北五味子配方顆粒提取工藝的正交設計試驗優(yōu)選

葉綠萍，李啟軍，劉小意

1.廣西中醫(yī)學院一附院藥學部，廣西南寧 530023；2.廣西壯族自治區(qū)南寧市武鳴縣人民醫(yī)院藥劑科，廣西南寧 530100

中藥配方顆粒又稱免煎中藥，單味中藥濃縮顆粒是將單味中藥飲片經(jīng)過科學加工并提取中藥材的有效成分后，制成的中藥飲片新劑型[1]。五味子配方顆粒劑以五味子藥材或飲片為原料，經(jīng)水提取后加適量輔料，濃縮，噴霧干燥，干式制粒而制成的顆粒劑型，臨床要求其要具有與原藥材相同的功效[2]。本實驗依據(jù)中藥傳統(tǒng)湯劑的煎煮方法，以提取率、五味子甲素（DSSD）、五味子乙素（γ-schisandrin，γ-SSD）含量為指標，采用正交試驗法優(yōu)選北五味子配方顆粒的最佳提取工藝。現(xiàn)報道如下：

1 儀器與試藥

1.1 儀器

美國Agilent 1100高效液相色譜儀，G1322A-Degasser（真空脫氣機），G1311A 四元泵（QuatPump），G1313A 自動進樣器（ALS），DAD 檢測器，Agilent Chemstation（化學工作站）。AND GR202 電子分析天平（0.01 mg，日本），CREST 超聲波清洗器 （美國），旋轉蒸發(fā)儀RE-52A（上海亞榮生化儀器廠），KDM型連續(xù)可調(diào)控溫電熱套（山東鄄城）。

1.2 試藥

五味子甲素 （中國藥品生物制品檢定所提供，批號：110764-200905）、五味子乙素（中國藥品生物制品檢定所提供，批號：110765-200905）。北五味子配方顆粒（自制，批號：20100401、20100501、20100502）。 HPLC 用甲醇（天津四友生物醫(yī)學技術有限公司，色譜純），娃哈哈純凈水（桂林娃哈哈飲用水有限公司），氯仿等化學試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Hypersil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相：甲醇-水（75∶25）；流速：1.0 ml/min；檢測波長：254 nm；柱溫：室溫；進樣量：10 μl。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取減壓干燥至恒重的五味子甲素及五味子乙素對照品適量，分別加甲醇配制成0.100 mg/ml及0.125 mg/ml的對照品。

2.2.2 供試品溶液的制備 取北五味子顆粒約2.0 g，精密稱定，加氯仿10 ml，超聲提取30 min，濾過，濾液置水浴上蒸干，殘渣加甲醇溶解，定容至10 ml量瓶中，作為供試品溶液。

2.3 線性關系考察

分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液各10 μl，注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件，測定DSSD及γ-SSD的含量。結果在既定的HPLC測定方法下，北五味子配方顆粒中 DSSD 及 γ-SSD 含量分別在 0.265～1.590 μg和 0.638～3.188 μg范圍內(nèi)，進樣量與峰面積的線性關系良好（r=1.0000和r=0.9999），平均回收率分別為101.12%和100.38%，RSD值分別為1.75%和1.10%。

2.4 正交因素水平的選定

北五味子的傳統(tǒng)用法主要是與其他藥材配成處方，加水煎成湯劑服用，而北五味子配方顆粒是北五味子飲片的替代品。為保留中藥湯劑的特點，筆者在設計處理因素時，主要選擇水作為提取溶媒，以用水量（倍數(shù)）、提取次數(shù)、提取時間作為處理因素，每個因素選擇三個水平，進行L9（34）正交試驗，以五味子DSSD、γ-SSD含量作為評價指標，同時參考提取率，篩選出五味子提取的最佳條件?？疾煲蛩厮揭姳?。

