菌毒清顆粒的急性毒性研究

彭俠彪 趙偉國(guó) 李運(yùn)景

菌毒清顆粒是本院醫(yī)院制劑品種，在本院應(yīng)用歷史悠 久，主要由板藍(lán)根、穿心蓮、金銀花等藥材經(jīng)現(xiàn)代工藝提取而成的中藥制劑，具有清熱解毒、養(yǎng)陰降火、涼血利咽等功效。由于本品在治療流行性感冒、咽炎、上呼吸道感染等方面療效確切，得到了廣大醫(yī)生及患者的肯定。雖然臨床應(yīng)用中尚未發(fā)現(xiàn)有嚴(yán)重不良反應(yīng)和毒副作用的情況，但缺乏相關(guān)研究資料和數(shù)據(jù)的支持，因此本研究將通過(guò)小鼠急性毒性實(shí)驗(yàn)對(duì)該制劑的安全性進(jìn)行評(píng)價(jià)，以期為臨床安全合理應(yīng)用提供有力的支持。

1 臨床資料

1.1 供試品 菌毒清顆粒(中山市人民醫(yī)院，20100928)，規(guī)格12 g/包(約相當(dāng)于0.46 g生藥/g)。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

1.2.1 品系和級(jí)別 KM小鼠，SPF級(jí);數(shù)量及性別:30只，雌雄各半;購(gòu)入時(shí)體重:15.6～17.8 g;提供單位:由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量合格證明編號(hào):0075804。

1.2.2 識(shí)別方法 KM小鼠采用被毛染色法，使用飽和苦味酸對(duì)小鼠進(jìn)行編號(hào)，在小鼠體表不同部位的被毛涂染斑點(diǎn)，以示不同號(hào)碼。以小鼠皮膚染色和籠具雙重編號(hào)標(biāo)記識(shí)別。

1.2.3 飼養(yǎng)管理 KM小鼠飼養(yǎng)在廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心SPF級(jí)動(dòng)物房，動(dòng)物飼養(yǎng)條件:5只/箱，群養(yǎng)，飼養(yǎng)溫度與濕度:20～25℃，40～70%，采用12 h:12 h晝夜間斷照明;飼養(yǎng)室條件始終保持穩(wěn)定，以保證試驗(yàn)結(jié)果的可靠性。喂以全價(jià)顆粒飼料(由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)。自由進(jìn)食飲水，飲用水為廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供的純凈水，由飲水瓶自由攝取。檢疫:SPF級(jí)KM小鼠檢疫4 d。期間每日檢查動(dòng)物一次，未發(fā)現(xiàn)不健康的動(dòng)物，取全部健康小鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器 BS-3000A系列電子天平，上海友聲衡器有限公司。

2 方法

2.1 劑量設(shè)計(jì)與分組 設(shè)計(jì)依據(jù)［1］:《中藥、天然藥物急性毒性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》;預(yù)試KM小鼠采用本實(shí)驗(yàn)方法給予受試藥物，未觀察到小鼠出現(xiàn)毒性癥狀，無(wú)小鼠死亡;劑量設(shè)計(jì)與分組:依據(jù)《中藥、天然藥物急性毒性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》，將檢疫合格的KM小鼠按體重隨機(jī)分為菌毒清顆粒組20只和溶劑對(duì)照組10只，雌雄各半。采用最大給藥量法，給藥組按最大濃度(1.013 g/ml)及最大給藥體積(0.3 ml/10 g體重)給予受試藥物，劑量為91.17 g/kg體重。

表1 菌毒清顆粒急性毒性試驗(yàn)體重結(jié)果(x ± s，g)

2.2 實(shí)驗(yàn)方法 供試品配制方法:取菌毒清顆粒10.13 g置于研缽中研磨，加入少量蒸餾水繼續(xù)研磨后，用蒸餾水定容于100 ml，得1.013 g/ml藥液。

給藥方法［2-3］:24 h內(nèi)連續(xù)灌胃給藥3次，每次按小鼠0.3 ml/10 g體重進(jìn)行給藥，兩次給藥相隔約6 h，灌胃前小鼠禁食約12 h，不禁水，最后一次灌胃后再禁食1～2 h;菌毒清顆粒組給予1.013 g/ml菌毒清顆粒藥液，溶劑對(duì)照組給予等量的蒸餾水。

