子宮內(nèi)膜癌組織中YKL-40、NF-κ B的表達及臨床意義

陳麗平,盧 丹,孔 祥

(1.川北醫(yī)學院附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科,四川南充,637000;2.揚州大學臨床醫(yī)學院婦產(chǎn)科 ,江蘇揚州,225001)

子宮內(nèi)膜癌是發(fā)生于子宮內(nèi)膜的上皮惡性腫瘤,子宮內(nèi)膜樣腺癌占80%～90%[1-2],子宮內(nèi)膜癌的病因目前不是完全清楚,其發(fā)生、發(fā)展是一個多因素和多個基因變異的復雜過程[3]。YKL-40(甲殼質(zhì)酶蛋白40)又名人類軟骨糖蛋白,屬于哺乳動物18糖基水解酶家庭成員之一,近來研究發(fā)現(xiàn)YKL-40在腫瘤細胞的生長、侵襲和轉(zhuǎn)移起重要作用[4-8]。核轉(zhuǎn)錄因子NF-κ B是一種多向性、多功能的核轉(zhuǎn)錄因子,可調(diào)控細胞凋亡、增殖的相關(guān)基因,在細胞癌變過程中發(fā)揮重要作用[10-13]。作者采用免疫組化的方法檢測子宮內(nèi)膜癌組織中YKL-40和NF-KB的表達情況,并比較其與臨床病理特征的關(guān)系,探討YKL-40和NF-κ B在子宮內(nèi)膜癌發(fā)生、發(fā)展中的作用及相關(guān)性。

1 材料和方法

1.1 材料

收集2002年1月～2007年12月間臨床病理子宮內(nèi)膜樣腺癌患者石蠟包埋標本65例,患者在術(shù)前均未接受化療、放療或其他抗腫瘤治療,標本均來源于江蘇省蘇北人民醫(yī)院,由婦產(chǎn)科病理專家復審病理診斷。患者年齡42～70歲,平均53歲。正常子宮內(nèi)膜標本40例,收集同期因子宮良性腫瘤而行子宮全切(或子宮次全切)的患者或行診斷性刮宮的患者的標本。患者年齡36～54歲,平均43歲。兔抗人YKL-40單克隆抗體購自美國Quidel公司,鼠抗人 NF-κ B-P65均購自北京中山生物技術(shù)有限公司。

1.2 方法

上述標本經(jīng)10%福爾馬林固定,通過常規(guī)石蠟包埋,4 μ m連續(xù)切片,采用免疫組織化學二步法檢測YKL-40、NF-κ B-P65。以PBS代替一抗做陰性對照,用已知 YKL-40和NF-κ BP65染色陽性的膠質(zhì)母細胞瘤組織為陽性對照。

1.3 結(jié)果判定

YKL-40:YKL-40蛋白定位于細胞漿,以細胞漿出現(xiàn)黃色顆粒染色為陽性細胞。NF-κ B/P65:NF-κ B/P65蛋白定位于細胞漿和(或)細胞核,以細胞漿和(或)細胞核出現(xiàn)黃色顆粒為陽性細胞。YKL-40和NF-κ B/P65采用統(tǒng)一的染色積分評價標準:根據(jù)染色細胞百分率及染色強度進行分析評定。①染色強度:棕褐色為3分,棕黃色為 2分,淺黃色為 1分,基本不著色為0分。②陽性細胞細胞占計數(shù)細胞的百分率:>75%計4分,50%～75%計3分,26%～50%計2分,6%～25%計1分,≤5%計0分。

2 結(jié) 果

2.1 YKL-40和NF-κ B-P65在正常子宮內(nèi)膜和子宮內(nèi)膜癌中的表達

在正常子宮內(nèi)膜中YKL-40的陽性率為32.5%(13/40),在子宮內(nèi)膜癌中YKL-40的陽性率76.9%(50/65),2組比較差異有顯著意義(P<0.01),NF-κ B/P65在正常子宮內(nèi)膜及子宮內(nèi)膜癌組織中的陽性表達率分別30%(12/40)和73.8%(48/65),2組比較差異存在顯著性意義(P<0.01)。

2.2 YKL-40、NF-κ B-P6的表達與子宮內(nèi)膜癌臨床病理特征

YKL-40、NF-κ B-P65陽性表達率與組織學分級程度有關(guān)(P<0.05),而與子宮內(nèi)膜癌患者的臨床分期、肌層浸潤、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、年齡均無明顯相關(guān)性,見表1。

