瘤組織“過渡性演變”與部分細胞增殖基因表達調(diào)節(jié)相關(guān)性探討

鄭海燕 陳浩慧

（龍口市人民醫(yī)院，山東 龍口 265701）

腫瘤轉(zhuǎn)化是多因素作用下，經(jīng)歷多步驟、多物質(zhì)、復雜演變過程。癌細胞演變特點及一般規(guī)律是經(jīng)歷了增生-不典型增生-瘤變-癌變的過程。在臨床及病理觀察發(fā)現(xiàn)很多癌前病變、不典型增生病例；也可在癌組織周邊發(fā)現(xiàn)癌前病變-不典型增生-正常組織之間的“過渡現(xiàn)象”。因此可以認為腫瘤形成過程中存在細胞的基因表達、物質(zhì)生產(chǎn)的逐步的自我調(diào)節(jié)性的演變，最終導致細胞性質(zhì)轉(zhuǎn)化。我們應用免疫組織化學技術(shù)，檢測癌變、“癌過渡區(qū)”及正常組織的相關(guān)主要的增殖蛋白基因表達狀態(tài)，并對細胞演變過程中基因表達的調(diào)節(jié)作用趨向、物質(zhì)變化及其意義進行對比分析，以探討基因表達調(diào)節(jié)及細胞增殖調(diào)控蛋白在細胞演變過程作用地位。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

搜集龍口市人民醫(yī)院2005年后不同組織起源的惡性腫瘤，選擇具有癌-重度不典型增生（瘤變）-正常組織的典型病例之典型部位，確定在同一病例切片內(nèi)包含以上3種病變。其中過渡區(qū)組織細胞的特點為：細胞及核異型、核增大、染色質(zhì)增多濃染、核分裂多見，細胞排列極向消失，但原組織結(jié)構(gòu)存在、無浸潤。收集92例典型病例中有：腺癌55例：包括胃腺癌31例結(jié)腸癌9例、肺癌6例、子宮內(nèi)膜癌7例、腮腺黏液表皮癌2例；鱗癌37例：包括皮膚癌14例、食道癌8例、宮頸癌11例、牙齦癌4例。

1.2 方法

應用邁新公司提供的免疫組織化學抗體（能夠代表組織細胞增殖受體、增殖蛋白、周期素、蛋白酶的抗體）試劑13種，隨機提取所選病例，分四批次進行免疫組織化學檢測。選擇切片、染片范圍為2～1cm2面積以上，并確保同一切片內(nèi)包含癌、過渡區(qū)及正常組織區(qū)域。

1.3 判斷標準

把免疫組織化學檢測陽性率10%≤30%記為一個（+）加號、≥30%的歸屬于兩個（++）加號統(tǒng)計分析比較。

試劑中英對照（表皮生長因子受體：EGFR；生長因子：TGF-β1；癌基因蛋白：p21；增殖細胞核抗原：PCNA；癌胚抗原：CEA；原癌基因：C-myc；周期素Cyclin-D1，周期素E：Cyclin-E；周期素A：Cyclin-A；周期素依賴激酶CDK-2；金屬蛋白酶：MMP-9；組織蛋白酶cathepsin-D1；增殖細胞核抗原Ki-67）。

1.4 統(tǒng)計學方法

計算不同區(qū)域陽性率比較的μ檢驗，得出P值分析判斷差異的意義。

2 結(jié) 果

2.1 按病變性質(zhì)區(qū)域不同分類并統(tǒng)計陽性表達率，分析比較結(jié)果：癌組織和過渡區(qū)內(nèi)的增殖受體（EGFR，TGF-β1）、增殖基因蛋白（p21，PCNA，CEA，CyclinD1，Ki-67，C-myc）、細胞周期素及周期蛋白酶（Cycin-E，Cycin-A，CDK-2）表達均高于正常組織；11項目在癌組織與過渡區(qū)陽性表達無明顯差異，合計陽性率（一個加號以上的病例）分別為：癌組織87.6%、過渡區(qū)組織81.7%，μ檢驗：P1=0.874，P2=0.817，Pc=0.837，SP1-P2=1.068，μ=0.0533，所以P＞0.01無明顯差異。與正常組織的陽性率（6.8%）比較P值＜0.01，存在明顯差異。見表1。

表1 癌組織、過渡區(qū)及正常組織免疫組織化學結(jié)果統(tǒng)計

2.2 癌組織區(qū)域內(nèi)基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-9、組織蛋白酶D1檢測合計陽性率：癌變區(qū)（95.1%）、過渡區(qū)陽性率45.6%、兩區(qū)比較：MMP-9的μ=6.966＞2.58；cathepsin-的μ=7.979＞2.58，二者的前兩區(qū)比較P值＜0.01具有明顯差異。與正常組織區(qū)的陽性率（8.6%）比較P值＜0.01也具有明顯差異。見表1。

2.3 不同病例的陽性項目及程度不完全相同；其中過渡區(qū)的檢測有191項/例的陽性程度高于癌組織，占16.3%，其多為低分化癌/晚期病例；有9例過渡區(qū)Ki-67表達高于癌組織，且與癌細胞分化無明顯相關(guān)性。

2.4 不同起源組織發(fā)生的腫瘤之間的相關(guān)增殖基因表達無明顯差異；腺癌與鱗癌及個體之間的相關(guān)增殖基因蛋白表達無明顯差異，且受病例數(shù)量限制，因此列項單獨統(tǒng)計比較。

