HPLC測(cè)定谷紅注射液中羥基紅花黃色素A的含量

姜茁松，王麗娜*，耿瑋

（吉林省食品藥品檢驗(yàn)所，吉林 長(zhǎng)春 130033）

HPLC測(cè)定谷紅注射液中羥基紅花黃色素A的含量

姜茁松，王麗娜*，耿瑋

（吉林省食品藥品檢驗(yàn)所，吉林 長(zhǎng)春 130033）

目的：建立HPLC測(cè)定谷紅注射液中羥基紅花黃色素A含量的分析方法。方法：采用Agilent ExtendC18（4.6mm×250mm，5μm）色譜柱，以乙腈－含0.5%三乙胺的1%冰醋酸溶液（9∶91）為流動(dòng)相，流速：1.0m L·m i n－1，檢測(cè)波長(zhǎng)：40 3nm，柱溫：35℃。結(jié)果：羥基紅花黃色素A濃度在0.0 0 7936～0.1984m g·m L－1線性關(guān)系良好（r＝0.9999，n＝6），平均加樣回收率為99.7%（RSD＝1.3%，n＝9）。結(jié)論：本方法操作簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，重復(fù)性好，可有效控制該制劑的質(zhì)量。

HPLC；谷紅注射液；羥基紅花黃色素A

谷紅注射液為中西藥復(fù)方制劑，現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)為國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn) （試行）WS-10001-（HD-1506）-2004，其處方由紅花提取液、乙酰谷酰胺及適量輔料組成，其產(chǎn)品規(guī)格為5，10，20m L，類別為腦功能改善藥，用于治療腦血管疾病如腦供血不足、腦血栓、腦栓塞及腦出血恢復(fù)期；還可用于治療冠心病、脈管炎等。該制劑標(biāo)準(zhǔn)中收載了液相色譜法測(cè)定乙酰谷酰胺含量的方法，對(duì)紅花提取液尚未規(guī)定含量控制方法。紅花為活血化瘀代表藥，常用于治療冠心病、腦血栓等心腦血管疾病，羥基紅花黃色素A是紅花主要有效成分，具有抗血小板激活因子的作用［1］。本文在參考相關(guān)文獻(xiàn)［2-7］的基礎(chǔ)上，建立了羥基紅花黃色素A的含量測(cè)定方法，旨在全面、有效控制該產(chǎn)品的內(nèi)在質(zhì)量。

1 儀器與試藥

安捷倫110 0型高效液相色譜儀，島津U V-170 0型紫外－可見分光光度計(jì)；Milli-Q超純水系統(tǒng)，SartoriusBT25S型電子天平。

羥基紅花黃色素A對(duì)照品 （中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：111637-200905，供含量測(cè)定用，含量以91.8%計(jì)），谷紅注射液［博安兄弟制藥 （中國(guó)）有限公司，批號(hào)：20090601，20090602，20090603］。甲醇、乙腈均為色譜純，水為超純水，其他試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：Agilent ExtendC18、AgilentHCC18、VenusilMPC18（4.6mm×250mm，5μm）；流動(dòng)相：乙腈－含0.5%三乙胺的1%冰醋酸溶液（9∶91）；流速：1.0m L·m i n－1；柱溫：35℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：403nm；進(jìn)樣量：10μ L。理論板數(shù)按羥基紅花黃色素A峰計(jì)，應(yīng)不低于6000。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

取羥基紅花黃色素A對(duì)照品適量，精密稱定，加水制成每1m L中含0.0 4m g的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備

精密量取本品5m L，置25m L量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.4 空白干擾試驗(yàn)

按處方量 （不含紅花提取液）制備陰性對(duì)照溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果見圖1，陰性對(duì)照溶液不干擾主成分的檢測(cè)。

2.5 線性關(guān)系考察

精密稱取羥基紅花黃色素A對(duì)照品9.92m g，置50m L量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液；分別精密量取0.4，1.0，2.0，6.0，8.0m L，置10m L量瓶中，加水稀釋制成0.0 0 796，0.0 1984，0.0 3968，0.119，0.1587m g·m L－1系列濃度的溶液。按2.1項(xiàng)下色譜條件，取上述溶液及貯備液各進(jìn)樣10μ L，以濃度X（mg·m L－1）為橫坐標(biāo)，以峰面積Y為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，回歸方程為Y＝2.8×107X＋7326，r＝0.9999，結(jié)果表明在0.0 796～1.984μ g呈良好的線性關(guān)系。

圖1 谷紅注射液及對(duì)照品HPLC圖

2.6 精密度試驗(yàn)

精密吸取濃度為36.36μ g·m L－1的羥基紅花黃色素A對(duì)照品溶液10μ L，注入液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣6次，羥基紅花黃色素A峰面積的R S D＝0.1%（n＝6）。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批號(hào)谷紅注射液（20090601），按2.3項(xiàng)下制備供試品溶液并測(cè)定，計(jì)算平均含量為0.2522m g·m L－1（n＝6），R S D＝0.8%。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一供試品溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件，分別于0，2，5，10，12h進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果羥基紅花黃色素A峰面積的R S D＝0.8%（n＝5）。

