高效液相色譜法測定保濟膠囊中連翹苷含量

屈金鳳

(中國人民解放軍第三軍醫(yī)大學(xué)大坪醫(yī)院藥劑科，重慶 400042)

保濟膠囊是由連翹、山楂、六神曲、半夏、麥芽等提取制成的中藥制劑，具有消食積、和脾胃功效，臨床用于治療宿食不消、胸膈痞滿、噫氣吞酸、不思飲食等癥，療效較好。為有效控制產(chǎn)品質(zhì)量，筆者采用高效液相色譜法測定本制劑中連翹苷的含量，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

Waters 2695/2996型高效液相色譜儀。連翹苷對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為110821－200609);水為純化水;乙腈為色譜純;其余試劑均為分析純;保濟膠囊(市售品，批號分別為100501，100502，100601，100602，100603)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:Waters Symmetry C18柱(200 mm × 4.6 mm，5 μm);流動相:乙腈－水(24∶76);流速:1.0 mL/min;檢測波長為 277 nm;柱溫:30℃。理論板數(shù)以連翹苷計算不低于3000。

2.2 溶液制備

取本品裝量差異項下的內(nèi)容物，研細，取約 0.5 g，精密稱定，加甲醇40 mL，超聲提取30 min，濾過，殘渣用甲醇洗滌2次，每次5 mL，合并濾液，回收甲醇至干，殘渣加30 mL水使溶解;以水飽和的正丁醇萃取5次，每次30 mL;合并水飽和的正丁醇提取液，蒸干，殘渣加50%甲醇使溶解，轉(zhuǎn)移至5mL容量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，用 0.45 μm濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。精密稱取連翹苷對照品適量，加50%甲醇制成每1 mL含0.074 mg的溶液，作為對照品溶液。按保濟膠囊制備工藝，制備缺連翹的陰性樣品，照供試品溶液制備方法制成陰性對照品溶液。

圖1 高效液相色譜圖

2.3 方法學(xué)考察

專屬性考察:照擬訂的色譜條件，取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照品溶液各10 μL，分別注入液相色譜儀。供試品溶液色譜圖中，在與對照品溶液色譜圖相應(yīng)位置上有一相同色譜峰，陰性對照品溶液在此保留時間無吸收峰，表明陰性對照對測定無干擾，選擇性較好。色譜圖見圖1。

線性關(guān)系考察:精密吸取對照品溶液 2，10，15，20，25，30 μL，注入液相色譜儀，以連翹苷進樣量(μg)為橫坐標(X)、峰面積為縱坐標(Y)進行回歸分析，得回歸方程 Y=245103 X－10241，r=0.9999(n=6)。結(jié)果表明，連翹苷進樣量在 0.148 ～ 2.220μg 范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

精密度試驗:精密吸取對照品溶液10 μL，重復(fù)進樣5次。結(jié)果連翹苷峰面積的 RSD為0.57%(n=5)。

穩(wěn)定性試驗:取同一供試品溶液，分別于 0，1，3，6，12 h時進樣。結(jié)果連翹苷峰面積值的 RSD為1.06%(n=5)，表明供試品溶液穩(wěn)定性良好。

重現(xiàn)性試驗:取同一批樣品6份，依法測定，以外標法計算連翹苷的含量。結(jié)果樣品中連翹苷平均含量為0.28 mg/粒，RSD為1.10%(n=6)。

加樣回收試驗:取已知含量的樣品6份，分別加入連翹苷對照品，按擬定的供試品溶液制備方法和測定條件，測定連翹苷含量，計算回收率。結(jié)果見表1。

表1 連翹苷加樣回收試驗結(jié)果(n=6)

2.4 樣品含量測定

按2.2項下制備方法制備供試品溶液，并按2.1項下測定方法測定樣品中連翹苷含量。結(jié)果批號為100501，100502，100601，100602，100603 的 5 批樣品中，連翹苷含量分別為 0.27，0.25，0.28，0.28，0.26 mg/粒。

3 討論

2005年版《中國藥典(一部)》中，部分連翹制劑中連翹苷含量測定采用三氯甲烷進行萃取，文獻報道[1－2]關(guān)于連翹苷的提取采用水飽和正丁醇萃取，2010年版《中國藥典(一部)》連翹藥材中供試品溶液方法采用中性氧化鋁純化制備。為考察不同溶劑提取方法的純化效果，筆者考察了水飽和正丁醇萃取、中性氧化鋁純化提取和三氯甲烷萃取對含量測定結(jié)果的影響，結(jié)合本制劑實際情況，結(jié)果表明正丁醇萃取效果優(yōu)于其他兩種提取方法。還對供試品制備方法中提取溶劑的次數(shù)、用量進行考察，多次試驗表明，文中方法重現(xiàn)性好，結(jié)果準確可靠。

[3]選用乙腈－水作為流動相。以乙腈－水(24∶76)為流動相時，樣品中連翹苷峰與相鄰色譜峰可達到基線分離，峰形對稱，陰性對照無干擾。因此，所建立的含量測定方法可用于保濟膠囊的質(zhì)量控制。

參考文獻:

[1]譚喜瑩，趙陸華，王淑云.HPLC法測定急咳停顆粒中連翹苷的含量[J].中國藥師，2009，12(11):1569.

[2]李芳美，林朝展，甄松峰.RP－HPLC法測定抗病毒口服液中芒果苷和連翹苷的含量[J].中藥新藥與臨床藥理，2009，20(1):47.

[3]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:159.