3 分析討論

3.1 在腫瘤的周邊區(qū)域常可發(fā)現(xiàn)從正常組織-增生-不典型增生-癌變的“過渡演變”現(xiàn)象，目前多認為不典型增生為癌前病變（廣義也包括交界性腫瘤）或為細胞演變前期狀態(tài)。不同階段細胞形態(tài)變化和基因表達的物質(zhì)變化，在一定程度上反映了腫瘤細胞的演變動態(tài)過程[1]。見圖1和圖2。

圖1 腮腺黏液表皮癌交界區(qū)

圖2 腮腺黏液表皮癌交界區(qū)PCNA

本文統(tǒng)計，過渡區(qū)與癌變區(qū)域內(nèi)增殖受體（EGFR，TGF-β1）、增殖基因蛋白（p21，PCNA，CEA，CyclinD1，Ki-67，C-myc）、細胞周期素及周期蛋白酶，Cycin-E，Cycin-A，CDK-2均高表達，在過渡區(qū)與癌組織之間的表達無明顯差異，但明顯高于正常組織。顯示在癌變前期已發(fā)生細胞增殖相關(guān)基因趨向高表達的調(diào)節(jié)變化（基因擴增基因高表達），此調(diào)節(jié)的結(jié)果只是增殖相關(guān)蛋白數(shù)量的增加[2]，致細胞增殖性能強化，尚未達到細胞性質(zhì)改變。而細胞增殖性強化為癌細胞及演變前的主要/共同特征。

在不同起源組織發(fā)生的腫瘤之間，增殖相關(guān)基因表達無明顯差異，提示不同腫瘤細胞演變過程的增殖基因表達調(diào)節(jié)趨向、步驟基本一致，細胞增殖性強化為細胞演變提供前期條件。此結(jié)果顯示了增殖基因表達及調(diào)控作用在腫瘤早期演變過程中的基礎(chǔ)作用地位[2,3]。因此在細胞增殖轉(zhuǎn)化進程中，有理由把前期增殖相關(guān)基因表達的趨向性調(diào)節(jié)物質(zhì)視為細胞演變“啟動”物質(zhì)，其生物調(diào)節(jié)調(diào)控作用，驅(qū)動著細胞演變進程的發(fā)展。

而不同病例的陽性項目及程度的不完全相同性，又可表明癌組織細胞基因表達的差異性（相對不穩(wěn)定性），以及組織細胞的增殖調(diào)節(jié)物質(zhì)作用的調(diào)節(jié)非嚴格的準確性。而共同的調(diào)節(jié)趨向-細胞增殖性的強化，細胞向高增殖性轉(zhuǎn)化[4]。

3.2 細胞轉(zhuǎn)化達到具有高增殖性及侵蝕性即具備惡性腫瘤的演變特征。本組檢測癌組織的基質(zhì)金屬蛋白酶9、組織蛋白酶D1的表達明顯高于“過渡渡區(qū)”及正常組織，為癌與過渡區(qū)突出的差異點。顯示細胞的內(nèi)部代謝強化調(diào)節(jié)活動，導致了相關(guān)蛋白酶基因的發(fā)生高表達。（正常情況下，蛋白酶基因在多數(shù)已分化的功能細胞為低表達/或多數(shù)狀態(tài)情況下此基因處封閉狀態(tài)。蛋白酶為細胞代謝最基本的奢侈基因蛋白，高表達是細胞增殖代謝強化的另一標志[4]）。蛋白酶高表達與腫瘤細胞的破壞周圍、攝取物質(zhì)能力增強相關(guān)，為細胞癌變及轉(zhuǎn)移性能強弱的標志之一。細胞此變化可以視為基因表達調(diào)節(jié)改變/紊亂導致細胞發(fā)生性質(zhì)、功能及行為方面變化依據(jù)之一?，F(xiàn)已研究證實，細胞在調(diào)節(jié)演變過程中，達到增殖基因高表達、必有部分分化、功能相關(guān)的基因受到抑制而低表達；部分封閉基因啟動，可以導致細胞內(nèi)部其它基因的調(diào)節(jié)作用蛋白物質(zhì)比例失衡，進一步導致生物代謝程序紊亂及基因表達調(diào)控時序紊亂，最終也必然能夠?qū)е录毎x生產(chǎn)異常（基因突變等）而發(fā)生細胞性能演變-癌變[5,6]。

4 觀 點

增殖受體（EGFR，TGF-β1）、增殖基因蛋白（p21，PCNA，CEA，CyclinD1，Ki-67，C-myc）、細胞周期素及周期蛋白酶，Cycin-E，Cycin-A，CDK-2在腫瘤過渡區(qū)與癌變區(qū)域內(nèi)均高表達，其為細胞增殖調(diào)節(jié)強化/增殖能力強化的標志，細胞增殖性強化為癌細胞及演變前的主要/共同特征。基質(zhì)金屬蛋白酶-9、組織蛋白酶D1高表達為癌與過渡區(qū)突出的差異點，標志腫瘤細胞的破壞周圍、攝取物質(zhì)能力增強及細胞性能轉(zhuǎn)化（癌轉(zhuǎn)化）。利用正常組織、過渡區(qū)、癌組織區(qū)代表腫瘤演變不同階段，有利于從動態(tài)角度認識細胞演變過程；應用免疫標記方法檢測細胞演變不同階段基因表達變化，統(tǒng)計比較分析表達特點，從部分角度探討其細胞內(nèi)部物質(zhì)變化規(guī)律，意義在探討細胞演變過程的不同階段的基因表達及相關(guān)增殖蛋白的作用地位以及與細胞性能變化的關(guān)系，此研究方式可行性及觀點供參考及討論。

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