CD109、CD117、Vimentin在基底細(xì)胞樣乳腺癌中的表達(dá)及臨床價(jià)值

林 靜,朱秀梅,李 楠,張金庫(kù)

(1.承德醫(yī)學(xué)院,河北承德 067000;2.吉林大學(xué)南湖校區(qū)醫(yī)院,吉林長(zhǎng)春 130012;3.保定市第一中心醫(yī)院,河北保定 071000）

根據(jù)基因表達(dá)分析,給幾種癌定義出了新的亞型,其中乳腺癌從基因角度鑒定出五個(gè)亞型:管腔A型(luminal subtype A）,管腔B型(luminal subtype B）,HER-2過(guò)表達(dá)型(HER-2 over-expression subtype）,正常乳腺樣型(normal breast-like subtype）和基底細(xì)胞樣型(basal-like subtype）。其中,基底細(xì)胞樣乳腺癌(basal-like breast carcinoma,BLBC）約占全部乳腺癌的8%-20%,且臨床預(yù)后較差[1]?；准?xì)胞樣乳腺癌表達(dá)高分子量細(xì)胞角蛋白(如CK5/6）和/或EGFR等,而不表達(dá)ER、PR、HER-2[2]。目前,針對(duì)BLBC 這個(gè)特定亞型的抗癌治療尚未建立起來(lái),因此,探尋其有效的分子治療靶點(diǎn)成為BLBC的研究熱點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)免疫組化方法檢測(cè) CD109、CD117、Vimentin在BLBC中的表達(dá)情況,以增加對(duì)該類乳腺癌亞型的認(rèn)識(shí)。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源

收集保定市第一中心醫(yī)院病理科2006年1月～2011年3月手術(shù)治療及會(huì)診的乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌患者的存檔蠟塊325例。標(biāo)本均常規(guī)取材,中性甲醛固定,常規(guī)石蠟包埋,4μ m厚連續(xù)切片。根據(jù)被大多數(shù)學(xué)者所認(rèn)同的BLBC判斷標(biāo)準(zhǔn)(ER、PR、HER-2呈三聯(lián)陰性,同時(shí)表達(dá)一種或一種以上的基底細(xì)胞型角蛋白和/或P63和/或EGFR）篩選出BLBC病例51例,同時(shí)從余下的274例非BLBC病例中隨機(jī)選出50例作為對(duì)照組。全部標(biāo)本均經(jīng)病理證實(shí),所有病例術(shù)前均未進(jìn)行放療、化療及內(nèi)分泌治療。

1.2 方法

1.2.1 免疫組化 免疫組織化學(xué)采用EnVision二步法,抗體選用 CD109、CD117、Vimentin、ER、PR、HER-2、CK5/6、P63、EGFR。以上抗體與試劑除 CD109 購(gòu)自武漢華瑞康生物科技有限公司,其余均購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司。陰性對(duì)照:以PBS替代第一抗體的乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌組織免疫組化染色結(jié)果為陰性對(duì)照。陽(yáng)性對(duì)照:以預(yù)試驗(yàn)中己證明陽(yáng)性的乳腺癌組織切片免疫組化染色結(jié)果為陽(yáng)性對(duì)照。

1.2.2 免疫組化染色結(jié)果的判定和分析 采用雙盲法觀察陽(yáng)性反應(yīng),閱片由兩位高年資病理科醫(yī)師獨(dú)立觀察每張切片后分別做出判斷。ER、PR、p63陽(yáng)性表達(dá)顯示棕黃色均勻細(xì)顆粒位于細(xì)胞核,CD109、CD117、HER-2陽(yáng)性表達(dá)顯示棕黃色均勻細(xì)顆粒位于細(xì)胞膜,CK5/6陽(yáng)性表達(dá)顯示棕黃色均勻細(xì)顆粒位于細(xì)胞漿,EGFR陽(yáng)性表達(dá)顯示棕黃色均勻細(xì)顆粒位于細(xì)胞膜和細(xì)胞漿。判斷標(biāo)準(zhǔn):根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞占同類病變細(xì)胞數(shù)的比例和著色程度分為4級(jí):(-）為腫瘤組織無(wú)細(xì)胞膜/漿/核染色或≤10%細(xì)胞膜/漿/核染色;(+）為＞10%腫瘤組織細(xì)胞膜/漿/核部分染色;(++）為＞10%腫瘤組織細(xì)胞膜/漿/核弱～中度完全染色;(+++）為＞10%腫瘤組織細(xì)胞膜/漿/核高度完全染色。其中HER-2蛋白(-）或(+）定性為陰性;(++）定性為可疑陽(yáng)性;(+++）定性為陽(yáng)性(參照《中華病理學(xué)雜志》2003年10月第32卷第5期《乳腺癌HER-2/neu的免疫組織化學(xué)檢測(cè)》中的HER-2陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)）。CD109、CD117、ER、PR、p63、CK5/6、EGFR(-）定性為陰性,(+）～(+++）定性為陽(yáng)性。