2.3 檢測(cè)指標(biāo) 觀察:觀察動(dòng)物體重變化、飲食、外觀、行為、分泌物、排泄物以及動(dòng)物死亡情況等。詳細(xì)觀察并記錄給藥后4 h內(nèi)小鼠的反應(yīng)情況，然后觀察1次/d，連續(xù)觀察14 d。記錄所有小鼠的死亡情況、中毒癥狀及中毒反應(yīng)的起始時(shí)間、嚴(yán)重程度、持續(xù)時(shí)間、是否可逆等。

體重:于給藥當(dāng)天(D0)、給藥第1天(D1)、給藥第3天(D3)、給藥第7天(D7)、第14天(D14)測(cè)定小鼠體重1次。解剖:觀察期結(jié)束，全部存活小鼠進(jìn)行大體解剖，當(dāng)發(fā)現(xiàn)組織器官出現(xiàn)體積、顏色、質(zhì)地等改變時(shí)，對(duì)其進(jìn)行組織病理學(xué)檢查。

3 結(jié)果

觀察:給藥觀察14 d，小鼠活動(dòng)正常、被毛光亮，無(wú)異常分泌物，無(wú)小鼠死亡;體重:給藥當(dāng)天(D0)給藥組體重與溶劑對(duì)照組比較顯著升高(P＜0.01)，給藥前(D-1)動(dòng)物分組，兩組體重差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。此后所有動(dòng)物體重正常增長(zhǎng)，且在其他各測(cè)定時(shí)間點(diǎn)體重與溶劑對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，此體重的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果見(jiàn)表1。

解剖:全部存活小鼠大體解剖，肉眼觀察未發(fā)現(xiàn)組織臟器出現(xiàn)體積、顏色、質(zhì)地等出現(xiàn)改變。

4 討論

研究文獻(xiàn)記載板藍(lán)根、穿心蓮等藥物及其提取物制劑存在一定的毒性和潛在風(fēng)險(xiǎn)［4，5］。雖然在長(zhǎng)期的臨床實(shí)踐中尚未發(fā)現(xiàn)有毒性和不良反應(yīng)的報(bào)道，但考慮到菌毒清顆粒組成藥物中包括板藍(lán)根、穿心蓮等藥物，為了給臨床合理安全應(yīng)用提供更有力的證據(jù)，我們對(duì)菌毒清顆粒進(jìn)行了急性毒性的研究。根據(jù)本研究的數(shù)據(jù)結(jié)果，依據(jù)《中藥、天然藥物急性毒性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》急性毒性試驗(yàn)判斷標(biāo)準(zhǔn)菌毒清顆粒，在本實(shí)驗(yàn)條件下，采用最大給藥量法(劑量為91.17 g/kg)連續(xù)觀察14 d，未觀察到小鼠出現(xiàn)毒性癥狀，無(wú)小鼠死亡，LD50＞91.17 g/kg體重。此劑量相當(dāng)于人常用劑量0.69 g/kg(按70 kg人，24 g/次，2次/d計(jì))的133倍左右，參考相關(guān)規(guī)定及有關(guān)研究［6-7］，單次給藥量＞20 g生藥/kg體重而實(shí)驗(yàn)動(dòng)物不出現(xiàn)死亡者，可以認(rèn)為該藥是安全的。而本研究的實(shí)驗(yàn)結(jié)果為91.17 g/kg體重相當(dāng)于41.94 g生藥/kg體重，因此可以認(rèn)為菌毒清顆粒在正常劑量應(yīng)用具有較高的安全性，屬于較安全的制劑。

［1］《中藥、天然藥物急性毒性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》課題研究組.中藥、天然藥物急性毒性研究技術(shù)指導(dǎo)原則，2005-03.

［2］陳奇.中藥藥理研究方法學(xué).第2版.北京:人民衛(wèi)生出版社，1993:293-295.

［3］徐叔云.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué).第3版，人民衛(wèi)生出版社，2002.

［4］龐竹林，湯郡，朱蔚云，等.板藍(lán)根對(duì)試驗(yàn)性小鼠遺傳毒性的影響.廣州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2000，28(3):41-44.

［5］張玉萌，栗曉東，劉萍，等.穿心蓮制劑引起急性腎毒性的文獻(xiàn)回顧性分析.中國(guó)藥物應(yīng)用與監(jiān)測(cè)，2010，7(6):360-362.

［6］謝秀瓊.中藥新制劑開(kāi)發(fā)與應(yīng)用，第2版.北京:人民衛(wèi)生出版社，2000:540.

［7］袁國(guó)卿.芩連術(shù)苓散急性毒性實(shí)驗(yàn)研究.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2010，21(7):1810.