氯化苦與1，3-二氯丙烯膠囊施用后在黃瓜及番茄果實(shí)中的殘留檢測(cè)

王秋霞 郭美霞 李 園 曹坳程

（中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所，北京 100193）

近年來，隨著農(nóng)業(yè)結(jié)構(gòu)調(diào)整和農(nóng)村經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，高附加值作物包括保護(hù)地蔬菜在北京地區(qū)發(fā)展迅速。2010年北京市農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣站調(diào)研數(shù)據(jù)表明，僅北京地區(qū)保護(hù)地蔬菜種植面積就達(dá)2.2萬hm2，占總種植面積的40%。在高附加值作物生產(chǎn)中，特別是一些專業(yè)化生產(chǎn)基地，多年連茬種植，造成土壤中病原菌、蟲卵積累，一些土傳病蟲、根結(jié)線蟲連年發(fā)生，作物產(chǎn)量和品質(zhì)受到嚴(yán)重影響，一般減產(chǎn) 20%～40%，嚴(yán)重的減產(chǎn) 60%以上，甚至絕收（曹坳程，2003；曹坳程 等，2010）。傳統(tǒng)防治方法有抗病育種、嫁接、輪作、深翻、換土、化學(xué)農(nóng)藥灌根等。但由于土地有限和實(shí)行集約化種植，輪作很難實(shí)施；抗多種土傳病害的品種和砧木很難培育；深翻和換土在經(jīng)濟(jì)上不可行；化學(xué)農(nóng)藥灌根效果有限，且易造成農(nóng)藥殘留超標(biāo)和地下水污染。由于缺乏有效的技術(shù)，農(nóng)民大量使用禁用農(nóng)藥涕滅威、克百威、甲拌磷等防治根結(jié)線蟲和地下害蟲，這些農(nóng)藥毒性極高，殘留期長(zhǎng)，且對(duì)地下水污染嚴(yán)重，影響人們的生命健康（曹坳程，2006）。

當(dāng)前控制土傳病蟲與根結(jié)線蟲最有效的方法是采用熏蒸劑進(jìn)行土壤熏蒸消毒，一次施用可有效殺滅土壤中的真菌、細(xì)菌、線蟲等有害生物，且無農(nóng)藥殘留問題，可大幅度提高作物的產(chǎn)量和品質(zhì)（曹坳程，2006）。目前最有前景的熏蒸劑為氯化苦與1，3-二氯丙烯的混合制劑（簡(jiǎn)稱 CP/1，3-D）（UNEP MBTOC，1998，2002，2006），但氯化苦（CP）、1，3-二氯丙烯（1，3-D）具有高毒、高揮發(fā)性，使用不方便且易污染環(huán)境、危害人類健康（Chen et al.，1995；Carter et al.，1997；Gan et al.，1998；Yates et al.，2002；Cryer et al.，2003；Thomas et al.，2004；Papiernik et al.，2004）。中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所研制了CP/1，3-D的新劑型——膠囊制劑，使用時(shí)無需特殊的工具及防護(hù)設(shè)備，解決了高毒熏蒸劑低毒化使用問題。為了明確此新劑型的食品安全性，本試驗(yàn)采用配有頂空進(jìn)樣器的高效氣相色譜儀測(cè)定CP/1，3-D膠囊施用后CP與1，3-D在黃瓜及番茄果實(shí)中的殘留量，為其科學(xué)應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 黃瓜溫室試驗(yàn)

試驗(yàn)在北京市通州區(qū)潞城鎮(zhèn)小營(yíng)村進(jìn)行。供試藥劑為 1，3-D/CP膠囊（含 62%1，3-D）；93%1，3-D乳油（山東省魯達(dá)化工廠）；1，3-D/CP混劑（2m∶1m）（氯化苦由大連綠峰化學(xué)股份有限公司提供，1，3-D由山東省魯達(dá)化工廠提供）。供試黃瓜品種為中農(nóng)16號(hào)。