2.9 加樣回收率試驗(yàn)

精密量取已知含量的谷紅注射液樣品（20090 60 1，0.2522m g·m L－1）9份，各1m L，分別置5m L量瓶中，再分別精密量取羥基紅花黃色素A對(duì)照品溶液（0.0 992m g·m L－1）2，2.5，3.0m L各3份，分別加入到上述9個(gè)量瓶中，加水定容至刻度，再分別取上述溶液各10μ L注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按照擬定的方法測(cè)定含量并計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。

2.10 樣品測(cè)定

取3批樣品，各2份，分別制備樣品溶液，進(jìn)行測(cè)定，按外標(biāo)法計(jì)算，測(cè)定結(jié)果見表2。

3 討論

3.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

取羥基紅花黃色素對(duì)照品適量，加水制成每1m L中含10μ g的溶液，在210～450nm波長(zhǎng)掃描，結(jié)果在40 3nm波長(zhǎng)處有最大吸收，故選擇40 3nm為本實(shí)驗(yàn)的測(cè)定波長(zhǎng)。

表1 羥基紅花黃色素A回收率試驗(yàn)

表2 谷紅注射液樣品中羥基紅花黃色素A含量測(cè)定

3.2 流動(dòng)相的選擇

《中國(guó)藥典》2010年版一部收載了“紅花”藥材含量測(cè)定方法，流動(dòng)相為甲醇－乙腈－0.7%磷酸溶液 （26∶2∶72），該色譜條件下色譜峰易拖尾，對(duì)色譜柱的選擇性較高，而采用乙腈－含0.5%三乙胺的1%冰醋酸溶液 （9∶91）的流動(dòng)相組成，改善了色譜峰的對(duì)稱性，降低了對(duì)色譜柱的選擇性。

3.3 不同色譜柱考察

取同一供試品溶液 （20090601）在不同品牌的十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱（Agilent ExtendC18、AgilentHCC18、VenusilmPC18，規(guī)格皆為4.6mm× 250mm，5μm）上測(cè)定，羥基紅花黃色素色譜峰的分離度均良好，測(cè)定結(jié)果基本一致，含量均值為0.25m g·m L－1，RSD＝0.6%（n＝6）。說明方法的耐用性較好。

實(shí)驗(yàn)表明本方法操作簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，可有效控制該制劑的質(zhì)量。3批谷紅注射液中羥基紅花黃色素含量有一定差距，提示應(yīng)通過控制原料 （如紅花提取液）的質(zhì)量，從而實(shí)現(xiàn)該注射劑質(zhì)量穩(wěn)定。

［1］臧寶霞，金鳴，李金榮.羥基紅花黃色素A抗凝作用的研究［J］.中草藥，2007，38（5）：741-743.

［2］張艷利，楊興鑫，李曉妮.HPLC法同時(shí)測(cè)定舒心通腦膠囊中羥基紅花黃色素A和梔子苷含量［J］.藥物分析雜志，2009，（12）：20 64-20 66.

［3］彭紅，付建武，余日躍.復(fù)方當(dāng)歸注射液中羥基紅花黃色素A和阿魏酸的含量測(cè)定［J］.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2009，20（12）：2925-2927.

［4］李莉.高效液相色譜法測(cè)定紅藥片中羥基紅花黃色素A的含量［J］.海峽藥學(xué)，2009，21（7）：10 9-110.

［5］王煥蕓，董立森，武鑫，等.反相高效液相色譜法測(cè)定紅花清肝十三味丸中羥基紅花黃色素A的含量［J］.中國(guó)新藥雜志，20 0 8，17（11）：952-953.

［6］王玉華，郝美玲，王偉.HPLC測(cè)定蒙成藥檀香清肺二十味丸中羥基紅花黃色素A的含量［J］.中成藥，20 0 8，30（1）：143-144.

［7］國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典［S］.一部.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：141.

Determination of the Hydroxysafflor Yellow A Contents of Safflower Extract and Aceglutamide Injection by HPLC

JiangZhuo-song，Wang Li-na，Geng Wei
（Jilin province Institute for Drug and Food Control，Changchun130033，China）

Objective：To develop a HPLC method for determination of hydroxysafflor yellow A in Safflower ex-tract and Aceglutmide injection.MethodsThe column was Agilent etend C18（4.6mm×250mm，5μm），the mo-bile phase consisted of acetonitrile and 0.5%triethylamine of1%glacial acetic acid solution，the flow rate was1.0mL·min－1，the detection wavelength was 403 nm，the column temperature was35℃.Results：The linear range of hydroxysafflor yellow A was0.007936～0.1984m g·m L－1（r＝0.9999，n＝6）.Thave rage sample recovery was 99.7%（R S D＝1.3%，n＝9）.ConclusionThe method is simple，accurate，stable and reliable.It can be used for quality control of Safflower extract and Aceglutamide injection.

HPLC；Safflower extract and Aceglutamide injection；Hydroxysafflor yellow A

*王麗娜，E-mail：linaw9213＠sina.com

2011-0 5-23）