西洋參中人參皂苷Rg1人參皂苷Re和人參皂苷Rb1的含量測定

劉莉，程龍瓊，周世玉

(成都市食品藥品檢測中心，610045)

西洋參為五加科植物西洋參(Panax quinque folium L.)的干燥根，均系栽培品，秋季采挖，洗凈，曬干或低溫干燥即得，具補氣養(yǎng)陰、清熱生津等功用。西洋參中的皂苷為重要的活性成分，現(xiàn)代對西洋參皂苷的含量測定有許多方法，主要采用高效液相色譜法、薄層掃描色譜法等，《中華人民共和國藥典》2005年版一部采用高效液相色譜法對西洋參中的人參皂苷Rg1、人參皂苷Re和人參皂苷Rb1含量進行測定［1］，但分析時間較長，并且人參皂苷Rg1、人參皂苷Re和人參皂苷Rb1較難達到完全分離。筆者在本實驗中采用快速分離液相色譜法［2］，分析時間僅為原來的1/3，并且可將西洋參中的人參皂苷Rg1、人參皂苷Re完全分離，方法的可操作強，結果準確可靠，重復性好，能有效地控制藥材質量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent 1200高分離度快速液相色譜儀;G1312B Bin Pump SL泵;G1314C VWD SL檢測器;HP ChemStation色譜工作站。

1.2 試藥 甲醇、乙腈為色譜純，水為超純水。人參皂苷Rg1(批號:110703-200726)、人參皂苷Re(批號:110754-200421)和人參皂苷 Rb1(批號:110704-200420)均購自中國藥品生物制品檢定所。西洋參藥材來自成都市荷花池中藥材專業(yè)市場，經本所中藥室鑒定為五加科植物西洋參(Panax quinque folium L.)的干燥根。

2 方法與結果

2.1 供試品溶液的制備 取本品粉末(過孔徑0.355mm藥篩)約1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入水飽和的正丁醇50mL，稱定質量，置水浴中加熱回流提取1.5h，放冷，再稱定質量，用水飽和正丁醇補足減失的質量，搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾液25mL，置蒸發(fā)皿中，蒸干，殘渣加50%甲醇適量使溶解，并轉移至10mL量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2 對照品溶液的制備 分別精密稱取對照品人參皂苷Rg1、人參皂苷Re和人參皂苷Rb1適量，加50%甲醇制成每毫升分別含 0.062 20，0.303 8，0.712 0 mg的混合溶液，作為對照品溶液。

2.3 色譜條件 色譜柱:ZOBAX SB-C18柱(4.6mm×50mm，1.8 μm);流動相:乙腈(A)-0.1%磷酸(B)，梯度洗脫(0～25min，5%A→20%A;～35min，20%A→38%A);流速:2.0mL·min-1;測定波長:203 nm;柱溫:35℃，進樣量10 μL。人參皂苷Rg1和人參皂苷Re的分離度＞1.5，理論板數(shù)按人參皂苷Rg1峰計算不低于20000。色譜結果見圖1。

圖1 對照品(A)與樣品(B)HPLC色譜圖1.人參皂苷Rg1;2.人參皂苷Re;3.人參皂苷Rb1Fig.1 HPLC chromatograms of chemical reference substances(A)and samples(B)1.ginsenoside Rg1;2.ginsenoside Re;3.ginsenoside Rb1

2.4 線性關系的考察 精密吸取“2.2”項下對照品溶液 2.0，5.0，10.0，15.0，20.0，40 μL 注入液相色譜儀，以峰面積積分值(Y)為縱坐標，以對照品進樣量(X，μg)為橫坐標進行回歸處理，得人參皂苷Rg1、人參皂苷Re和人參皂苷Rb1的回歸方程分別為:Y=173.537 3X+1.486 7(r=0.999 8);Y=150.809 1X+0.954 4(r=0.999 6);Y=113.484 8X+0.527 0(r=0.999 9)。結果表明:人參皂苷 Rg1進樣量在0.12～2.49 μg 、人參皂苷 Re進樣量在0.61 ～12.15 μg 和人參皂苷 Rb1進樣量在1.42 ～28.48 μg 的范圍呈良好線性關系。

2.5 精密度實驗 分別吸取“2.2”項下對照品溶液10 μL連續(xù)進樣5次，測定峰面積。人參皂苷Rg1、人參皂苷 Re和人參皂苷 Rb1峰面積的 RSD分別為0.9%，0.3%，0.2%。

2.6 重復性實驗 取同一批號樣品6份，按“2.1”項下方法制備供試品溶液，按上述色譜條件進行測定，測得人參皂苷Rg1、人參皂苷Re和人參皂苷Rb1的平均含量分別為 0.12%，1.52%，1.62%;RSD 分別為1.1%，0.3%，0.3%

2.7 加樣回收率實驗 取上述已測定含量的樣品粉末6份，各約0.5 g，精密稱定，精密加入混合對照品溶液10mL，揮去甲醇后，按“2.1”項下方法制備所需溶液，進行測定，求得回收率平均值(n=6)分別為97.8%，98.1%，98.3%;RSD 分別為 1.0%，0.8%，0.4%。

2.8 樣品含量測定 分別精密吸取按“2.1”項下制備的供試品溶液和對照品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，在上述色譜條件下進行測定，結果5批西洋參樣品中人參皂苷 Rg1含量分別為 0.12%，0.11%，0.09%，0.15%，0.12%;人參皂苷 Re 含量分別為1.52%，1.78%，1.04%，1.60%，1.45%;人參皂苷Rb1含量分別為 1.62%，1.92%，1.35%，1.82%，1.71%。

3 討論

用常規(guī)HPLC測定西洋參中人參皂苷Rg1、人參皂苷Re和人參皂苷Rb1的含量，分析時間較長，而且人參皂苷Rg1和人參皂苷Re分離度常常達不到1.5，而使用快速分離液相色譜法可使一次分析時間縮短至原來的1/3，人參皂苷 Rg1和人參皂苷 Re分離度＞1.5，適用多批量檢驗，節(jié)約時間及消耗的總溶劑量，大大提高了檢測的效率。

柱溫對人參皂苷Rg1和人參皂苷Re分離度影響較大，通過比較發(fā)現(xiàn)柱溫越低越有利于人參皂苷Rg1和人參皂苷Re的分離。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)［M］.北京:化學工業(yè)出版社，2005:87.

［2］楊先啟，卓開華，陳軍.RRLC法分離分析人參中的人參皂苷Rg1、人參皂苷Re和人參皂苷Rb1［J］.藥物分析雜志，2008，28(7):1144－1145.