選擇根結(jié)線蟲及土傳病害嚴(yán)重的溫室，每棟面積約667 m2，具有滴灌設(shè)備。設(shè)6個(gè)處理：① 1，3-D/CP混劑注射：用量為14.5 g·m-2；② 1，3-D/CP混劑注射：用量為29.0 g·m-2；③CP/1，3-D膠囊：用量為14.5 g·m-2；④ CP/1，3-D膠囊：用量為29.0 g·m-2；⑤ CP/1，3-D膠囊：用量為43.5 g·m-2；⑥ CK（不施用任何熏蒸劑）。每處理4次重復(fù)，隨機(jī)區(qū)組排列。均于2009年7月28日施藥，8月21日揭膜，8月29日定植。

1.2 番茄溫室試驗(yàn)

試驗(yàn)地點(diǎn)及藥品同1.1黃瓜溫室試驗(yàn)。供試番茄品種為東圣1號(hào)。

選擇根結(jié)線蟲及土傳病害嚴(yán)重的溫室，每棟面積約667 m2，具有滴灌設(shè)備。設(shè)3個(gè)處理：① CP/1，3-D膠囊50.0 g·m-2；② 1，3-D液劑20.0 g·m-2；③ CK（不施用任何熏蒸劑）。每處理4次重復(fù)，隨機(jī)區(qū)組排列。均于2009年7月9日施藥，8月4日揭膜，8月29日定植。

1.3 采樣方法

在黃瓜、番茄第1次采摘時(shí)（2009年10月18日）取樣，采用5點(diǎn)取樣法，在每個(gè)小區(qū)采取樣品2 kg，放入-70 ℃冰箱保存待測(cè)。

1.4 檢測(cè)方法

采用氣相色譜—頂空進(jìn)樣法建立黃瓜、番茄果實(shí)中CP、1，3-D殘留量的快速測(cè)定方法。

1.5 儀器和藥品

Agilent 7890A 氣相色譜儀（配備Agilent 7694E頂空自動(dòng)進(jìn)樣器和電子捕獲檢測(cè)器），色譜柱AB0525—3002（安捷倫科技有限公司）；其林貝爾QL-901漩渦振蕩器（江蘇海門其林貝爾儀器制造有限公司）；舒美KQ-50B超聲波清洗器，HZS-H水浴振蕩器（哈爾濱市東聯(lián)電子技術(shù)開發(fā)有限公司）。CP標(biāo)準(zhǔn)品（純度99.5%）和1，3-D標(biāo)準(zhǔn)品（純度99.5%）均購于Sigma公司；石油醚（60～90 ℃）為分析純。

1.6 樣品制備及前處理

將所有取回的黃瓜、番茄樣品切碎并混合均勻，然后按四分法取0.5 kg樣品，用攪拌機(jī)打碎，準(zhǔn)確稱取8 g黃瓜或番茄樣本（精確至0.01 g）于20 mL頂空進(jìn)樣瓶中，加入8.0 mL石油醚，用壓蓋器密封，在水浴振蕩器上振蕩12 h，漩渦振蕩2 min，超聲10 min，2 000 r·min-1離心3 min，取上清液2.0 mL于另一20 mL頂空進(jìn)樣瓶中密封，-20 ℃保存待測(cè)。

1.7 分析測(cè)定

進(jìn)樣口溫度150 ℃；柱溫120 ℃，保持8 min；檢測(cè)器溫度250 ℃；柱前壓45.52 kPa；不分流進(jìn)樣，1 min后開閥；進(jìn)樣量1 mL；載氣為高純氮?dú)狻ｍ斂者M(jìn)樣器條件：爐箱溫度70 ℃，樣品環(huán)溫度72 ℃，傳輸線溫度72 ℃；瓶加熱時(shí)間5.0 min，加壓時(shí)間0.1 min；樣品環(huán)填充時(shí)間0.5 min，壓力穩(wěn)定時(shí)間0.05 min，進(jìn)樣時(shí)間0.5 min。循環(huán)時(shí)間8.0 min。

在此條件下可同時(shí)檢測(cè)CP和1，3-D。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線繪制

