維吾爾藥阿育魏實(shí)中一個(gè)單萜糖苷的譜學(xué)分析

馬慶東1，李國(guó)玉1，2，王航宇1，2，張珂1，王金輝1，2，3*

（1.石河子大學(xué)藥學(xué)院，新疆 石河子 832002；2.教育部省部共建新疆特種植物藥資源重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，新疆 石河子 8320 02；3.沈陽藥科大學(xué)中藥學(xué)院，遼寧 沈陽 110016）

維吾爾藥阿育魏實(shí)中一個(gè)單萜糖苷的譜學(xué)分析

馬慶東1，李國(guó)玉1，2，王航宇1，2，張珂1，王金輝1，2，3*

（1.石河子大學(xué)藥學(xué)院，新疆 石河子 832002；2.教育部省部共建新疆特種植物藥資源重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，新疆 石河子 8320 02；3.沈陽藥科大學(xué)中藥學(xué)院，遼寧 沈陽 110016）

目的：確證維吾爾藥阿育魏實(shí)中一個(gè)單萜糖苷類化合物的結(jié)構(gòu)。方法：采用硅膠柱色譜、開放式ODS柱色譜及高效液相色譜分離化合物，運(yùn)用U V、I R、Nm R、C D及M S技術(shù)確定該化合物結(jié)構(gòu)。結(jié)果：對(duì)該化合物結(jié)構(gòu)的譜學(xué)特征進(jìn)行全歸屬。結(jié)論：該化合物鑒定為6-羥基麝香草酚3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷，首次從該植物分離得到。

阿育魏實(shí)；單萜糖苷；6-羥基麝香草酚3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷；光譜分析

阿育魏實(shí)為《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·維吾爾藥分冊(cè)》（1999年）收載品種，系傘形科糙果芹屬植物阿育魏Trachyspermum ammi（L.）Sprague的干燥成熟果實(shí)，廣泛分布于非洲至南亞，我國(guó)新疆喀什、和田等地區(qū)引種栽培，具有抗炎、抗菌、抗腫瘤、降血脂、降血壓、驅(qū)腸蟲、助消化、促流產(chǎn)等多種藥理活性［1-3］。單萜糖苷類化合物是其主要活性成分之一，苷元母核是麝香草酚的衍生物，是一類結(jié)構(gòu)比較特殊的單環(huán)單萜天然產(chǎn)物。

作者從阿育魏實(shí)乙醇提取物的醋酸乙酯萃取部位分離得到1個(gè)化合物，經(jīng)有機(jī)波譜分析，確定它的結(jié)構(gòu)為6-羥基麝香草酚3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷，首次從該植物分離得到。

1 儀器與材料

沃特斯高效液相色譜儀（HPLCWaters 2695S ezarationsmodule），ShimadzuUV-2401PC紫外-可見分光光度計(jì)，Shimadzu IRAFFINITY-1紅外光譜儀，BRUKER-APX-600型核磁共振光譜儀測(cè)定（TMS作內(nèi)標(biāo)），BiologicmOS-450圓二色譜儀，WatersL CTPremier XEtime-of-flying質(zhì)譜儀。薄層色譜用硅膠GF254、柱色譜用硅膠（200～300目）均為青島海洋化工有限公司生產(chǎn)。石油醚（沸程60～90℃）、丙酮、三氯甲烷、甲醇等均為分析純。

阿育魏實(shí)藥材購自于新疆喀什，經(jīng)石河子大學(xué)藥學(xué)院譚勇教授鑒定為傘形科糙果芹屬植物阿育魏Trachyspermum ammi（L.）Sprague的干燥成熟果實(shí)，標(biāo)本號(hào)N o.20071016008，保存在石河子大學(xué)藥學(xué)院。

2 提取分離

取干燥阿育魏實(shí)4.2kg，依次用95%和70%乙醇10倍、10倍、8倍量浸泡1h，回流提取3h，60℃減壓回收溶劑得浸膏653g，再分別依次用石油醚、三氯甲烷、醋酸乙酯、正丁醇萃取，得石油醚萃取部分浸膏（90g），三氯甲烷萃取浸膏（29g），醋酸乙酯萃取浸膏（29g），正丁醇萃取浸膏（93g）。醋酸乙酯部分經(jīng)200～300目硅膠柱色譜分離，以三氯甲烷－甲醇溶劑系統(tǒng)（體積比為100∶0～0∶100）進(jìn)行梯度洗脫。100∶5洗脫流分經(jīng)硅膠柱色譜分離，以三氯甲烷－丙酮－甲醇系統(tǒng)進(jìn)行梯度洗脫，得到的100∶5∶5～100∶6∶6流分經(jīng)開放ODS柱色譜、高效液相色譜分離得到該化合物（50.3mg）。

3 譜學(xué)分析

3.1 紫外光譜圖

化合物紫外光譜圖中（CH3OH）205nm處的峰屬于E1吸收帶，由苯環(huán)烯鍵π-π*躍遷產(chǎn)生，216nm處的峰，屬于苯環(huán)E2吸收帶，由苯環(huán)共軛烯鍵ππ*躍遷產(chǎn)生，285nm處的寬峰屬于苯環(huán)B吸收帶，由苯環(huán)的π-π*躍遷產(chǎn)生。苯環(huán)的B帶顯著紅移，提示苯環(huán)取代較為復(fù)雜。

3.2 紅外光譜圖

化合物紅外光譜圖中（KBr）1664.57cm－1處得吸收峰為苯環(huán)骨架振動(dòng)。3450.65cm－1，3369.64cm－1處的吸收峰為羥基的吸收峰。1199.72cm－1處的吸收峰為烷基芳基醚的＝C－O－C上的不對(duì)稱＝C－O伸縮振動(dòng)吸收峰。2850.79和2956.87處的吸收峰為甲基的特征吸收峰。