圖1 免疫組織化學(xué)染色 CD109陽(yáng)性(×200）

1.3 統(tǒng)計(jì)分析

數(shù)據(jù)結(jié)果采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS16.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,組間率比較采用 χ2檢驗(yàn)進(jìn)行分析,以 α=0.05作為檢驗(yàn)水準(zhǔn),P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

免疫組化染色CD109蛋白主要表達(dá)于BLBC腫瘤組織的細(xì)胞膜上,非BLBC腫瘤組織不著色。BLBC組和非 BLBC組中CD109、CD117、Vimentin陽(yáng)性表達(dá)率詳見(jiàn)表1。結(jié)果采用 χ2檢驗(yàn)進(jìn)行組間陽(yáng)性率的比較,其中CD109的組間率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05）。CD117、Vimentin的比較差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05）。CD109陽(yáng)性組與CD109陰性組在組織形態(tài)學(xué)上的比較,不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。上述結(jié)果提示,CD109在BLBC中的表達(dá)具有特異性,可以作為一個(gè)判斷BLBC的免疫標(biāo)記;CD117、Vimentin在BLBC中的表達(dá)不具有特異性,尚不適宜做BLBC的判斷標(biāo)記。

表1 CD109,CD117,Vimentin在 BLBC與非BLBC中的表達(dá)情況

3 討論

CD109蛋白是新近克隆到的一種細(xì)胞表面抗原,屬于含硫酯的α 2巨球蛋白/C3、C4、C5家族成員之一[4]。研究顯示,CD109表達(dá)于胎兒和成人CD34陽(yáng)性的造血干和祖細(xì)胞,內(nèi)皮細(xì)胞,活化的T淋巴細(xì)胞和活化的血小板;另外,CD109可表達(dá)于肺、食管及子宮的鱗狀細(xì)胞癌[6-8]。最新的研究發(fā)現(xiàn),CD109還可表達(dá)于乳腺、涎腺、淚腺的肌上皮細(xì)胞及前列腺基底細(xì)胞和肌上皮組分的良性腫瘤[9]。目前,盡管CD109的生理功能尚不十分清楚,但在人類角化細(xì)胞中CD109能夠通過(guò)與TGF-β(transforming growth factor β）受體結(jié)合而抑制 TGF-β信號(hào)[10]。這些研究結(jié)果表明,可將CD109作為一種新的乳腺上皮細(xì)胞標(biāo)記[11],另外,由于CD109是一種細(xì)胞表面蛋白,它很可能成為乳腺癌治療的一個(gè)潛在分子靶點(diǎn)。本研究中,CD109在BLBC中的陽(yáng)性表達(dá)率為60.78(31/51）,而在非 BLBC中均呈陰性,提示CD109可以作為一個(gè)判斷 BLBC的免疫標(biāo)記。另外,在CK5/6和或P63和或EGFR陰性的病例中有CD109陽(yáng)性表達(dá),提示檢測(cè)CD109可以協(xié)同CK5/6、P63、EGFR提高BLBC的檢出率。

CDl17是由c-kit原癌基因編碼的一種跨膜酪氨酸激酶受體,最初被用于胃腸道間質(zhì)瘤的檢測(cè),現(xiàn)在已經(jīng)發(fā)現(xiàn)它在多種細(xì)胞中均有表達(dá),正常乳腺組織的上皮細(xì)胞可以表達(dá),BLBC的腫瘤細(xì)胞也可以表達(dá),相對(duì)于其它乳腺癌它在BLBC中的表達(dá)更常見(jiàn),在mRNA檢測(cè)時(shí),CD117是乳腺癌基底細(xì)胞樣表型最好的指標(biāo)之一,但在免疫組化時(shí)其表達(dá)率較低[11]。本研究的BLBC組中CD117的免疫組化陽(yáng)性表達(dá)率為11.76%(6/51）,沒(méi)有發(fā)現(xiàn)其表達(dá)與BLBC之間存在密切關(guān)系,這可能與我們所選的檢測(cè)方法及樣本量不足夠大有關(guān)。

Vimentin是最普遍的中間絲蛋白,在所有干細(xì)胞中表達(dá),但分化過(guò)程中它可轉(zhuǎn)化成其他中間絲[12]。它參與細(xì)胞骨架的構(gòu)成,與細(xì)胞的膜系統(tǒng)廣泛連接。有研究表明可溶性Vimentin多肽還具有與細(xì)胞的核酸和組蛋白結(jié)合的能力,具有調(diào)控細(xì)胞生長(zhǎng)、分裂的作用[13]。有文獻(xiàn)報(bào)道,Vimentin的陽(yáng)性表達(dá)具有提示乳腺癌預(yù)后的意義與淋巴結(jié)的狀態(tài)相關(guān):Vimentin提示預(yù)后不良的情況僅存在于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性的乳癌,不包括淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者[14]。有報(bào)道表明BLBC易發(fā)生內(nèi)臟特別是腦和肺轉(zhuǎn)移與Vimentin的高表達(dá)有關(guān)。我們的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),Vimentin在BLBC中表達(dá)增高,但和其在非BLBC中的表達(dá)無(wú)顯著差異,與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)相關(guān)性,因此,本研究顯示Vimentin尚不能作為鑒別BLBC的特異性標(biāo)記物。

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