HPLC法測定多動(dòng)寧膠囊中鹽酸小檗堿的含量

陳云松

（丹東市中心醫(yī)院，遼寧丹東 118002）

多動(dòng)寧膠囊為治療兒童多動(dòng)癥的中成藥，標(biāo)準(zhǔn)為國家藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)（試行）WS-5111（B-0111）-2002，由黃柏、熟地黃、龜甲、遠(yuǎn)志、石菖蒲、山茱萸等共十一味藥材組成，具有滋養(yǎng)肝腎，開竅，寧心安神的功效[1-3]。標(biāo)準(zhǔn)中有熊果酸的含量測定，但方法為薄層掃描法，操作復(fù)雜，誤差比較大。筆者采用了HPLC法[4-5]對(duì)其臣藥黃柏中主要有效成分之一的鹽酸小檗堿進(jìn)行了含量測定，方法簡便、準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

日本Shimadzu公司LC－10ATVP高效液相色譜儀；檢測器：SPD－M10ATVP；Class-vp 工作站；SK7200HP 超聲波清洗器（上?？茖?dǎo)超聲波儀器有限公司）。

1.2 試藥

鹽酸小檗堿對(duì)照品（批號(hào)：110713-200208，供含量測定用，中國藥品生物制品檢定所）；乙腈為色譜純；水為二次蒸餾水；其他試劑均為分析純；多動(dòng)寧膠囊（批號(hào)：20070302、20070303、20070304，河南靈佑藥業(yè)有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Diamonsil-C18TM 鉆石 （4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈-0.033 mol/L 磷酸二氫鉀溶液（40∶60）；檢測波長：345 nm；柱溫：25℃；流速：1.0 ml/min。 理論板數(shù)按鹽酸小檗堿峰計(jì)算不低于2000。

2.2 對(duì)照品溶液制備

精密稱取減壓干燥至恒重的鹽酸小檗堿對(duì)照品10.06 mg，置100 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品貯備液。精密吸取此液2 ml，置10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得（每毫升含鹽酸小檗堿20.12 μg）。

2.3 供試品溶液制備[6-8]

取重量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物0.2 g，研勻，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加入甲醇20 ml，超聲處理（功率250 W，頻率20 kHz）30 min，取出，濾過，濾液蒸干，用少量無水乙醇溶解，加在氧化鋁柱上（中性氧化鋁 100～200目，10 g，內(nèi)徑約0.9 cm，干法裝柱），用無水乙醇60 ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)眉状既芙獠⒍ㄈ葜?0 ml，搖勻，即得。

2.4 陰性對(duì)照溶液制備

陰性對(duì)照樣品按處方比例配制，其中缺黃柏成分，按供試品方法測定，照“2.3”項(xiàng)下方法制備，得陰性對(duì)照溶液。

2.5 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

分別取鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液和供試品溶液各10 μl，按上述色譜條件進(jìn)行試驗(yàn)，考察系統(tǒng)適用性。HPLC色譜圖見圖1。結(jié)果顯示在鹽酸小檗堿對(duì)照品吸收峰位置處無干擾[4-5]。

2.6 線性關(guān)系考察

精密吸取 0.5、1、2、4、8 ml對(duì)照品貯備液分別置于 10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻后各吸取10 μl溶液注入液相色譜儀中，測定峰面積，以鹽酸小檗堿進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸。得回歸方程：Y＝68812.70X+93781.42（r=0.9998），表明鹽酸小檗堿在 0.0503～0.8048 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.7 精密度試驗(yàn)

分別精密吸取10 μl濃度為20.12 μg/ml的鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液，按上述色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣測定5次，結(jié)果平均峰面積為1539657，RSD=1.03%。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取等份供試品溶液分別放置 2、4、8、12、16、20、24h 測定供試品中鹽酸小檗堿的峰面積，測得其峰面積的平均值為1576452，RSD為1.21%，表明供試品溶液至少在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.9 重現(xiàn)性試驗(yàn)

精密吸取等份供試品6份，按“2.3”項(xiàng)下方法操作，制備供試品溶液，測定供試品中鹽酸小檗堿的含量，結(jié)果平均含量為 0.43 mg/粒，RSD=1.25%。

2.10 回收率試驗(yàn)

取已知鹽酸小檗堿含量的多動(dòng)寧膠囊樣品 （批號(hào)：20070302，鹽酸小檗堿含量為 0.45 mg/粒）約 0.1 g，精密稱定，共6份，分別精密加入鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液（5.030 μg/ml）25 ml，測定多動(dòng)寧膠囊中鹽酸小檗堿的含量，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=6）Tab.1 Results of recovery test(n=6)

2.11 樣品含量測定

按“2.3”項(xiàng)下方法操作，制備供試品溶液，測定三批多動(dòng)寧膠囊中鹽酸小檗堿的含量，結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測定結(jié)果（%，n=3）Tab.2 Content determination results of samples(%,n=3)

3 討論

采用高效液相色譜法對(duì)多動(dòng)寧膠囊中鹽酸小檗堿的含量進(jìn)行測定，色譜條件：色譜柱為Diamonsil-C18TM鉆石（4.6mm×250 mm，5 μm）色譜柱；流動(dòng)相：乙腈-0.033 mol/L 磷酸二氫鉀溶液（40∶60）；檢測波長：345 nm；柱溫：25℃；流速：1.0 ml/min；理論板數(shù)按鹽酸小檗堿峰計(jì)算不低于2000。鹽酸小檗堿在0.0503～0.8048 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r=0.9998)。鹽酸小檗堿平均回收率為98.33%，RSD=0.63%。

筆者曾采用甲醇20 ml超聲提取后直接進(jìn)樣，結(jié)果樣品分離效果差，雜質(zhì)峰較多，而用甲醇提取，經(jīng)中性氧化鋁柱處理，然后再進(jìn)樣，雜質(zhì)峰少，取得了很好的分離效果[6-8]，故確立為含量測定方法。本法操作簡便，效果好，結(jié)果準(zhǔn)確，能真實(shí)地反映多動(dòng)寧膠囊中鹽酸小檗堿的實(shí)際含量，可用于其質(zhì)量控制。

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