表1 考察因素水平情況

2.5 正交試驗篩選五味子的提取工藝

依據(jù)L9（34）進行實驗安排，按照既定要求提取并制備北五味子配方顆粒，計算綜合評分時，由于顆粒中DSSD、γ-SSD含量較低，故在計算綜合評分時，將該數(shù)據(jù)擴大500倍，以求合理性。綜合評分=提取率+五味子甲素含量（%）×500+五味子乙素含量（%）×500。結果顯示，影響北五味子配方顆粒提取率 （%）、DSSD、γ-SSD含量的主要因素依次為提取次數(shù)、提取時間、用水量，其中提取次數(shù)對實驗結果有顯著影響，最佳工藝條件為B3C3A2，即加水量為10倍，提取3次，每次2 h。 結果見表2、3。

表2 L9（34）正交試驗篩選五味子的提取工藝結果

表3 方差分析結果

2.6 驗證試驗情況

稱取北五味子50 g，共3份，按照最優(yōu)條件B3C3A2提取，真空減壓濃縮至80 ml，按“供試品溶液的制備”項下操作，測定峰面積，計算提取率、藥液中五味子甲素及五味子乙素的含量。結果顯示，驗證結果與正交設計試驗預測結果基本接近，測得DSSD平均含量為0.024%，γ-SSD平均含量為0.049%，平均提取率為36.12%。即該提取工藝具有提取率穩(wěn)定性好、五味子甲素及五味子乙素得率高、操作簡單且成本較低的特點，提示該提取工藝穩(wěn)定、可行。見表4。

表4 驗證試驗結果（%）

3 討論

北五味子[Schisandra chinensis （Turcz.） Baill.]別名為五味子，為木蘭科植物五味子屬多年生落葉木質(zhì)藤本植物的干燥成熟果實，因其果實甘、酸、辛、苦、咸五味俱全而得名[3]。北五味子主產(chǎn)于遼寧、黑龍江、吉林等地。有研究表明，其水提液具有延緩衰老的作用；而乙醇提取液則有安眠鎮(zhèn)靜作用；木酯素類具有保肝護肝作用，而且五味子制劑對動物的長期不良反應少[4]，臨床多用于久咳虛喘、夢遺滑精、遺尿、尿頻、久瀉不止、自汗、盜汗、津傷口渴、短氣脈虛、內(nèi)熱消渴、心悸失眠等[5]。

目前，為了使配方顆粒的功效及特性盡可能地與中藥湯劑接近，國內(nèi)大部分專家、學者都主張采用以水作為提取溶媒，所以在北五味子配方顆粒制備過程中，筆者也采納了這一個主張。由于北五味子提取液中五味子甲素、五味子乙素含量較低，這可能與用水作為溶媒有關，不同批次的北五味子原料中五味子甲素、五味子乙素含量有一定的差異，所以生產(chǎn)過程中工藝參數(shù)的控制及原料的選取應給予足夠的重視。值得注意的是，由于南五味子中不含五味子乙素，所以本配方顆粒原料只能選用北五味子。結果顯示，其最佳工藝條件為加水量為10倍，提取3次，每次2 h。并測得DSSD平均含量為0.024%，γ-SSD平均含量為0.049%，平均提取率為36.12%。提示該提取工藝穩(wěn)定、可行。

[1]諸明娜.免煎中藥配方顆粒與傳統(tǒng)中藥飲片的比較[J].湖北中醫(yī)雜志,2004,26(11):55.

[2]國家藥品監(jiān)督管理局.中藥配方顆粒管理暫行規(guī)定[S].2001.

[3]聶江力,裴毅,祖元剛.北五味子果實超臨界CO2萃取工藝的研究[J].植物研究,2005,25(2):213-215.

[4]楊放,袁軍,付平.五味子的研究概況[J].華西藥學雜志,2003,18(6):438-440.

[5]國家藥典委員會.中國藥典[S].一部.北京:化學工業(yè)出版社,2005:44-45.