羚羊感冒膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

鄭 莉，宋 英（成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院藥劑科，成都市 610072）

羚羊感冒膠囊是由金銀花、牛蒡子、羚羊角、淡竹葉、桔梗、甘草、連翹等組成的復(fù)方中藥制劑，功能清熱解表，用于治療流行性感冒、傷風(fēng)咳嗽、頭暈發(fā)熱、咽喉腫痛。為了進(jìn)一步完善、提高已有的羚羊感冒膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，有效控制產(chǎn)品內(nèi)在質(zhì)量，筆者在原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上保留了羚羊角的顯微鑒別，增加了對(duì)牛蒡子、桔梗、甘草、金銀花等藥味的薄層色譜（TLC）鑒別和金銀花含量的高效液相色譜（HPLC）測(cè)定，以期更加有效的控制羚羊感冒膠囊質(zhì)量。

1 儀器與試藥

1100 HPLC儀，包括Waters2695泵、Waters 2487檢測(cè)器、Empower色譜工作站（美國惠普公司）；BP-211D電子分析天平（德國賽多利斯公司）。

牛蒡子苷、綠原酸對(duì)照品和牛蒡子、桔梗、甘草對(duì)照藥材（中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)分別為110819-200505、110753-200413、 120903-200608、 121028-200608、 120904-200511）；甲醇為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 性狀

本品為硬膠囊劑，內(nèi)容物為黃棕色的粉末；氣香、味涼、苦而后甜。

2.2 顯微特征

取本品，置顯微鏡下觀察，可見不規(guī)則形碎塊，近無色或淡灰色，微透明，稍有光澤，偶見棕褐色色素顆粒。小碎片較多，顯顆粒性，較大碎片中均勻分布有多數(shù)近平行排列的縱向空隙，空隙呈長(zhǎng)圓形、新月形、長(zhǎng)條形或裂縫狀。羚羊感冒膠囊顯微特征見圖1（圖中A、B、C、D均為同一膠囊不同視角下的羚羊粉末）。

圖1 羚羊感冒膠囊顯微特征Fig 1 Microscopic characteristics of Lingyang ganmao capsules

2.3 薄層鑒別[1～3]

2.3.1 牛蒡子的TLC鑒別 取本品內(nèi)容物2 g，加50%甲醇30 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)?0%甲醇1 mL使溶解，作為供試品溶液；取缺牛蒡子陰性樣品內(nèi)容物2 g，同法制成缺牛蒡子陰性對(duì)照溶液；另取牛蒡子苷對(duì)照品，加50%甲醇制成每1 mL含5 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；再取牛蒡子對(duì)照藥材2 g，加50%甲醇20 mL，同法制成對(duì)照藥材溶液。照TLC法[1]試驗(yàn)，吸取上述4種溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水（40∶10∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，于105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。結(jié)果，供試品色譜中，在與對(duì)照品、對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；陰性對(duì)照無干擾。牛蒡子的TLC見圖2。

2.3.2 金銀花的TLC鑒別 取本品內(nèi)容物1 g，研細(xì)，加甲醇20 mL，超聲處理15 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液；取缺金銀花陰性樣品內(nèi)容物2 g，同法制成缺金銀花陰性對(duì)照溶液；另取綠原酸對(duì)照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照TLC法[1]試驗(yàn)，吸取上述3種溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯－甲酸－水（34∶5∶5）的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。結(jié)果，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；陰性對(duì)照無干擾。金銀花的TLC見圖3。

2.3.3 桔梗的TLC鑒別 取本品內(nèi)容物2 g，研細(xì)，加7%硫酸乙醇-水（1∶3）的混合溶液20 mL，加熱回流2 h，放冷，用三氯甲烷振搖提取2次，每次20 mL，合并三氯甲烷液，加水30 mL振搖洗滌，棄去洗液，三氯甲烷液用無水硫酸鈉脫水，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液；取缺桔梗陰性樣品內(nèi)容物2 g，同法制成缺桔梗陰性對(duì)照溶液；另取桔梗對(duì)照藥材1 g，同法制成對(duì)照藥材溶液。照TLC法[1]試驗(yàn)，吸取上述3種溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙醚（1∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，于105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。結(jié)果，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；陰性對(duì)照無干擾。桔梗的TLC見圖4。

2.3.4 甘草的TLC鑒別 取本品內(nèi)容物2 g，研細(xì)，加乙醇20 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?5 mL使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取2次，每次15 mL，合并正丁醇液，用正丁醇飽和的水洗滌2次，每次15 mL，取正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液；另取甘草對(duì)照藥材1 g，同法制成對(duì)照藥材溶液；取缺甘草陰性樣品內(nèi)容物2 g，同法制成缺甘草陰性對(duì)照溶液。照TLC法[1]試驗(yàn)，吸取上述3種溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇（7∶3∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。結(jié)果，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；陰性對(duì)照無干擾。甘草的TLC見圖5。

圖2 牛蒡子的TLCFig 2 TLC of Arctium lappa

圖3 金銀花的TLCFig 3 TLC of Lonicera japonica

2.4 含量測(cè)定[3]