分別準(zhǔn)確稱取CP、1，3-D標(biāo)準(zhǔn)品25 mg（精確至0.1 mg）于50 mL容量瓶中，用石油醚定容，作為工作母液。移取適量母液，用石油醚稀釋，分別配成質(zhì)量濃度為 0.005～4 mg·L-1和0.05～10 mg·L-1的系列工作液，以樣品濃度為橫坐標(biāo)，以樣品峰面積為縱坐標(biāo)制作標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。氯化苦標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖見圖1，目標(biāo)化合物出峰時(shí)間在4.6 min；1，3-D標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖見圖2，1，3-D順反異構(gòu)體的出峰時(shí)間分別為4.25、4.64 min。CP線性回歸方程為y=4 256.9x-178.22，R2=0.999 3；1，3-D線性回歸方程為y=167.47x-12.757，R2=0.999 2。

圖1 CP標(biāo)準(zhǔn)樣品色譜圖

圖2 1，3-D標(biāo)準(zhǔn)樣品色譜圖

2.2 添加回收率和最低檢出限

用未經(jīng)CP與1，3-D處理的黃瓜和番茄空白樣品，加入標(biāo)樣進(jìn)行方法的添加回收率測(cè)定。

黃瓜：在8 g空白黃瓜樣本中分別添加不同濃度的CP和1，3-D，添加濃度分別為0.1、0.01、0.001 mg·kg-1和1.0、0.1、0.01 mg·kg-1，CP的平均添加回收率為87.70%～95.99%，變異系數(shù)2.17%～4.62%；1，3-D的平均添加回收率為80.44%～89.14%，變異系數(shù)2.09%～4.41%（表1）。

番茄：在8 g空白番茄樣本中分別添加不同濃度的CP和1，3-D，添加濃度分別為0.1、0.01、0.001 mg·kg-1和 1.0、0.1、0.01 mg·kg-1，CP的平均添加回收率為89.09%～97.20%，變異系數(shù)3.16%～4.54%；1，3-D的平均添加回收率為78.15%～89.25%，變異系數(shù) 2.41%～5.56%（表1）。

表1 CP、1，3-D在黃瓜和番茄果實(shí)中的添加回收率及變異系數(shù)

以色譜峰信噪比為 3時(shí)的濃度確定黃瓜和番茄中 CP的檢出限（LOD）均為 0.001 mg·kg-1，1，3-D 的檢出限均為 0.01 mg·kg-1。以色譜峰信噪比為10時(shí)的濃度確定黃瓜和番茄中CP的定量限（LOQ）均為0.003 mg·kg-1，1，3-D的定量限均為0.028 mg·kg-1。

2.3 CP和1，3-D殘留檢測(cè)結(jié)果

歐盟制定的CP的MRL值為0.01 mg·kg-1，1，3-D在番茄中的MRL值為0.1 mg·kg-1。由表2、3可知，所有樣本均未檢出目標(biāo)化合物。

表2 1，3-D/CP膠囊、液劑在黃瓜中殘留量

3 小結(jié)

本試驗(yàn)結(jié)果表明，采用 CP/1，3-D膠囊進(jìn)行土壤熏蒸后對(duì)食品安全，可大面積推廣應(yīng)用。膠囊施藥技術(shù)簡(jiǎn)單、方便、無需特殊施藥工具，且對(duì)環(huán)境、食品安全。如能大面積推廣應(yīng)用，對(duì)保護(hù)地的可持續(xù)發(fā)展具有重要的意義。

另外，蔬菜田應(yīng)用膠囊施藥技術(shù)成本約1 000元·（667 m2）-1，但可增產(chǎn)40%～60%，經(jīng)濟(jì)效益顯著。

表3 1，3-D/CP膠囊、液劑在番茄中殘留量

曹坳程，郭美霞，王秋霞，李園，顏冬冬.2010.世界土壤消毒技術(shù)進(jìn)展.中國(guó)蔬菜，（21）：17-22.

曹坳程.2003.中國(guó)溴甲烷土壤消毒替代技術(shù)篩選.北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社：1-2.

曹坳程.2006.溴甲烷土壤消毒替代產(chǎn)品及使用技術(shù)原理〔博士論文〕.北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué).

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