GC 測定細(xì)辛藥材中的農(nóng)藥殘留量

王希堯，田春蓮，鄢景森，賀鳳偉，趙春杰#（.遼寧科技學(xué)院，本溪市70；.沈陽藥科大學(xué)藥學(xué)院，沈陽市 006）

中藥材種植過程中使用的農(nóng)藥種類多達(dá)幾百種，包括有機氯、有機磷、擬除蟲菊酯氨基甲酸鹽等多種類型[1，2]，農(nóng)藥殘留是因農(nóng)藥使用而殘留在人類或動、植物體中的混合物[3]。農(nóng)藥進(jìn)入藥材及土壤中，經(jīng)過食物鏈可以危害人的健康。有機氯類農(nóng)藥價廉、殺蟲效率高，曾廣泛被應(yīng)用，造成環(huán)境污染；且其具有毒性，可造成慢性中毒或致畸、致癌、致突變等，還易在動植物體內(nèi)蓄積，因而世界各國已相繼禁止使用該類農(nóng)藥[4]。因此，筆者采用超聲提取和弗羅里硅土柱凈化，對細(xì)辛藥材進(jìn)行前處理，采用毛細(xì)管氣相色譜-電子捕獲檢測器（GC-ECD）法對不同產(chǎn)地的細(xì)辛藥材中的10種農(nóng)藥殘留進(jìn)行同時測定，結(jié)果個別樣本有一定量的農(nóng)藥殘留被檢出。本方法簡單，能廣泛應(yīng)用于農(nóng)藥殘留的測定，規(guī)范藥材的質(zhì)量。

1 儀器與試藥

Agilent 6890型氣相色譜儀、Agilent 63Ni電子捕獲檢測器（美國Agilent公司）；OV-1701彈性石英毛細(xì)管柱（大連中匯達(dá)公司）。

農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品：敵敵畏（Dichlorvos）、六六六（benzenehexachloride，BHC）[包括甲體六六六（α-BHC）、丙體六六六（γ-BHC）和丁體六六六（δ-BHC）3種異構(gòu)體，純度＞99%]、五氯硝基苯（Quintozene）、毒死蜱（Chlorpyrifos）、對硫磷（parathion）、馬拉硫磷（malathion）、2，4-二硝基氯苯（CDNB）均購自國家農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品中心；滴滴涕（DDT）包括op′-滴滴滴（op′-DDD）和 pp′-滴滴滴（pp′-DDD）2種同系物，純度＞98%，均購自美國Sigma公司；正己烷為色譜純，水為重蒸餾水，其他試劑均為分析純；所有藥材樣品（來源見表1）經(jīng)沈陽藥科大學(xué)中藥學(xué)院賈景明副教授鑒定均為北細(xì)辛Asarum heterotropoidesFr.Schmidt var.mandshuricum（Maxim.）Kitag.。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：OV-1701彈性石英毛細(xì)管柱（30 m×0.32 mm×0.5 μm）；柱升溫程序：初始溫度 180℃，以 7℃·min-1升至260℃保持 2 min，以15℃·min-1升至 270℃保持10 min；進(jìn)樣口溫度：260℃；檢測器溫度：300℃；載氣：高純氮，99.999%；流量：60 mL·min-1；進(jìn)樣方式：不分流進(jìn)樣；進(jìn)樣量：1 μL。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

精密稱取敵敵畏、甲體六六六、五氯硝基苯、丙體六六六、毒死蜱、馬拉硫磷、丁體六六六、對硫磷、op′-滴滴滴、pp′-滴滴滴各2.5 mg，分別置于25 mL量瓶中，加正己烷溶解，定容，于4℃貯藏，備用。

