胃萎消顆粒治療大鼠慢性萎縮性胃炎的實(shí)驗(yàn)研究

李 艷 ，羅興菊 ，陳 駿 ，文家萍 ，郭蓮軍

1.湖北省宜昌市夷陵醫(yī)院，湖北宜昌 443100；2.湖北省宜昌市夷陵區(qū)醫(yī)療保險(xiǎn)局，湖北宜昌 443100；3.華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院，湖北武漢 430030

慢性萎縮性胃炎（CAG）是消化系統(tǒng)疾病治療中的難點(diǎn)之一，屬于癌前病變，對(duì)人類(lèi)健康威脅較大[1]?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)除密切隨訪(fǎng)和手術(shù)治療外，尚無(wú)其他較好的治療方法。臨床實(shí)踐表明，中醫(yī)中藥治療本病有較為滿(mǎn)意的效果，顯示了其廣闊的發(fā)展前景[2]571-574，[3]。胃萎消顆粒由隔山消、枳實(shí)、黃連、黨參、三七等11味中藥組成，具有養(yǎng)陰益氣、健脾導(dǎo)滯、祛瘀生新之功效。本實(shí)驗(yàn)采用熱鹽水灌胃致CAG動(dòng)物模型，觀察胃萎消顆粒對(duì)其治療作用，并探討其機(jī)制?，F(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下：

1 材料與方法

1.1 儀器

SN-682型放射免疫γ計(jì)數(shù)器（上海核福光電儀器有限公司）；DL-8R冷凍離心機(jī)（上海離心機(jī)械研究所）；胃泌素（GAS）、胃動(dòng)素（MTL）放射免疫試劑盒（北京華英生物技術(shù)研究所）。

1.2 試藥

胃萎消顆粒 （湖北宜昌市夷陵醫(yī)院制劑室制備，批號(hào)：20080913），處方組成為隔山消、黃連、枳實(shí)、黨參、白術(shù)、茯苓、三七、白芍、法半夏、甘草、干姜，使用蒸餾水配制成適用濃度的混懸液。

1.3 動(dòng)物

SD大鼠110只，體質(zhì)量200～213 g，♂，由華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，于普通級(jí)動(dòng)物觀察室飼養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào)：醫(yī)動(dòng)字第19-025號(hào)。隨機(jī)將110只SD大鼠分為5組，每組各22只，即正常對(duì)照組、模型對(duì)照組和胃萎消高、中、低劑量組。

1.4 方法

1.4.1 模型制作及給藥方法 除正常對(duì)照組外，其余各組均采用熱鹽水灌胃方法制作CAG動(dòng)物模型[4-5]。即用55℃的15%氯化鈉溶液灌胃，每日1次，每次2.5 ml，共12周。實(shí)驗(yàn)開(kāi)始，先處死10只正常對(duì)照組大鼠，并留取胃大體標(biāo)本作為對(duì)照。從第3周開(kāi)始，各造模組每2周處死2只大鼠，取胃標(biāo)本進(jìn)行病理檢查。第12周末，對(duì)照組鼠胃病檢無(wú)明確病態(tài)表現(xiàn)，其他各組胃病檢均符合慢性萎縮性胃炎表現(xiàn)，提示造模成功。從第13周開(kāi)始灌服藥物治療，至第24周末結(jié)束。其中胃萎消高、中、低劑量組分別予胃萎消顆粒相當(dāng)于原生藥5.00、2.50、1.25 g/（kg·d）灌胃，正常對(duì)照組和模型對(duì)照組予以等量蒸餾水灌胃。

1.4.2 檢測(cè)指標(biāo) 實(shí)驗(yàn)各組大鼠停藥并禁食12 h后，每只取血4 ml，平均置于2只試管中。取一管2000 r/min離心5 min，分離血清于-20℃下保存，待測(cè)GAS；在另一試管中加入預(yù)置的 10%EDTA-Na 30 μl和抑肽酶 30 μl，充分混勻，2000 r/min離心10 min，分離血漿于-20℃下保存，待測(cè)MTL。血清GAS和血漿MTL均采用放射免疫法測(cè)定。

1.4.3 病理組織學(xué)觀察 將各組大鼠剖腹取全胃，沿胃大彎剖開(kāi)并用生理鹽水漂洗，沿大鼠胃小彎條狀取材，放入10%甲醛中固定，取腺胃前壁、小彎、后壁自幽門(mén)到前胃各取材一條約 2.5 cm×0.3 cm 切片，蘇木精-伊紅（HE）染色，參照 1994年美國(guó)休斯頓胃炎診斷分類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)[2]，光鏡下觀察胃黏膜糜爛、萎縮、腸上皮化生、增生等情況。按照胃黏膜損傷的程度，分為輕、中、重、超重四個(gè)等級(jí)。損傷等級(jí)評(píng)分之和除以該組的動(dòng)物數(shù)，即平均胃黏膜損傷指數(shù)。

1.4.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SAS 6.12統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行處理數(shù)據(jù)，組間計(jì)量數(shù)據(jù)采用t檢驗(yàn)及秩和檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 胃萎消顆粒對(duì)大鼠血清GAS和血漿MTL的影響

CAG模型大鼠血清GAS和血漿MTL明顯降低（P<0.05或P<0.01），經(jīng)胃萎消顆粒治療12周后，大鼠血清GAS和血漿MTL升高。其中胃萎消高、中劑量組MTL明顯高于模型對(duì)照組（P<0.05），胃萎消各劑量組GAS均顯著高于模型對(duì)照組（均P<0.05）。 見(jiàn)表1。