3.3 NmR譜圖

圖11H-NMR（600MHz，CD3OD）譜中可見19個(gè)氫信號(hào)。其中δ 4.74（1H，d，J＝7.2H z，H-1′）為β-D-葡萄糖基端基氫特征信號(hào)，提示化合物中含葡萄糖基結(jié)構(gòu)。除去葡萄糖基所有的-C H-氫信號(hào)，還剩余12個(gè)氫信號(hào)，其中δ6.95（1H，s，H-5），6.64（1H，s，H-2）為苯環(huán)氫信號(hào)，提示苯環(huán)為1，2，4，5-四取代；δ2.16（3H，s，H-7）為甲基氫特征信號(hào)，其化學(xué)位移值提示甲基與苯環(huán)直接相連；δ 3.50（1H，m，H-8）和1.19（6H，d，J＝6.6H z，H-9，10）為異丙基氫特征信號(hào)；這些氫信號(hào)與本課題組前期研究分離得到的麝香草酚氫信號(hào)進(jìn)行比較，推測(cè)基本結(jié)構(gòu)為6-取代的麝香草酚。

圖1化合物的1H-NmR（60 0MH z，C D3O D）譜圖

圖2 化合物的13C-Nm R（150M H z，C D3O D）譜支持了這種推測(cè)，譜圖共給出16個(gè)碳信號(hào)，其中δ 151.8（C-6），149.2（C-3），138.2（C-4），123.2（C-1），120.3（C-2），113.0（C-5）為麝香草酚苯環(huán)碳信號(hào)，δ10 4.4（C-1′），78.3（C-3′），78.0（C-5′），75.2（C-2′），71.6（C-4′），62.7（C-6′）為β-D-吡喃葡萄糖基特征碳信號(hào)，δ 27.0（C-8），23.7（C-9），23.6（C-10），16.1（C-7）為4個(gè)烷基碳信號(hào)。

圖2 化合物的13C-NmR（150MH z，C D3O D）譜圖

圖3 化合物的HmB C譜圖

然而，僅依據(jù)以上信息難以確定葡萄糖基的位置。于是對(duì)化合物進(jìn)行了Hm B C測(cè)試。圖3Hm B C譜中可見葡萄糖基端基氫δH4.74與δC149.2（C-3）存在遠(yuǎn)程相關(guān)，故確定葡萄糖基位于麝香草酚的C-3位。此外，δH1.19（H-9，10）與δC27.0（C-8），δH3.50（H-8）與δC149.2，138.2，113.0（C-3，4，5）存在遠(yuǎn)程相關(guān)，以及δH2.16（H-7）與δC123.2，120.3，151.8（C-1，2，6）存在遠(yuǎn)程相關(guān)，證實(shí)了化合物的母核為6-取代的麝香草酚。1D-Nm R數(shù)據(jù)歸屬及Hm B C相關(guān)見表1及圖4。

表1 化合物的1H-NMR（600MHz）and13C-NMR（150MHz）數(shù)據(jù)（C D3OD）

圖4 化合物HmBC譜中主要的遠(yuǎn)程相關(guān)

3.4 CD譜圖

圖5 化合物的C D譜圖

3.5 HR-EI-TOF-MS譜圖

化合物的質(zhì)譜圖中可見準(zhǔn)分子離子峰［M-H］－m/z 327.1441（C16H23O7：calcd.for 327.1444），［2MH］－m/z 655.2977（C32H47O14：calcd.for 655.2966），［2M＋H］＋m/z657.3141（C32H49O14：calcd.for657.3122），故確定化合物的分子式為C16H24O7。

4 結(jié)論

綜合UV、IR、NMR、HPLC-MS分析結(jié)果可知，該化合物分子式為C16H24O7，鑒定為6-羥基麝香草酚3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷，首次從該植物中分離得到，結(jié)構(gòu)式見圖4。

［1］B.Singh，R.K.Kale.Chemomodulatory effect of Trachy-spermum ammi on murine skin and forestomach papillomagen-esis［J］.Nutrition and Cancer，2010，62（1）：74-84.

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［4］J.Kitajima，T.Ishikawa，A.Urabe，et al.Monoterpenoids and their glycosides from the leaf of thyme［J］.Phytoc hemis try，2004，65：3279-3287.

Spectral Analysis of a Monoterpene Glycoside from the Seeds of Trachyspermum ammi（L.）Sprague，a Traditional Uygur medicine

M
AQing-dong1，LIGuo-yu1，2，WANG Hang-yu1，2，ZHANGKe1，WAN GJin-hui1，2，3
（1．School of Pharmacy，Shihezi University，Shihezi 832002，China；2.Key Laboratory of Phytomedicine Resoureces＆Modermization of Tcm，Shihezi 832002，China；3.School of Chinese materica medica，Shenyang Pharmaceutical University，Shen yang110016，China）

Objective：To identify a monoterpene glycoside from the seeds of Trachyspermum ammi（L.）Sprague.Methods：The compound was isolated by column chromatographic method including silica gel，ODS together with pre-HPLC，and identified by spectral analysis involving UV，IR，NMR and MS.ResultsAll signals of the compound was assigned by above mentioned spectral techniques.ConclusionThe compound was identified as 6-hydroxy-thymol 3-O-β-D-glucopyranoside，and obtained from the title plant for the firs time.

Trachyspermum ammi（L.）Sprague；Monoterpene glycoside；6-hydroxythymol 3-O-β-D-gluco-pyranoside；Spectral analysis

國(guó)家重大科技專項(xiàng)（2010ZX09401-304-104A）

*王金輝，Tel：（0993）2055001，E-mail：tcm＿shz＠yahoo.cn

2011-0 4-29）