ELISA檢測中全自動加樣引起拖帶假陽性現(xiàn)象的對策分析

潘志勇

隨著全自動加樣設(shè)備在血液篩查中的廣泛應(yīng)用，其加樣過程導致的拖帶現(xiàn)象已引起高度關(guān)注。筆者在進行血液標本加樣檢測過程中，發(fā)現(xiàn)抗體強陽性標本，引起拖帶現(xiàn)象(以抗-HIV為例)進行統(tǒng)計分析，現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 血清標本 均來自我站街頭無償獻血者。

1.2 試劑 ELIST試劑為法國伯樂公司生產(chǎn)，在有效期內(nèi)使用。

1.3 儀器 RSP 150＆BEP III全自動酶免系統(tǒng)深圳賽勒公司提供。

1.4 方法 根據(jù)檢測項目和試劑說明書的要求，在RSP 150及BEP III控制微機上編制加樣程序，加樣方向從標本架1起、酶標板從1到12。吸取分配不同的液體試劑或血清標本后，RSP 150按編制程序自動沖洗加樣針。

2 結(jié)果

2.1 第1例抗-HIV陽性拖帶現(xiàn)象檢測 出現(xiàn)在抗-HIV同一塊酶標板的H2、H3、H4……H7位置上，標本檢測OD值見表1。本次實驗的Cut off值為0.134，故6份標本5份陽性1份為“灰區(qū)”，根據(jù)抗-HIV檢測規(guī)程，6份標本重新雙孔復試，結(jié)果H2標本檢測OD值分別為2.759，2.543仍為強陽性，H3標本OD值分別為0.456，0.403為弱陽性，其余4份樣本雙孔復試為陰性，把H2、H3標本送市疾控中心HIV確認實驗室經(jīng)蛋白印跡法(WB)確認，H2為抗-HIV陽性，H3為抗-HIV陰性。后追蹤相應(yīng)血袋辯子標本并進行檢測，H2樣本W(wǎng)B和ELISA結(jié)果為陽性，H3樣本W(wǎng)B和ELISA均為陰性。

2.2 第2例抗-HIV陽性拖帶現(xiàn)象檢測 出現(xiàn)在抗-HIV同一塊酶標板的E9、E10、E11、E12位置上，標本檢測 OD值見表2。本次實驗的Cut off值為0.146，4份標本雙孔復試，結(jié)果E9標本檢測OD值分別為3.110，3.188仍為強陽性，其他3份樣本雙孔復試為陰性，把E9標本送市疾控中心HIV確認實驗室經(jīng)蛋白印跡法(WB)確認，仍為抗-HIV陽性。

表1 第1例拖帶陽性檢測結(jié)果

表2 第2例拖帶陽性檢測結(jié)果

2.3 陽性拖帶現(xiàn)象位置的確認 以A、B、C……H表示96孔酶標板的縱列，1、2、3、……12表示96孔酶標板的橫列，其標本在酶標板的位置可表示為A1……A12，B1……B12，H1……H12等(見圖1)。

圖1 拖帶現(xiàn)象位置圖解

3 討論

目前，許多血站使用全自動加樣器及全自動酶免分析系統(tǒng)進行血液檢測。全自動加樣器由微機控制，可以快速準確的處理大批量標本，并可保證加樣的精密度和一致性，大大減少了勞動強度，避免了手工加樣的人為誤差［1］，提高了血液檢測的質(zhì)量和水平。加完血清或試劑后，加樣針根據(jù)編好的程序沖洗加樣針，不能做到手工加樣，一份標本一個加樣頭，因為我站使用的永久性加樣針，因此從理論上講儀器在加樣運行方向上從左到右之間拖帶污染是不可避免的［2］，同樣，同一根加樣針，加完強陽性標本，沖洗不干凈，接著加下一樣本，造成樣本污染，結(jié)果出現(xiàn)假陽性(第1例拖帶陽性為此現(xiàn)象)。正因為如此儀器的生產(chǎn)廠家也考慮到了這個問題，加完一種試劑或標本后機器自動沖洗實踐證明，一般情況下能避免左右孔之間的拖帶污染，但若遇到高濃度Ag、Ab標本，這種拖帶污染是存在的，通過多次實驗尋求本實驗室全自動加樣針的最佳清洗程序，盡可能減少拖帶污染。

綜上所述實驗證明，增加加樣針的清洗和擦拭次數(shù)(最佳清洗和擦拭程序)，可以減少拖帶污染?，F(xiàn)在市場有專門針對加樣污染使用的清洗劑，據(jù)報道可以使加樣針污染降低。一次性加樣針減少了洗滌環(huán)節(jié)，在保持血液加樣的高精確度和自動化的前提下，又可以完全避免由于拖帶污染帶來的影響［3］。建議血站在血液檢測中盡可能使用一次性加樣針。但如果出現(xiàn)了這種拖帶污染造成的現(xiàn)象時，在對可疑拖帶污染陽性標本進行雙孔復試和確認時，應(yīng)使用相應(yīng)的血袋標本并查看獻血者原始資料，并隨訪原獻血者加以證實。

［1］李慧，惠永慶，劉世榮.酶聯(lián)免疫吸附試驗全自動與手工操作方法比較. 中國輸血雜志，2000，13(2)：98．

［2］徐樹良，談維，石斌，等.全自動加樣儀引起抗-HIV拖帶陽性分析. 中國輸血雜志，2003，16(2)：106-107．

［3］申俊峰，陸蓉，王軍，等.全自動加樣儀一次性加樣針在血液檢測中的應(yīng)用. 貴州醫(yī)藥，2009，33(3)：264-265．