表1 YKL-40、NF-κ B-P65與子宮內(nèi)膜癌臨床病理特征的關(guān)系

3 討 論

YKL-40屬于哺乳動物甲殼質(zhì)酶樣蛋白成員,最早是在非泌乳期牛的乳汁分泌物中發(fā)現(xiàn)[14-15]。最初對YKL-40的研究主要集中在骨關(guān)節(jié)炎、類風濕性關(guān)節(jié)炎等炎癥性關(guān)節(jié)疾病上。近年來研究發(fā)現(xiàn)其與惡性腫瘤聯(lián)系密切。YKL-40可以由多種人體腫瘤細胞分泌和表達,其中包括骨腫瘤、乳腺癌、大腸癌、腦腫瘤、肺癌、前列腺癌、惡性膠質(zhì)細胞瘤、卵巢癌、子宮惡性腫瘤和胰腺癌等[14]。通過對健康婦女、婦科良性疾病患者及子宮內(nèi)膜癌患者血清YKL-40的測定得出結(jié)論,血YKL-40可作為診斷早期子宮內(nèi)膜癌及高風險人群患者預(yù)后不良判定的新的腫瘤指標,而且其獨立于CA125、CA153等常用的腫瘤標專物,國此作者認為YKL-40在惡性腫瘤的診斷、預(yù)后、復發(fā)、病情監(jiān)測等方面有重要作用[15]。

NF-κ B是介導細胞內(nèi)信號傳遞最重要的核轉(zhuǎn)錄因子,最常見的二聚體是P50/RelA(p65)異源二聚體,幾乎存在于所有的真核細胞中[16]。作為信號傳導途徑中的樞紐,能與炎癥反應(yīng)、細胞分化和生長、調(diào)控免疫應(yīng)答、細胞粘附和凋亡所必需的許多細胞因子、粘附分子等基因啟動子或增強子部位的κ B位點發(fā)生特異性結(jié)合,啟動和調(diào)節(jié)這些基因的轉(zhuǎn)錄、表達。近來發(fā)現(xiàn)其活性在不同的腫瘤細胞類型、不同化療藥物作用等因素顯示不同,可能在腫瘤的發(fā)生和發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用。在人類肝癌[17]、膀胱癌[18]、腎癌[19]等多種腫瘤中發(fā)現(xiàn)有持續(xù)NF-κ B激活的現(xiàn)象,提示NF-κ B在細胞惡變過程中起著重要作用。

本實驗應(yīng)用免疫組化檢測YKL-40和NF-κ B蛋白在正常子宮內(nèi)膜和子宮內(nèi)膜癌組織中的表達情況。通過實驗證實,YKL-40在正常組織中低表達,而在子宮內(nèi)膜癌組織中高表達,NF-κ B-P65在內(nèi)膜癌組織中陽性表達率明顯高于正常內(nèi)膜。在正常子宮內(nèi)膜YKL-40蛋白與NF-KB-P65表達無相關(guān)關(guān)系,但在子宮內(nèi)膜癌中NF-κ B-P65與YKL-40表達呈正相關(guān),表明NF-κ B在子宮內(nèi)膜癌YKL-40的表達中可能起著重要的作用,NF-κ B可能調(diào)控YKL-40的過表達,至少部分是由NF-κ B調(diào)控的。在各種致癌因素作用下,激活的NF-κ B由胞漿進入核內(nèi),結(jié)合 YKL-40啟動子上的NF-κ B結(jié)合位點,與其他DNA結(jié)合蛋白一起上調(diào)YKL-40的表達,引起凋亡失衡、細胞增殖等系列變化。但最近在惡性膠質(zhì)瘤中的研究發(fā)現(xiàn),NF-κ B是YKL-40的負性調(diào)節(jié)劑,其與NF-κ B具有顯著的負相關(guān)系,在軟骨肉瘤中兩者具有顯著的正相關(guān)關(guān)系,這都說明了YKL-40的調(diào)節(jié)的復雜性,是多種因子相互調(diào)節(jié)的結(jié)果[10,20-21]。

對于子宮內(nèi)膜癌發(fā)生、發(fā)展中YKL-40及NF-κ B的作用,對于YKL-40及NF-κ B在子宮內(nèi)膜癌高表達的機制、相關(guān)的信號傳導途徑的研究將有助于揭開子宮內(nèi)膜癌發(fā)生機制,并可以發(fā)現(xiàn)更多的治療靶點,從而有利于為子宮內(nèi)膜癌者選擇個體治療方案。

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