凝聚胺法交叉配血的干擾及排除方法研究

陳桂冰 張然 曾蘭英

交叉配血是確定能否輸血的重要依據(jù)。在血型鑒定的基礎(chǔ)上，通過交叉配血試驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)受血者和供血者之間不存在血型不合的抗原—抗體反應(yīng)，以保證受血者的輸血安全。在使用凝聚胺法(MPT)交叉配血時，往往會受到某種原因的干擾而影響凝聚胺法的正常進(jìn)行。

下面以我院46例進(jìn)行凝聚胺法交叉配血的受血者血樣為研究對象，對其凝聚胺法交叉配血的干擾原因及對策分析報告如下。

1 材料與方法

1.1 一般材料

選取我院2008年1月～2010年12月受血者血樣46例，男25例，女21例，年齡38～62歲，平均50歲，病例分類上消化道出血患者19例，多發(fā)性骨折患者16例，尿毒癥患者患者11例。凝聚胺試劑(低離子介質(zhì)，凝聚胺溶液，重懸液)為武漢生物科技有限公司生產(chǎn)。置室溫貯存，未開封者2～10℃貯存，有效期為2年。離心機(jī)型號為上海離心機(jī)械研究所XTL-4.7型離心機(jī)。

1.2 標(biāo)本種類

抽取靜脈血4ml待凝固后分離血清，將細(xì)胞配成5%鹽水懸液將供血者血樣以同樣方法分離血清(漿)和紅細(xì)胞懸液。

1.3 操作步驟

將供受者紅細(xì)胞用生理鹽水配成5%的細(xì)胞懸液。爾后取加樣量血清2滴，紅細(xì)胞懸液1滴。主管中為受血者血清+供者紅細(xì)胞懸液，次管中為受者紅細(xì)胞懸液+供者血清。然后各管分別加低離子介質(zhì)0.6ml混勻置室溫1分鐘，加凝聚胺溶液2滴，混勻，置室溫15秒，然后用離心機(jī)開啟3000轉(zhuǎn)/分，離心時間為18秒，棄上清液，管底保留約2滴液體。輕搖試管，觀察是否形成凝塊。凝塊在1分鐘內(nèi)分散則是非特異性聚集，試驗(yàn)結(jié)果（-），供受者血液配合；若凝集為不同強(qiáng)度的凝塊，則是紅細(xì)胞抗原抗體結(jié)合的特異性反應(yīng)，試驗(yàn)結(jié)果（+），供受者血液不配合。檢測結(jié)果因在3分鐘內(nèi)讀出。

1.4 干擾原因及對策

1.4.1 溫度及氣候影響

在冬天氣溫較低時，某些病人血清中含有冷凝集素而導(dǎo)致細(xì)胞自凝，交叉配血假陽性；對此現(xiàn)象可用37℃～40℃生理鹽水洗滌紅細(xì)胞并置37℃水溶中輕輕搖動然后觀察結(jié)果。

1.4.2 臨床藥物影響

肝素加入凝聚胺試劑后，不能引出可逆聚合，對此多加4滴polybrene溶液中和肝素，可產(chǎn)生可逆聚合，消除干擾。輸入低分子右旋糖酐注射液后形成凝集較疏松的假凝集。對此應(yīng)將患者血清用生理鹽水作適當(dāng)稀釋后，再進(jìn)行配血實(shí)驗(yàn)，假凝集現(xiàn)象消失。出血性疾病患者加入凝聚胺試劑后不出現(xiàn)可逆聚合，增加試劑量后反應(yīng)仍未出現(xiàn)。對此應(yīng)在止血藥的生物利用期及半衰期后重新抽取患者血樣本消除干擾。

1.4.3 試劑本身因素

紅細(xì)胞懸液為5%為宜，過濃或過淡可使抗原抗體比例不適當(dāng)，反應(yīng)不明顯易誤判。

1.4.4 操作干擾

試管，滴管吸頭和玻片受污染，操作流程不按順序、離心時間及速度控制掌握不準(zhǔn)等都會影響干擾，對此器材必須清潔干燥，防止溶血。操作方法應(yīng)按規(guī)定，先加血清，然后再加紅細(xì)胞懸液，以便容易核實(shí)是否漏加血清。離心時間及速度控制上應(yīng)適中，以防假陽性或假陰性結(jié)果。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)量資料以±s表示，且進(jìn)行t檢驗(yàn)，以P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

凝聚胺法交叉配血受溫度氣候、臨床藥物、試劑及操作因素干擾。5例消化道出血患者、4例尿毒癥腎病透析患者未能引出紅細(xì)胞非免疫性可逆聚合。16例多發(fā)性骨折患者出現(xiàn)假凝集（P＜0.05）。見表1。

表1 凝聚胺法交叉配血受溫度、氣候、臨床藥物、試劑及操作因素干擾比較

3 討論

交叉配血試驗(yàn)是用受血者血清與供血者紅細(xì)胞以及受血者紅細(xì)胞與供血者血清交叉，為輸血安全的關(guān)鍵一環(huán)。研究表明血透過程中有交叉感染的可能,導(dǎo)致感染。血透本身也是HCV傳播的重要途徑[1]。凝聚胺法利用低離子介質(zhì)降低溶液的離子強(qiáng)度，減少紅細(xì)胞周圍的陽離子云，促進(jìn)血清抗體與紅細(xì)胞抗原結(jié)合，加入高價陽離子多聚物-凝聚胺溶液后中和紅細(xì)胞表面負(fù)電荷，形成可逆非特異性聚集[2]。

實(shí)踐中得出，凝聚胺交叉試驗(yàn)易受到來自溫度氣候、臨床藥物、試劑及操作因素的干擾[3]。通過本組結(jié)果分析得出，止血藥物在水溶液中帶有負(fù)電荷促使紅細(xì)胞膜表面的Zete電位上升，增加紅細(xì)胞間排斥力。肝素在水溶液中具有強(qiáng)負(fù)電荷，能與一些陽離子結(jié)合生成絡(luò)合物，與血標(biāo)本中帶正電荷的纖維蛋白原和血漿球蛋白結(jié)合，最后導(dǎo)致液體中紅細(xì)胞非免疫性的可逆聚合反應(yīng)受到抑制[4]。此外應(yīng)區(qū)分紅細(xì)胞的疊連現(xiàn)象與凝集現(xiàn)象。前者滴加生理鹽水2滴混勻后即可分散成渾濁狀，而后者不改變。

綜上，針對凝聚胺法交叉配血的干擾原因，結(jié)合病史仔細(xì)分析，以便及時準(zhǔn)確地排除干擾，確保交叉配血操作的成功及輸血安全。

[1] Le Pogam S, Le Chapois D, Christen R, et al. Hepatitis C in ahemodialysis unit: molecular evidence for nosocomial transmission[J].J Clin Microbiol,1998,36(10):3040.

譯:卡波斯,克里森,等.丙型肝炎的分子證據(jù)[J].臨床微生物學(xué),1998,36（10）:3040.

[2] 潘紀(jì)春,于洋.玻片凝聚胺交叉配血方法學(xué)評價[J］.科學(xué)技術(shù)與工程,2007,7(20):5342-5344.

[3] 田宗斌,王文莉.一例抗M患者的輸血[J].當(dāng)代醫(yī)學(xué),2009,15(3):142.

[4] 吳爭勝.MPT在抗體檢測和交叉配血中的影響因素探討[J].江西醫(yī)學(xué)檢驗(yàn),2007,25(4):403-404