2.4.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色 譜 柱 ：Kromasil C18（200 mm×4.6 mm，5 μm），Phenomenex C18（200 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇-水-冰醋酸（20∶80∶1）；檢測(cè)波長(zhǎng)：326 nm；柱溫：35℃；流速：0.8 mL·min-1。在此色譜條件下，對(duì)照品溶液與供試品溶液色譜峰保留時(shí)間一致（約16.3 min），分離度＞1.5，理論板數(shù)按綠原酸色譜峰計(jì)＞1 000。色譜見圖6。

2.4.2 溶液的制備 （1）供試品溶液的制備：取裝量差異項(xiàng)下的本品內(nèi)容物，研勻，取約0.2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加50%甲醇50 mL，稱定重量，超聲處理（功率：150 W，頻率：33 kHz）15 min，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補(bǔ)足失重，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。（2）對(duì)照品溶液的制備：取綠原酸對(duì)照品適量，精密稱定，置棕色瓶中，加50%甲醇制成每1 mL中含40 μg的溶液，得對(duì)照品貯備液。（3）陰性對(duì)照溶液的制備：按處方除去金銀花藥材，依本品制備工藝制成陰性樣品，按供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照溶液。

2.4.3 線性關(guān)系考察 取綠原酸對(duì)照品9.94 mg，精密稱定，置于100 mL棕色量瓶中，加50%甲醇制成每1 mL中含99.4μg的溶液，再分別精密吸取2、5、10、15、20、25 mL，置于25 mL棕色量瓶中，加50%甲醇稀釋成不同濃度的對(duì)照品溶液。分別精密吸取上述對(duì)照品溶液各10 μL，測(cè)定。以綠原酸峰面積積分值（Y）為縱坐標(biāo)，綠原酸的進(jìn)樣量（X）為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為Y＝1 135 798.4X+252.4（r＝0.999 9，n＝6）。結(jié)果表明，綠原酸進(jìn)樣量在0.079 52～0.994 00 μg范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好線性關(guān)系。2.4.4 精密度試驗(yàn) 精密吸取每1 mL中含99.4μg的綠原酸對(duì)照品溶液10 μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，按“2.4.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定。結(jié)果，RSD＝0.16%（n＝6），表明儀器精密度良好。

圖4 桔梗的TLCFig 4 TLC of Platycodon grandiflorum

圖5 甘草的TLCFig 5 TLC of Glycyrrhiza uralensis

2.4.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取“2.4.3”項(xiàng)下的綠原酸對(duì)照品溶液（39.76 μg·mL-1）10 μL，注入液相色譜儀，在24 h內(nèi)每隔4 h進(jìn)樣測(cè)定1次，峰面積基本一致。結(jié)果，RSD＝0.40%（n＝6），表明綠原酸的50%甲醇溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.4.6 重復(fù)性試驗(yàn) 分別取同一批羚羊感冒膠囊樣品（批號(hào)：060301）6份，按“2.4.2（1）”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按上述方法測(cè)定。結(jié)果，綠原酸的平均含量為5.402 mg·g-1，RSD＝0.70%（n＝6），表明方法重復(fù)性良好。

2.4.7 加樣回收率試驗(yàn) 取同一批已知含量的羚羊感冒膠囊（批號(hào)：060301，綠原酸含量：5.402 mg·g-1）6份，按“2.4.2（1）”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按上述方法測(cè)定，計(jì)算加樣回收率。結(jié)果，平均回收率為100.6%，RSD＝1.41%（n＝6）。

2.4.8 樣品含量測(cè)定 取本品10個(gè)生產(chǎn)廠家的10批樣品，按“2.4.2（1）”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，按“2.4.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定10批樣品中綠原酸的含量，結(jié)果見表1。

依據(jù)10批樣品含量測(cè)定結(jié)果，可暫將含量限度定為每1 g含金銀花以綠原酸（C16H18O9）計(jì)，不得少于3.0 mg，即每粒含金銀花以綠原酸（C16H18O9）計(jì)，不得少于1.3 mg。

3 討論

筆者曾對(duì)連翹、薄荷腦進(jìn)行TLC鑒別，但試驗(yàn)中連翹的供試品色譜在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)，且斑點(diǎn)較多，陰性對(duì)照有干擾，所以未收入正文；薄荷腦的供試品色譜因檢出的薄荷腦斑點(diǎn)太小，不明顯，故也未收入正文。

用HPLC法測(cè)定金銀花中綠原酸的含量時(shí)，分別用乙醇、甲醇、水和50%甲醇進(jìn)行提取，效果均不理想，故參照2010年版《中國藥典》方法，將正文中提取溶劑定為50%甲醇。

表1 樣品含量測(cè)定結(jié)果（n＝6）Tab 1Results of content determination of samples（n＝6）

[1] 國家藥典委員會(huì)編.中華人民共和國藥典（一部）[S].2010年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：附錄34.

[2] 萬德光.中藥品種品質(zhì)與藥效[M].上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2007：35.

[3] 沙世炎，徐 禮.中草藥有效成分分析法（上冊(cè)）[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1982：41.