分別精密吸取敵敵畏、甲體六六六、五氯硝基苯、丙體六六六、毒死蜱、馬拉硫磷、丁體六六六、對硫磷、op′-滴滴滴、pp′-滴滴滴貯備液適量，置于50 mL量瓶中，加正己烷稀釋至刻度，制成每1 mL含敵敵畏 4.946 μg、甲體六六六2.32 μg、五氯硝基苯1.11 μg、丙體六六六45.2 μg、毒死蜱 120.0 μg、馬拉硫磷 8.38 μg、丁體六六六2.61 μg、對硫磷 4.092 μg、op′-滴滴滴 1.13 μg、pp′-滴滴滴 1.15 μg的混合對照品貯備液。分別精密吸取上述混合對照品貯備液0.005、0.01、0.05、0.1、0.2、0.5、1 mL于10 mL量瓶中，用正己烷稀釋至刻度，制備成7個濃度的混合對照品溶液，加入等體積的2，4-二硝基氯苯溶液使各溶液濃度均為4.4 μg·mL-1，常溫下氮氣流吹干至刻度。

分別精密吸取上述7份標(biāo)準(zhǔn)溶液各1 μL，按“2.1”項下色譜條件進(jìn)樣，每份進(jìn)樣5次，以樣品峰面積與2，4-二硝基氯苯峰面積的比值（Y）為縱坐標(biāo)，樣品濃度（X）為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，回歸方程見表2；氣相色譜見圖1。

表1 細(xì)辛藥材樣品來源Tab 1 Origin of Asari Radix et Rhizoma medicinal materials

表2 回歸方程（n＝5）Tab 2 Regression equation（n＝5）

結(jié)果表明，敵敵畏在1.978×102～3.957×104ng·mL-1濃度范圍內(nèi)，甲體六六六在4.64～9.28×102ng·mL-1濃度濃度范圍內(nèi)，五氯硝基苯在1.554×102～3.108 ×104ng·mL-1濃度范圍內(nèi)，丙體六六六在4.52～9.04×102ng·mL-1濃度范圍內(nèi)，毒死蜱在2.74～5.472×102ng·mL-1濃度范圍內(nèi)，馬拉硫磷在4.19×10～8.380×103ng·mL-1濃度范圍內(nèi)，丁體六六六在 5.22～1.044×103ng·mL-1濃度范圍內(nèi)，對硫磷在8.184×10～1.637×104ng·mL-1濃度范圍內(nèi)，op′-滴滴滴在 4.972×10～9.944 ×103ng·mL-1濃度范圍內(nèi)，pp′-滴滴滴在5.06×10～1.012×104ng·mL-1濃度范圍內(nèi)與各自峰面積與2，4-二硝基氯苯峰面積比值呈良好線性關(guān)系。各農(nóng)藥回歸方程的相關(guān)系數(shù)為0.990 3～0.999 1，儀器精密度為1.2%～3.4%，方法精密度為6.5%～7.4%，加樣回收率為84.0%～103.2%，RSD為2.5%～8.8%。

2.3 供試品溶液的制備

取藥材約2 g，精密稱定，置于50 mL錐形瓶中，加丙酮-水（7∶3）混合溶液40 mL，搖勻，超聲處理15 min，抽濾，藥渣再重復(fù)上述操作1次后，合并濾液。濾液轉(zhuǎn)入250 mL分液漏斗中，加20 mL 5%NaCl溶液，振搖萃取，無機相再分別用60 mL正己烷萃取2次，合并正己烷相于250 mL磨口瓶中，于50～60℃水浴上旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至約2 mL，作為提取液。通過20 mL正己烷預(yù)淋的層析柱（層析柱由下至上：少許玻璃棉+2 g無水硫酸鈉+5 g弗羅里硅土+2 g氧化鋁+2 g無水硫酸鈉），再用50 mL丙酮-正己烷（1∶4）溶液進(jìn)行洗脫，洗脫液收集于250 mL磨口燒瓶中，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至約2 mL，再轉(zhuǎn)入10 mL容量瓶，用正己烷定容，即得。

2.4 出峰順序

照“2.1”項下色譜條件進(jìn)樣測定。結(jié)果，出峰順序為：敵敵畏、甲體六六六、五氯硝基苯、丙體六六六、毒死蜱、馬拉硫磷、丁體六六六、對硫磷、op′-滴滴滴、pp′-滴滴滴。

