(xié)和藥廠，批號(hào)09040104;ALT、AST、TP、ALB、SOD、MDA 試劑盒

南京建成生物工程研究所，批號(hào)均為20100310;昆明種雄性小鼠 SPF級(jí)，體重(20±2)g，解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào):SCXK－(軍)2007－004;其它試劑 均為國(guó)產(chǎn)分析純。

Multiskan Spectrum酶標(biāo)儀、991#4超低溫冰箱美國(guó)Thermo公司;SB25－12DTDN型超聲波清洗器、超聲波細(xì)胞粉碎機(jī) 寧波新芝生物科技股份有限公司;電熱恒溫水浴鍋 天津歐諾儀器儀表有限公司;PB－10酸度計(jì) 德國(guó)賽多利斯股份公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 藥物配制 a.用蒸餾水將FPSPL配制成5、10、20mg/mL 濃度的溶液［5］。b.用蒸餾水將聯(lián)苯雙酯滴丸配制成20mg/mL濃度的懸浮液。c.用橄欖油將CCl4配制成 7%(V/V)的 CCl4－橄欖油溶液［6］。

1.2.2 動(dòng)物分組與建模 小鼠適應(yīng)1周后，按體重隨機(jī)分為空白組、模型組、陽(yáng)性組(聯(lián)苯雙酯組)、FPSPL高、中、低劑量組，每組12只［7］。采用腹腔CCl4注射建立小鼠慢性肝損傷模型?？瞻捉M小鼠腹腔注射橄欖油，其余各組均腹腔注射7%的CCl4－橄欖油溶液，10mL/kg·bw，每周 2 次，持續(xù) 6 周［8］。建模期間不限飲食量，自由飲水。

1.2.3 藥物處理 建模第2周開(kāi)始灌胃［9］。空白組、模型組灌胃蒸餾水，陽(yáng)性組灌胃聯(lián)苯雙酯懸浮液，F(xiàn)PSPL高、中、低劑量組分別灌胃5、10、20mg/mL濃度的FPSPL溶液。10mL/kg·bw，1d 1次，持續(xù)5周。

1.2.4 指標(biāo)檢測(cè) 末次給藥后，小鼠禁食不禁水24h，摘眼球取血，離心取血清，按照試劑盒說(shuō)明書(shū)采用賴(lài)氏法測(cè)定ALT和AST活性、采用溴甲酚綠比色法測(cè)定ALB含量、采用考馬斯亮蘭法測(cè)定TP含量;取肝臟稱(chēng)重，計(jì)算肝臟指數(shù)LI(每10g體重的肝臟克數(shù))，制備10%的肝組織勻漿，按照試劑盒說(shuō)明書(shū)采用黃嘌呤氧化酶法測(cè)定SOD活性、采用硫代巴比妥酸法測(cè)定MDA含量。

2 結(jié)果與分析

2.1 FPSPL對(duì)小鼠LI的影響

如表1所示，模型組小鼠LI極顯著高于空白組(P＜0.01)。與模型組比較，陽(yáng)性組與FPSPL各劑量組LI均極顯著降低，說(shuō)明FPSPL對(duì)慢性肝損傷小鼠的LI升高有明顯的抑制作用。

表1FPSPL對(duì)小鼠LI的影響(±s，n=8)

表1FPSPL對(duì)小鼠LI的影響(±s，n=8)

注:與空白組比較:**P＜0.01;與模型組比較:##P＜0.01;表2同。

組別 LI(g/10g) 組別 LI(g/10g)空白組 4.12±0.58 高劑量組4.67±0.48##模型組 5.90±0.19** 中劑量組 5.07±0.29##陽(yáng)性組 4.94±0.90## 低劑量組5.12±0.47##

2.2 FPSPL對(duì)小鼠血清ALT和AST活性的影響

肝臟中的細(xì)胞色素 P450可將 CCl4激活為·CCl3和·Cl，這些自由基經(jīng)過(guò)一系列復(fù)雜的反應(yīng)，可以破壞肝臟細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)，使其通透性增加，導(dǎo)致ALT、AST等轉(zhuǎn)氨酶滲入血液，使血清中轉(zhuǎn)氨酶的活性顯著升高［10］。

如表2所示，模型組小鼠血清中ALT與AST活性顯著高于空白組(P＜0.01)，說(shuō)明小鼠慢性肝損傷模型建立成功。與模型組比較，陽(yáng)性組與FPSPL各劑量組均可顯著抑制CCl4導(dǎo)致的血清ALT、AST活性升高，其中高、中劑量組對(duì)ALT活性的降低效果更顯著。說(shuō)明FPSPL能保護(hù)肝臟細(xì)胞膜的穩(wěn)定性，抑制CCl4導(dǎo)致的小鼠血清中ALT、AST活性升高。

表2FPSPL對(duì)小鼠血清ALT和AST活性的影響(±s，n=8)

表2FPSPL對(duì)小鼠血清ALT和AST活性的影響(±s，n=8)

組別 ALT(U/L) AST(U/L)空白組19.44±11.56 37.76±24.30模型組 528.61±60.90** 245.97±16.68**陽(yáng)性組 203.24±66.47## 178.95±40.17##高劑量組 397.57±31.11## 135.98±41.38##中劑量組 423.69±16.55## 165.19±26.89##低劑量組455.84±12.71## 199.17±18.50##