表1 胃萎消顆粒對(duì)大鼠血清GAS和血漿MTL的影響（±s）

表1 胃萎消顆粒對(duì)大鼠血清GAS和血漿MTL的影響（±s）

注：與正常對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型對(duì)照組比較，#P＜0.05

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2.2 胃萎消顆粒對(duì)大鼠胃黏膜損傷的影響

各組大鼠胃黏膜損傷指數(shù)比較，胃萎消高、中、低劑量組顯著低于模型對(duì)照組（P<0.01或P<0.05）；各組大鼠胃黏膜萎縮、腸上皮化生、異常增生的發(fā)生鼠數(shù)量作雙向無(wú)序檢驗(yàn)，胃萎消高、中、低劑量組顯著低于模型對(duì)照組（P<0.01）。見(jiàn)表2。

表2 胃萎消顆粒對(duì)大鼠胃黏膜損傷的影響（±s）

表2 胃萎消顆粒對(duì)大鼠胃黏膜損傷的影響（±s）

注：與模型對(duì)照組比較，#P＜0.05，##P＜0.01；-代表無(wú)損傷

2.3 造模各組大鼠胃黏膜病理組織學(xué)檢查

大鼠造模后各組胃黏膜組織病理切片中腺體及纖維結(jié)締組織增生情況，見(jiàn)表3。

3 討論

本實(shí)驗(yàn)采用熱鹽水灌胃制作CAG模型。大鼠經(jīng)持續(xù)的12周熱鹽水連續(xù)刺激后，胃黏膜受到不同程度損傷。經(jīng)不同劑量，尤其是高、中劑量的胃萎消顆粒治療后，胃黏膜萎縮、腸上皮化生、異常增生鼠數(shù)明顯減少；病理結(jié)果也顯示，經(jīng)治療，腺體排列較規(guī)則，無(wú)萎縮，固有層中無(wú)纖維結(jié)締組織增生。分析其機(jī)制，可能與GAS和MTL有關(guān)[2]581-583，[6-7]。

表3 造模后各組大鼠胃黏膜病理組織學(xué)檢查結(jié)果

GAS由胃竇G細(xì)胞產(chǎn)生，是胃黏膜的主要營(yíng)養(yǎng)因子，可通過(guò)直接作用胃壁細(xì)胞上的胃泌素受體，或通過(guò)刺激產(chǎn)生Reg蛋白等生長(zhǎng)因子促使胃黏膜細(xì)胞增殖，對(duì)胃黏膜直接或間接地發(fā)揮營(yíng)養(yǎng)和保護(hù)作用[6，8]。MTL主要作用是刺激胃腸道和膽道運(yùn)動(dòng)，還能刺激胃蛋白酶和胰液的分泌，有助于胃排空和食物消化。在CAG模型大鼠中，胃黏膜腺體萎縮，黏膜變薄，血清GAS和血漿MTL明顯下降[9-10]。

本研究結(jié)果顯示，經(jīng)過(guò)胃萎消顆粒相當(dāng)于原生藥2.50g/（kg·d）以上劑量治療后，大鼠血清GAS和血漿MTL顯著升高，胃黏膜損傷減輕，腺體排列較規(guī)則。提示胃萎消顆粒治療大鼠實(shí)驗(yàn)性CAG的機(jī)制可能是通過(guò)促進(jìn)GAS和MTL等胃腸激素的分泌，從而增加胃動(dòng)力，促進(jìn)胃液分泌，營(yíng)養(yǎng)和修復(fù)損傷的胃黏膜來(lái)實(shí)現(xiàn)的。表明胃萎消顆粒對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性CAG胃部相關(guān)病變有較好的治療作用。

[1]王茜,龔其海,吳芹,等.石斛生物總堿對(duì)原代皮層神經(jīng)元氧糖剝奪的保護(hù)作用[J].中國(guó)藥理通訊,2006,23(4):44.

[2]張瀝,張玲霞,徐俊榮,等.熱鹽水致大鼠萎縮性胃炎動(dòng)物模型建立[J].世界華人消化雜志,2002,10(5).

[3]中華醫(yī)學(xué)會(huì)消化病學(xué)分會(huì).全國(guó)慢性胃炎研討會(huì)共識(shí)意見(jiàn)[J].胃腸病學(xué),2000,5(2):77-79.

[4]Chen XY,Lu AP,Zhou SJ.Pathomorphological studies on gastric mucosa of rat model of chronic atrophic gastritis with spleen deficiency[J].Zhongguo Zhongxiyi jiehe Zazhi,1995,15(5):119-121.

[5]Zhu XL,Duo Tian ZH,Song Tian HY,et al.Prolonged effect of ammonia water on gastric mucosa of albino rats[J].Zhonghua Xiaohua Zazhi,1990,10:198-201.

[6]Yoshikazu K,Shunji I.Gastric mucosal protection and cell proliferation[J].Gastroenterology and Hepatology,2000,15:7-10.

[7]馮德仕,韓江南,馮鑫東.自制隔山消散治療萎縮性胃炎45例臨床觀察[J].世界名醫(yī)論壇雜志,2002,(8):24-25.

[8]苑述剛.陰虛氣滯瘀血與慢性萎縮性胃炎的關(guān)系[J].中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合消化雜志,2003,11(5):293-294.

[9]Zhao JB,Cui Q,Zhang X,et al.Weiyankang improves immune function of patients with chronic atrophic gastris[J].Disi Junyi Daxue Xuebao(J Fourth Mil Med Univ),2000,21(7):155-156.

[10]李曉斌.中藥消萎靈對(duì)大鼠慢性萎縮性胃炎胃黏膜血流量和血漿動(dòng)素的影響[J].第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào),2002,23(9):772.