王淡娜,朱小帆,吳 烜,李順濃
(1.廣東眾生藥業(yè)股份有限公司 ,廣東 東莞 523325;2.廣東華南藥業(yè)集團(tuán)有限公司,廣東 東莞 523325)
固腎合劑是遵循古代名醫(yī)張景岳“人到中年當(dāng)大修”指導(dǎo)思想研制的保健治療藥,由補(bǔ)腎良藥左歸丸、五子衍宗丸和龜齡集(龜齡——取龜長(zhǎng)壽之意)精選淫羊藿、人參、鹿茸、海馬、熟地黃、肉蓯蓉、鎖陽(yáng)等組成。本品溫腎助陽(yáng),固腎滋陰,適用于腎虛所致的精神不振,腰背酸痛,脛酸膝軟,畏寒肢冷,夜尿增多。本研究根據(jù)藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理的有關(guān)規(guī)定,參照藥品標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則[1],對(duì)“中藥中的偉哥”[2]——淫羊藿中淫羊藿苷含量的測(cè)定做了方法學(xué)驗(yàn)證。
UltiMate-3000液相色譜儀(德國(guó)戴安);800離心機(jī)(常州國(guó)華電器有限公司);AUW120D電子天平(日本島津)。
甲醇(色譜純)、乙醇為分析純;純化水;淫羊藿苷對(duì)照品由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供;固腎合劑由廣東華南藥業(yè)集團(tuán)有限公司生產(chǎn)提供。
色譜柱為C18(SMA,4.6mm×250mm,5μm)。流動(dòng)相為:甲醇-水(65∶35),流速1mL/min,檢測(cè)波長(zhǎng)為270nm,理論板數(shù)按淫羊藿苷計(jì)算不低于6000[3]。
2.2.1 對(duì)照品溶液的制備
精密稱(chēng)取淫羊藿苷對(duì)照品13.44mg,置20mL量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻,制成672μg/mL的溶液;精密吸取0.5 mL、1mL、3mL、5m、7mL分別置10mL量瓶中,加甲醇至刻度,搖 勻,制 成 每 1mL 中 含 33.6μg、67.2μg、210.6μg、336μg、470.4μg和原有的672μg的溶液,即得。
2.2.2 供試品的制備
取樣品適量,搖勻,精密量取10mL,置25mL量瓶中,用乙醇稀釋至刻度,搖勻,離心,取上清液,即得。
2.2.3 陰性供試品溶液的制備
取處方中除去淫羊藿的藥材制成的樣品,按供試品溶液的制備即得。
分別精密量取上述對(duì)照品溶液(33.6μg/mL)、供試品溶液和陰性供試品溶液各20μL,注入液相色譜儀,按上述色譜條件測(cè)定,色譜見(jiàn)圖1、圖2、圖3。在對(duì)照品色譜峰相應(yīng)位置,供試品溶液具有相同保留時(shí)間的色譜峰,陰性供試品溶液在對(duì)照品溶液相同保留時(shí)間處無(wú)吸收峰,證明陰性供試品對(duì)本含量測(cè)定無(wú)影響。
圖1 淫羊藿苷對(duì)照品色譜
圖2 淫羊藿陰性色譜
圖3 固腎合劑供試品色譜
取精密吸取淫羊藿苷對(duì)照品溶液20μL,依次進(jìn)樣分析,計(jì)錄色譜圖,以進(jìn)樣濃樣為自變量(X),淫羊藿苷峰面積為因變量(Y)進(jìn)行最小二乘法線性回歸方程。得回歸方程:Y =300387.31X+976.63,r=0.9996。結(jié)果表明,淫羊藿苷濃度在33.6~672μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。
用同一對(duì)照品溶液,連續(xù)進(jìn)樣6次測(cè)定,峰面積的RSD為0.2%。結(jié)果表明精密度良好。
按擬定的含量測(cè)定法對(duì)同一個(gè)樣品測(cè)定5次,測(cè)定結(jié)果為:3.69mg/支 、3.73mg/支、3.76mg/支、3.73mg/支、3.68mg/支,RSD為0.89%。結(jié)果表明重現(xiàn)性良好。
取供試品溶液,分別于0、2、4、6h進(jìn)樣測(cè)定,峰面積的RSD為0.35%,表明供試品溶液在6h內(nèi)測(cè)定結(jié)果穩(wěn)定。
精密吸取3.72mg/支供試品10mL,置25mL量瓶中,精密加入淫羊藿苷對(duì)照品約4mg,加乙醇至刻度,振搖,離心,取上清液,依次進(jìn)樣分析計(jì)算,結(jié)果回收率的平均值為97.2%,RSD為1.6%。詳見(jiàn)表1。
表1 回收試驗(yàn)結(jié)果
取供試品照“2.2.2”制備,進(jìn)樣分析計(jì)算,結(jié)果分別為3.72mg/支、3.63mg/支、4.47mg/支、5.36mg/支和4.21mg/支。含量指標(biāo)(不得少于1.0mg/支)符合規(guī)定。
固腎合劑按法定標(biāo)準(zhǔn)的處方工藝生產(chǎn),按GMP要求控制質(zhì)量,質(zhì)量指標(biāo)有外觀性狀、專(zhuān)屬的薄層鑒別、裝差異、微生物檢查和含量測(cè)定。含量測(cè)定采用了現(xiàn)代科學(xué)儀器和高新技術(shù)液相色譜法,方法學(xué)考察淫羊藿苷濃度與峰面積呈線性關(guān)系,精密度、穩(wěn)定性、回收率均符合要求,陰性試驗(yàn)無(wú)干擾,證明本法準(zhǔn)確可靠,可作為含量測(cè)定控制產(chǎn)品質(zhì)量。
淫羊藿苷是淫羊藿藥材中主要的有效成分,具有雄性激素樣作用[4]。據(jù)說(shuō)嘉慶皇帝服了龜齡集,身體強(qiáng)健,連續(xù)生了九個(gè)兒子[5]。乾隆皇帝活至89歲,望之如60許人,精神矍鑠,健康長(zhǎng)壽的秘訣之一是常服龜齡集[6]。固腎合劑與龜齡集的組成、功效類(lèi)同,如果您不了解固腎合劑,懂得龜齡集就明白固腎合劑。固腎合劑的處方含淫羊藿、鹿茸、海馬、人參、巴戟天、五味子、肉蓯蓉、補(bǔ)骨脂、鎖陽(yáng)等,都是傳統(tǒng)經(jīng)典的補(bǔ)益藥,制成口服液服用方便,是腎虛及中老年的保健治療良藥。
[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典[M].二部附錄.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010.
[2]王惟恒,胡順強(qiáng),強(qiáng)剛.家庭中醫(yī)藥1000問(wèn)[M].合肥:安徽科學(xué)技術(shù)出版社,2006:132.
[3]張虹,湯金城.208種中藥功效及新用[M].鄭州:中原農(nóng)民出版社,2009:350.
[4]常宇,李曼荻.中醫(yī)是本故事書(shū)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2009:286.
[5]楊曉光,趙春媛.中醫(yī)中藥軼事珍聞[M].北京:人民軍醫(yī)岀版社,2007:66.