2.3 FPSPL對(duì)小鼠血清ALB和TP含量的影響

ALB幾乎全部由肝細(xì)胞合成，肝細(xì)胞受損，ALB含量必然降低，一般ALB降低程度與肝細(xì)胞受損程度成正比。因此，ALB含量變化可以作為了解肝臟功能情況的一個(gè)參考指標(biāo)。

如表3所示，模型組小鼠ALB和TP含量極顯著低于空白組(P＜0.01)。與模型組比較，陽(yáng)性組與FPSPL高、中劑量組均可顯著抑制CCl4導(dǎo)致的血清ALB含量降低，且FPSPL高劑量組對(duì)ALB含量的升高效果最顯著;陽(yáng)性組與FPSPL各劑量組均可顯著抑制CCl4導(dǎo)致的血清TP含量降低。說(shuō)明FPSPL對(duì)CCl4導(dǎo)致的小鼠血清ALB、TP含量降低有明顯的抑制作用。

表3 FPSPL對(duì)小鼠血清ALB和TP含量的影響(±s，n=8)

表3 FPSPL對(duì)小鼠血清ALB和TP含量的影響(±s，n=8)

注:與空白組比較:**P＜0.01;與模型組比較:#P＜0.05，##P＜0.01;表4同。

組別 ALB(mg/mL) TP(mg/mL)空白組52.83±1.06 0.71±0.03模型組 45.47±2.26** 0.64±0.05**陽(yáng)性組 50.27±1.61## 0.70±0.03#高劑量組 50.34±3.83## 0.70±0.03#中劑量組 48.10±1.96# 0.69±0.05#低劑量組46.21±1.88 0.69±0.05#

2.4 FPSPL對(duì)小鼠肝勻漿SOD活性和MDA含量的影響

SOD是氧自由基清除劑，MDA是脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)的最終產(chǎn)物［11］。肝細(xì)胞受損時(shí)，SOD活性降低，而MDA含量升高。兩者的變化情況可以反映肝臟細(xì)胞損傷程度和脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)的強(qiáng)弱程度。

如表4所示，模型組小鼠SOD活性極顯著低于空白組(P＜0.01)，MDA極顯著高于空白組(P＜0.01)。與模型組比較，陽(yáng)性組與FPSPL各劑量組SOD顯著升高，MDA顯著降低，且FPSPL高劑量組對(duì)MDA含量的降低效果最顯著。說(shuō)明FPSPL有顯著的清除自由基、抗脂質(zhì)過(guò)氧化的作用。

表4 FPSPL對(duì)小鼠肝勻漿SOD活性和MDA含量的影響(±s，n=8)

表4 FPSPL對(duì)小鼠肝勻漿SOD活性和MDA含量的影響(±s，n=8)

組別 SOD(U/mgprot) MDA(nmol/g)空白組132.26±18.30 0.66±0.15模型組 60.20±10.69** 1.86±0.22**陽(yáng)性組 82.85±10.53## 1.00±0.19##高劑量組 96.49±14.75## 0.66±0.13##中劑量組 76.52±6.53# 1.45±0.30##低劑量組75.70±9.26# 1.56±0.18#

3 結(jié)論

與慢性肝損傷小鼠比較，F(xiàn)PSPL可以顯著降低LI，降低血清中ALT和AST活性，升高ALB和TP含量，升高肝組織中SOD活性，降低MDA含量。表明FPSPL對(duì)CCl4導(dǎo)致的小鼠慢性肝損傷有一定的保護(hù)作用，作用機(jī)理可能是通過(guò)提高氧自由基清除能力，抑制脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，維持肝臟細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)完整，從而起到護(hù)肝的作用。

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Protective effect of total flavonoids of purple sweet potato leaves on carbon tetrachloride－induced chronic liver injury in mice

LV Xiao－ling，TAO Dong－chuan*，MA Tian－jiao，LIU Ying－wang，WEN Juan，ZHANG Xin－wei
(College of Food Engineering and Biotechnology，Tianjin University of Science and Technology，Tianjin 300457，China)

The protective effect of total flavonoids of purple sweet potato leaves(FPSPL)on carbon tetrachlorideinduced chronic liver injury in mice was studied.The chronic liver injury model was induced by administration of 7%carbon tetrachloride and mice were treated of FPSPL at 50，100 or 200mg/kg to examine the changes of liver index(LI)，alanine aminotrasferase(ALT)，aspartate aminotrasferase(AST)，albumin(ALB)，total protein(TP)in serum，superoxide dismutase(SOD)and malondialdehyde(MDA)in liver homogenate.The results showed that FPSPL significantly decreased LI，the activity of serum ALT and AST，the level of MDA in liver homogenate.It also increased the concentration of serum ALB and TP，the activity of SOD in liver homogenate.FPSPL had protective effect on mice with chronic liver injury induced by carbon tetrachloride.

FPSPL;CCl4;chronic liver injury

TS201.4

A

1002－0306(2011)06－0371－03

2010－07－20 *通訊聯(lián)系人

呂曉玲(1960－)，女，碩士，教授，博士生導(dǎo)師，主要從事食品添加劑與營(yíng)養(yǎng)調(diào)控方面的研究。