2.5 色譜系統(tǒng)精密度試驗

精密吸取同一濃度對照品溶液1 μL，重復(fù)進(jìn)樣5次，按“2.1”項下色譜條件測定。結(jié)果，敵敵畏、甲體六六六、五氯硝基苯、丙體六六六、毒死蜱、馬拉硫磷、丁體六六六、對硫磷、op′-滴滴滴、pp′-滴滴滴的 RSD分別為 3.0%、2.4%、2.8%、1.2%、3.0%、2.6%、2.2%、2.4%、2.1%、3.4%。

2.6 方法精密度試驗

精密稱取1號樣品2 g，共5份，放置12 h，按供試品制備方法制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件進(jìn)樣測定。結(jié)果，丙體六六六、對硫磷、op′-滴滴滴的RSD分別為6.7%、7.4%和6.5%。

2.7 回收率試驗

精密稱取1號樣品2 g，共9份，分3個水平添加混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液，每個水平重復(fù)3次，混勻。按上述條件提取、凈化、測定并計算回收率，結(jié)果見表3。

2.8 供試品的測定

精密稱取各藥材2 g，按供試品提取和凈化方法操作項下平行制備樣品各3份，按“2.1”項下色譜條件測定。每份樣品重復(fù)2次，每次進(jìn)樣1 μL，用內(nèi)標(biāo)法定量。樣品中農(nóng)藥殘留量檢測結(jié)果見表4（表中“ND”為低于檢測線）。

3 討論

筆者采用超聲提取和弗羅里硅土柱凈化，對樣品進(jìn)行前處理，步驟簡單，便于應(yīng)用；采用GC-ECD法同時測定了24種中藥材中的10種農(nóng)藥殘留，方法簡便，易于操作。

農(nóng)藥殘留量測定中，《中國藥典》規(guī)定了有機氯類農(nóng)藥殘留量的測定方法，包括六六六、滴滴涕和五氯硝基苯。規(guī)定甘草和黃芪的限量為總 BHC≤0.2×10-6，總 DDT≤0.2×10-6，PCNB≤0.1×10-6[5]。美、英和歐洲藥典除規(guī)定了有機氯類農(nóng)藥殘留量外，還規(guī)定了有機磷類農(nóng)藥的限量：毒死蜱0.2 ppm，敵敵畏1.0 ppm，六六六0.3 ppm，馬拉硫磷1.0 ppm，對硫磷0.5 ppm，五氯硝基苯1.0 ppm，滴滴涕1.0 ppm[6～8]，本文所測樣品中的農(nóng)藥殘留量均低于中、美、英及歐洲藥典要求。

表3 回收率試驗結(jié)果（n＝3）Tab 3Results of recovery tests（n＝3）

表4 樣品中農(nóng)藥殘留量（mg·kg-1）Tab 4 Pesticide residues in the samples（ mg·kg-1）

[1] 萬益群，李申杰，鄢愛平.白術(shù)中有機磷及氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量的測定[J].分析科學(xué)學(xué)報，2007，23（3）：299.

[2] 向增旭，趙維佳，郭巧生.金銀花中18種有機磷農(nóng)藥殘留量分析方法的研究[J].中國中藥雜志，2006，31（16）：1 321.

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[4] 周洪波，房志堅，楊立偉，等.固相萃取-GC-MS聯(lián)用法測定何首烏中有機氯農(nóng)藥殘留量[J].中國藥房，2010，21（19）：777.

[5] 國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典（一部）[S].2010年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：附錄57.

[6] The United States Pharmacopeial Convention.U.S.Pharmacopeia（24）/National Formulary（19）[S].Philadelphia PA：States Pharmacopeial Convention，2000：19.

[7] British Pharmacopoeia Commission.British Pharmacopoeia[S].London：States Pharmacopeial Commission，2000：Appendix，81.

[8] Council of Europe.European Pharmacopoeia[S].Strasbourg：States Pharmacopeial Convention，2011：242.